过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:丙酮自备。
2、 试剂二:临用前加入 6 mL 浓盐酸充分溶解备用,用不完的试剂 4℃保存。
3、 标准品:1mmol/mL H2O2标准液。
产品说明:
H2O2是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收。
技术指标:
最 低检出限:0.002 μmol/mL
线性范围:0.0097-1.5 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、丙酮、浓盐酸、研钵/匀浆器和冰。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌、细胞或组织样本的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一,超声波破碎细菌或细(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织样本的制备:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取全部上清液(注意吸取干净),置冰上待测。
3、血清(浆)样本:按照每 100μL 血清(浆)加入 0.9mL 试剂一的比例充分混匀;8000g 4℃离心 10min,取全部上清液(注意吸取干净),置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至415nm,蒸馏水调零。
2、 将试剂二、三和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。
3、 用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为1μmol/mL的标准溶液。
4、 在EP管中按顺序加入下列试剂
注意事项:
1、 由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。
2、 本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。
3、 如果样本吸光值大于 0.9,建议将样本用试剂一稀释后进行测定。
实验实例:
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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