fluidot全自动培养皿分装仪在食品菌落总数测定中的应用 (倾注法)

fluidot全自动培养皿分装仪在食品菌落总数测定中的应用 (倾注法)

方案摘要：菌落总数测定是食品微生物检测非常重要的一个项目，该项目的检测是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。本方法利用全自动培养皿分装仪可以快速处理菌落总数的培养基的分装与样本混合。

方案详情：

实验原理

食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每 g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。

二、实验准备

2.1、仪器和设备

2.1.1 恒温培养箱:36 ℃±1 ℃,30 ℃士1℃。

2.1.2 冰箱:2 ℃~5℃。

2.1.3 恒温装置:48 ℃士2 ℃。

2.1.4 天平:感量为 0.1 g。

2.1.2 均质器。

2.1.5 振荡器。

2.1.6 无菌吸管:1 mL(具 0.01 ml 刻度)、10 mL(具 0.1 m,刻度)或微量移液器及吸头。

2.1.7 无菌锥形瓶:容量 250 mL、500 mL。

2.1.8无灭菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直径90 mm。

2.1.9 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。

2.1.10 蠕动泵分液器：fluidot  600D。

2.1.11 自动菌落计数仪SHASHIN KAGAKU，PSF-2100。

2.1.12 全自动培养皿分装仪fluidot，FDT-MF80。

2.2、培养基和试剂

2.2.1 平板计数琼脂培养基：

2.2.2 菌落总数测试片

2.2.3 无菌磷酸盐缓冲液

2.2.4 无菌生理盐水

三、检验程序

3.1、菌落总数的检验程序如下：

四、实验步骤

4.1、样品稀释

4.1.1 固体和半固体样品:称取 25g样品置于盛有 225 ml,无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内,8 000 r/min~10 000 r/min 均质1 min~2 min,或放人盛有 225 ml,稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2 min,制成 1∶10 的样品匀液。

4.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取 25 ml,样品置于盛有 225 mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,或放入盛有 225 ml,稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2 min,制成1:10的样品匀液。当结果要求为每g样品中菌落总数时,按 3.1.1 操作。

4.1.3 用1ml,无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),在振荡器上振荡混匀,制成1:100 的样品匀液。

4.1.4 按4.1.3 操作,制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1ml, 无菌吸管或吸头。

4.1.5 根据对样品污染状况的估计,选择1个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),吸取1 ml,样品匀液于无菌培养皿内,每个稀释度做两个培养皿。同时,分别吸取1ml,空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。

4.1.6 全自动培养皿分装仪自动将 15 mL~20 ml的46 ℃~50 ℃平板计数琼脂培养基倾注至培养皿,并自动混合均匀培养皿。

4.2、培养

4.2.1 水平放置待琼脂凝固后,将平板翻转,36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h。水产品 30 ℃±1℃培养72 h士3 h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面蔓延生长的菌落,可在凝固后的琼脂培养基表面覆盖一薄层平板计数琼脂培养基(约4 m),凝固后翻转平板,进行培养。

4.2.2 如使用菌落总数测试片,应按照测试片所提供的相关技术规程操作。

4.3、菌落总数计数