fluidot蠕动泵分液器在牙膏金黄色葡萄球菌检验中的应用

fluidot蠕动泵分液器在牙膏金黄色葡萄球菌检验中的应用

方案摘要：金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus，为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。是革兰氏阳性菌 代表，为一种常见的食源性致病微生物。本次利用Baird Parker平板培养法搭配蠕动泵分液器达到快速检测牙膏中金黄色葡萄球菌的含量。

方案详情：

一、实验准备

1、仪器和设备

① 显微镜。

② 恒温培养箱：36℃±1℃。

③ 离心机。

④恒温水浴箱。

⑤ 试管：18 mm×150 mm。

⑥ 载玻片。

⑦ 酒精灯。

⑧ 三角瓶：250 mL。

⑨ 高压灭菌器。

⑩ 手动移液器：fluidot  1 mL  MSP1K

⑪手动移液器：fluidot   10 mL  MSP10K

⑫ 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）FDT-SP01001

⑬无菌吸管：10 mL（具0.1 mL刻度）FDT-SP01010

⑭手动移液器：fluidot  1 mL  MSP1K与 10 mL  MSP10K

⑮电动大容量助吸器：fluidot  0.1-100 mL

⑯吸头：1.5mL   FDT-1500-1-TSF

⑰灭菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直径90 mm。

⑱蠕动泵分液器：fluidot  600D

2、培养基和试剂

① SCDLP 液体培养基

② 营养肉汤

③ 7.5%氯化钠肉汤

④ Baird Parker平板

⑤ 血琼脂平板

⑥ 甘露醇发酵培养基    

⑦ 灭菌液体石蜡

⑧ 兔（人）血浆制备

二、 实验步骤

1、增菌：取1:10的检液10 mL接种到90 mL SCDLP液体培养基中，事先需fluidot  600D蠕动泵分液器分装90 mL SCDLP液体培养基置至三角烧瓶，36℃±1℃培养箱，培养24 h±2 h。

2、分离：自上述增菌培养液中，取1~2接种环，划线接种到Baird Parker平板上，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板上，置36℃±1℃培养48 h±2 h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Parker平板培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养24 h±2 h。

3、染色镜检：挑取血琼脂平板上分纯后的菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5 m~1 m。

4、甘露醇发酵试验：取血琼脂平板上分纯后的菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培养基液面上加入高度为2 mm~3 mm的灭菌液体石蜡，置36℃±1℃培养24 h±2 h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。

5、血浆凝固酶试验：吸取1:4新鲜血浆0.5 mL，置于灭菌小试管中，加入待检菌24 h±2 h营养肉汤培养物0.5 mL，混匀，置36℃±1℃恒温箱或恒温水浴中，每半小时观察一次，6 h之内如呈现凝块即为阳性。同时将已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株的营养肉汤培养物及营养肉汤培养基各0.5 mL，分别加入无菌1:4血浆0.5 mL，混匀，作为对照。也可使用商品化试剂，按照说明书操作，进行血浆凝固酶试验。

6、如选择生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统，可从营养琼脂平板上挑取经纯化的可疑菌落，用无菌稀释液制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统进行鉴定。

三、检验结果报告

被检样品经增菌分离培养后，平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证实为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。