质谱兼容型蛋白银染试剂盒

质谱兼容型蛋白银染试剂盒

储存条件：4℃保存，保质期 2 年。

产品内容：

实验准备：（每个溶液均需要新鲜配置）

1. 固定液：400mL/次。自备。

   

银染步骤：

1. PAGE 电泳（包括非变性 PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE 等）结束后，将 PAGE 胶转移到装有 200 mL 固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃 30 分钟以去除干扰银染的组分（如甘氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等），倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。

2. 重复上步一次。

3. 将 PAGE 胶转移到 200 mL 浸泡液 A 中，室温摇晃 30 分钟。

4. 用 200 mL 去离子水漂洗 3 次，每次 5 分钟（不要延长或缩短）。

5. 将 PAGE 胶转移到 200 mL 的染色液 B 中，室温摇晃 20 分钟。

6. 用 200 mL 去离子水漂洗 2 次，每次 1 分钟（不要延长或缩短）。

7. 将 PAGE 胶转移到 200 mL 的显色液 C 中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现（一般需要 10 分钟左右）。

8. 将 PAGE 胶转移到 200 mL 终止液 D 中，室温摇晃终止反应。

9. 用 200 mL 去离子水漂洗 3 次，每次 5 分钟（不要延长或缩短）。

10. 切下条带或胶块进行后续的脱银，原位 trypsin 酶解，多肽沉淀和 MS 分析（略）。

MS 前处理步骤（仅供参考）：

1. 脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液（30 mM K3Fe（CN）3 和 100 mM Na2S2O3 的 1：1 的混合液）处理直到黑色消失。

2. 还原：将胶块或胶条置于 10 mM DTT（溶剂为 50 mM NH4HCO3），56℃处理一小时。

3. 烷化：将胶块或胶条置于 55 mM 碘乙酰胺（溶剂为 50 mM NH4HCO3），室温避光处理 45 分钟。

4. 原位 trypsin 酶解：将胶块或胶条置于 10 ng/uL 测序级别的 trypsin 溶液中（溶剂为 25 mM NH4HCO3）37℃处理过夜。

5. 多肽提取：用 5%三氟乙酸抽提酶解液，再用 2.5%三氟乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀（多肽）最后溶于 0.5%三氟乙酸中。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！