β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![image 2022061103012862541](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220611/2022061103012862541.png)
溶液的配制:
1、试剂一:临用前每瓶加入 12 mL 双蒸水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存;
2、标准品:5 μmol/mL 的对硝基苯酚溶液。
产品说明:
β-GC(EC 3.2.1.21)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化β-糖苷键水解,具有多方面生理作用:在纤维素的糖化作用中,β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖;β-GC水解萜烯类香气前驱体,使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味;β-GC能够水解植物体内野黑樱苷,释放HCN,从而防止昆虫取食。
β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最 大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或培养细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 1000 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),15000g,4℃,离心 20min,取上清,置冰上待测。
2、组织的处理:称取约 0.2g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;15000g,4℃,离心 20min,取上清,置冰上待测。
二、测定步驟
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、 标准样本的准备:取100μL标准液,加入到400μL蒸馏水中,得到1μmol/mL标准液,再十倍稀释到100nmol/mL,用蒸馏水倍比稀释:50、25、12.5、6.25nmol/mL。100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL做标准液。
3、 加样表:
![image 2022061103020293218](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220611/2022061103020293218.png)
三、β- GC 活力单位的计算
![image 2022061103021743724](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220611/2022061103021743724.png)
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