关于生活饮用水样本自动计测滤膜总大肠菌群数量的应用

关于生活饮用水样本自动计测滤膜总大肠菌群数量的应用

方案摘要：根据国家标准,生活饮用水中不应含有病原微生物； 生活饮用水应对微生物的几个指标总大肠菌群、大肠埃希氏菌、菌落总数。其中菌落总数不能超过100个ＣＦＵ／ｍＬ），总大肠菌群限值为不应检出。本方案利用滤膜法过滤法，将滤膜放置在品红亚硫酸钠培养基培养后计数，达到检测出生活饮用水中的总大肠菌群数量。

方案详情：

1、 实验原理

先通过手动或自动培养皿分装仪分装好选择性培养基，用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样后,将滤膜贴在选择性培养基上培养后,能形成典型菌落，通过自动菌落计数仪计数总大肠菌群数量的方法。

二、实验准备

1、培养基和试剂

① 品红亚硫酸钠培养基

② 乳糖蛋白胨培养液

2、仪器与设备

① 过滤设备：配备滤器和抽滤装置

② 滤膜：孔径0.45um

③ 无齿镊子

④ 恒温培养箱

⑤自动培养皿分装仪   fluidot  FDT-MF80

⑥自动菌落计数仪SHASHIN KAGAKU，PSF-1100。

三、实验步骤

1、滤膜灭菌:将滤膜放大烧杯中,加人纯水,置于沸水浴中煮灭菌3次,每次15min。前两次煮沸后需更换纯水洗涤2-3次,以除去残留溶剂。或使用符合要求的一次性无菌滤膜。

2、滤器灭菌。用点燃的酒精棉球火焰灭菌。也可用高压蒸收灭菌器121℃高压蒸汽灭菌20 min。

3、用镊子夹滤膜边缘部分、将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100 ml水样(如水样含菌数较多，,可减少过滤水样量，或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器阀门，-5.07 x10'Pa（-0.5大气压）下抽滤。

4、过滤完水样后，再抽气约5S，关上滤器阀门，取下滤器，用镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不应留有气泡，然后将平皿倒置，放入36℃±1℃恒温箱内培养24h±2h。

4、 实验数据处理

1、挑取紫红色且具有金属光泽的菌落、深红色不带或略带金属光泽的菌落和淡红中心色较深的菌落进行革兰氏染色、镜检。

2、 凡革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,再接种乳糖蛋白胨培养液，于31℃±1℃培养24h±2h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性。

3、 按公式(1)计算滤膜上生长的总大肠菌群数,以每100 ml水样中的总大肠菌群菌落数(CFU/100ml)报告结果。

     总大肠菌群菌落数（CFU/100ml）=   ...........(1)