单宁含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![image 2022060902102707873](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220609/2022060902102707873.png)
溶液的配制:
1、标准品:10 mg 单宁酸。临用前加入 1.175 mL 提取液溶解为 5000 nmol/mL 的标准液。
产品说明:
单宁又称植物多酚,是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物;与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础,如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性,也是影响产品口感的因素之一。
根据光谱特性,单宁在275nm下有较强的紫外吸收,通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、30-50目筛、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
将样本烘干至恒重,粉碎,过 30-50 目筛之后,称取约 0.05g,加入 1mL 提取液,封口膜封口防止液体溅出,于 70℃水浴提取 30min,期间可摇晃数次。12000rpm,25℃,离心 10min,取上清,用提取液定容至 1mL,待测。
二、测定步骤
1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至275nm。提取液调零。
2. 标准溶液的制备:将5000nmol/mL标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL标准溶液。
3. 加样表:
![image 2022060902110660248](https://shzbio.net/upload/ueditor/image/20220609/2022060902110660248.png)
充分混匀震荡 5min,13000g 离心 20min(若上清中仍有颗粒或浑浊,请多次离心至完全清澈)。取 200μL上清液测定 275nm 下的吸光度,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算 ΔA 测定=A 对照管-A测定管,A 标准=A 标准管-A 空白管。
三、单宁含量计算
1.标准曲线的绘制:
以标准溶液的浓度为x轴,以A标准为y轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程中得到x(nmol/mL)。
2.单宁含量计算:
(1)按蛋白浓度计算
单宁含量(nmol/mg prot)=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr
(2)按样本质量计算
单宁含量(nmol/g 质量)=x×V提取÷W =x÷W
Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL(蛋白浓度需重新用PBS提取测定);W:样本质量,g;V提取:提取液体积,1mL。
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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