Waters 液相色谱Alliance™ HPLC系统

将使用填充了大颗粒的大体积色谱柱的HPLC梯度方法转换至填充高效CORTECS 2.7 µm颗粒的小体积色谱柱，可轻松缩短分析时间、节省溶剂与样品消耗量，最终节约成本。在转换HPLC梯度方法时，可通过适当调整方法条件和选择相当的色谱柱填料来避免对色谱分离性能的影响。 下述应用纪要展示了针对阿巴卡韦相关化合物的典型HPLC梯度方法进行适当的方法转换。阿巴卡韦(Ziagen®)是一种核苷类逆转录酶抑制剂，被用于抗HIV的治疗。该样品由五种化合物组成，其中四种为主要成分阿巴卡韦的相关物质，如图1所示。此类检测常用的色谱柱为全多孔C18, 5 µm, 4.6 x 150 mm色谱柱。通过转换为CORTECS C18, 2.7 µm色谱柱，可大大缩短该梯度方法的分析时间，同时还能保持目标峰的选择性和分离度。

齐多夫定是一种治疗HIV和AIDS的抗逆转录病毒药。分析齐多夫定 的USP药典方法所使用的是5 µm, 4.0 x 250 mm L1色谱柱1。本应用纪 要将该方法从原始色谱柱转换至CORTECS C18, 2.7 µm, 4.6 x 150 mm色 谱柱和CORTECS C18, 2.7 µm, 4.6 x 100 mm色谱柱，以展示两种可能的 转换方式。2014年8月生效的USP通用章节<621>认可上面所提到的 两种转换方式2。该章节的修改内容允许基于色谱柱柱长与粒径的 比率(L/dp)以及理论塔板数(N)来进行方法转换。本应用纪要将使 用两种CORTECS 2.7 µm色谱柱来检验上述两种转换方式的可行性。 在该转换研究中，仪器性能测试(PQ)将使用中性质量控制标准品 (QCRM)来完成。通过使用能评估系统性能的QCRM，分析人员可对 系统进行监控，从而能够更早地检测到系统问题。QCRM可用作样 品分析时分批进样的质量控制标准品，以确保所采集的数据在系 统正确运行的情况下按照所设定的方法获取。

以HPLC、UHPLC和UPLC系统为对象，通过评估分离度和容量比较了低扩散 LC系统的性能改进。计算了各系统的柱外谱带展宽，UHPLC(Arc Bio系统)和UPLC(H-Class Bio系统)平台的计算结果与预期相同，远小于HPLC系统(Alliance)。利用肽分析专用反相梯度方法举证说明低扩散系统的作用，证明了三种不同LC平台间分离度和峰容量的提升。无论是复杂分析物的常规分析还是方法开发，都需要注意仪器平台之间的性能差异，这样才能够为生物分子的分析提供适合的解决方案。

许多USP梯度洗脱方法都使用填料粒径>3 m的色谱柱，这些方法可在多 种LC系统上有效地运行。本研究在三种不同的LC系统上(Alliance HPLC系统、ACQUITY Arc UHPLC系统和ACQUITY UPLC H-Class PLUS系统)成 功运行了USP富马酸喹硫平杂质分析方法。这三种液相色谱系统上的结果 均符合USP系统适应性要求，并且在分析未知样品中的杂质浓度时得到了 非常一致且重现性良好的结果。