土壤游离氨基酸(S-FAA)含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/36246691-b938-4572-a5ef-e61b92bd7c3b.jpg)
溶液的配制:
1、 试剂四:临用前取 1 支加 1 mL 蒸馏水,充分溶解,用不完的试剂-20℃分装保存 2 周;(1 支粉剂溶解后可做 100T,为了延长使用时间,此产品多给 1 支粉剂)
2、 标准品:10 mg 半胱氨酸。临用前加入 4.13 mL 蒸馏水,得到 20 μmol/mL 的半胱氨酸标准溶液备用,用不完的试剂可以 2-8℃保存 4 周。
产品说明:
作为土壤中一类重要的化合物,氨基酸占土壤中全氮的15%-60%,是土壤氮素循环和植物养分供给过程中重要的“库”和“源”,可通过矿化作用满足作物氮素营养的需求,也可以被植物直接吸收利用。另外,氨基酸也是土壤微生物重要的氮源,对于土壤微生物群落结构、数量和活性均有直接影响。因此,研究土壤中氨基酸含量变化规律,对研究土壤氮素循环,及其对植物生理生态变化的影响均有重要意义。
氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应在570nm有特征吸收峰;通过测定570nm吸光度,来计算氨基酸含量。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、30-50目筛、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
土样 37℃/自然风干后过 30-50 目筛,称取约 0.15g 土样,加试剂一 1mL,振荡 2h,10000rpm 离心 10min,取上清液,待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 570nm,蒸馏水调零。
2. 标准品稀释:取60μL 20μmol/mL 标准液加入140μL蒸馏水得6μmol/mL标准溶液进行实验。
3. 操作表:(在 EP 管中进行)
![QQ截图20220615142154.jpg QQ截图20220615142154.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202206/uepic/dac39367-3384-444d-9528-53a613a6111a.jpg)
混匀后盖紧瓶盖(缠封口膜防止水分散失),置于沸水浴中保温 15min,冷却后反复颠倒 EP 管数次,8000rpm离心 5min 后取上清,于 570nm 测定吸光值,分别记为 A 测定管、A 标准管、A 空白管,并计算ΔA 测定管=A 测定管-A 空白管,ΔA 标准管=A 标准管-A 空白管,显色后务必在 30min 内测完。标准管、空白管只需做 1-2 次。
三、S-FAA 含量计算
S-FAA含量(μmol/g 土样)=(C标准品×V标准品×ΔA测定管÷ΔA标准管)÷(V样÷V样总×W)
= 6×ΔA测定管÷ΔA标准管÷W
C标准品:标准品浓度,6μmol/mL;V标准品:反应体系中加入标准品体积,0.04mL;W:样本质量,g;V样:反应体系中加入样本体积,0.04mL;V样总:样本总体积,1mL。
注意事项:
1、 试剂四均需临用前配制,且避光保存。
2、 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应在 570nm 处无吸收峰,因此,570nm 处测定结果不含这两种氨基酸的量。
3、 如果ΔA 测定管大于 1,建议将样本上清液用试剂一稀释后进行测定。
实验实例:
1、 取 0.15g 土样加入 1mL 试剂一进行样本处理,取上清后按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得 A 测定管=0.304、A 标准管=0.603、A 空白管=0.064,计算ΔA 测定管=A 测定管-A 空白管=0.304-0.064=0.240,ΔA 标准管=A 标准管-A 空白管=0.603-0.064=0.539,按样本质量计算含量得:
S-FAA(μmol/g 土样)=6×ΔA 测定管÷ΔA 标准管÷W=6×0.240÷0.539 ÷0.15=17.811 μmol/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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