土壤酸性转化酶(S-AI)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前取 1 瓶加入 15 mL 试剂一充分溶解备用,用不完的试剂 2-8℃保存 2 周;
2、 标准品:10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 试剂一充分溶解,制备 10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用,2-8℃保存两周。
产品说明:
S-AI 在 pH 为 4.5~5.0(酸性)条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 540nm 有特征光吸收,在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 S- AI 活性成正比。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水、30-50目筛、甲苯(不允许快递)。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释:将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.2、0.15、0.1、0.08、0.06mg/mL的葡萄糖标准液备用。
3、 标准液稀释表
4、 样本测定:
三、S-AI 活性计算
注意事项:
1、如果加入试剂三,煮沸 10min 后有混浊物出现,建议离心除去沉淀(10000rpm,2min),取上清测定吸光度;
2、如果吸光值大于 1,可以将上清液再进行稀释;若吸光值较小,可以减少上清液稀释倍数。两种操作均要注意改变公式中的稀释倍数。
实验实例:
1、 取两管 0.1g 林土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,记为 A 测定管、A 对照管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.425-0.054=0.371,标准曲线:y=6.0331x-0.3103,x=0.113,计算酶活得:
S-AI(U/g 土样)=19.2×x÷W=19.2×0.113÷0.1=21.696 U/g 土样。
2、 取两管 0.1g 林土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,记为 A 测定管、A 对照管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.410-0.055=0.355,标准曲线:y=6.0331x-0.3103,x=0.110,计算酶活得:
S-AI(U/g 土样)=19.2×x÷W=19.2×0.110÷0.1=21.12 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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