fluidot蠕动泵分液器在生活饮用水大肠埃希氏菌检测中分装NA-MUG培养基的应用（滤膜法）

fluidot蠕动泵分液器在生活饮用水大肠埃希氏菌检测中分装NA-MUG培养基的应用（滤膜法）

方案摘要：根据国家标准,生活饮用水中不应含有病原微生物； 生活饮用水应对微生物的几个指标总大肠菌群、大肠埃希氏菌、菌落总数。本方案利用蠕动泵分液器600D将高压蒸汽灭菌的NA-MUG分装培培养皿中，再通过滤在膜上的样品进行培养，快速达到检测出生活饮用水中大肠埃希氏菌的数量。

方案详情：

1、 实验原理

将总大肠菌群滤膜法检测阳性的滤膜，置于含有荧光底物的培养基上培养，能产生β葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。

二、实验准备

1、培养基和试剂

① MUG营养琼脂培养基（NA-MUG）

② 0.45um孔径滤膜

2、仪器与设备

① 紫外灯：6W，波长为366nm。

② 培养箱。

③ 电子天平。

④ 平皿：直径9CM。

⑤ 无菌试管：约15MM×160MM。

⑥ 无菌吸管：1ML，10ML。

⑦ 移液器：电动移液器：fluidot   5 mL  FDT-1-1-5000

⑧ 手动移液器：fluidot  1 mL  MSP1K

⑨锥形瓶：1000ML。

⑩小倒管。

⑪接种环。

⑫fluidot蠕动泵分液器  600D

三、实验步骤

1、接种：事先用蠕动泵分液器600D将高压蒸汽灭菌的NA-MUG分装培培养皿中，然后在无菌操作条件下将有典型菌落生长的滤膜转移到NA-MUG平板上,细菌截留面朝上,进行培养。实验室生物安全要求应符合GB19489的要求。

2、培养:将已接种的NA-MUG平板于36℃士1℃培养4 h。

4、 实验数据处理

 将培养后的NA-MUG平板在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外灯照射,如果菌落边缘或菌落背面有蓝色荧光产生则表示该菌落为大肠埃希氏菌。

记录有蓝色荧光产生的菌落数并报告,报告格式按总大肠菌群滤膜法的要求。

 总大肠菌群菌落数（CFU/100ml）=   ...........(1)