关注
已关注
已认证
粉丝量 0
400-860-2855
仪器信息网认证电话，请放心拨打
【设备更新】NanoTemper助力小分子靶向无序蛋白（IDP）的研究
2023/06/16 13:04
阅读：135
分享：
方案摘要：
方案详情：
NanoTemper Monolith及Promethus助力小分子靶向无序蛋白（IDP）的研究
前列腺癌是全球男性最常见的癌症之一。早期、低级别的癌症可以通过手术或放射成功治疗。对于患有前列腺以外的高级别肿瘤的患者，标准治疗与雄激素治疗相结合。雄激素消融阻断前列腺肿瘤赖以生长和存活的男性激素，最初是有效的；然而，在没有雄激素的情况下，前列腺癌会再次生长，并发展为更具侵袭性的形式，称为去势抵抗型前列腺癌（CRPC）。抗去势前列腺癌患者不可避免地会对抗雄激素疗法产生耐药性，部分原因是雄激素受体（AR）突变或剪接变体能够恢复AR信号。
上海奕拓生物和上海中国科学院生物与化学交叉研究中心朱继东/朱光亚团队合作的研究显示配体活化的AR可以形成转录活性的聚合物。AR的结构化和非结构化区域都有助于AR的有效相分离，无序N端起主要作用。AR液-液相分离行为具有转录活性和抗雄激素功效。抗雄激素可以以配体独立的方式促进AR抗性突变体的相分离和转录活性。该研究进行了基于相分离的表型筛选，并鉴定了ET516分子，ET516特异性破坏AR聚合物，有效抑制AR转录活性，并抑制表达AR抗性突变体的前列腺癌细胞的增殖和肿瘤生长。研究的结果表明液-液相分离是一种新的耐药机制，并表明靶向相分离可能为药物发现提供一种可行的途径。
https://doi.org/10.1038/s41589-022-01151-yIF: 16.174 Q1
在这项研究中，来自于NanoTemper的微量热泳动MST互作技术以及nanoDSF蛋白稳定性技术发挥了重要的作用。
图注：微量热泳动(MST)实验，作者用AR (NTD，1-555aa)–mEGFP
蛋白与不同浓度的ET516（蓝色）以及Enza（红色）孵育进行MST实验。mEGFP蛋白用作阴性对照（绿色）。使用亲和力分析软件拟合数据。结果表明，ET516与NTD的亲和力Kd值25µM，表明ET516可以作为很好的候选分子。
图注：与ET516孵育的AR AF-1（144-450 aa，0.3 mg/mL）中的TSA测定
加热过程从25℃增加到81.5℃，升温速率为1℃/min。记录发射强度比（Em350nm\/Em330nm），分析荧光强度比（左图）和一阶导数（右图）。
监测蛋白内源荧光的nanoDSF实验显示，ET516处理后AR AF-1中的荧光比率呈剂量依赖性下降，进一步证实了ET516和AF-1的相互作用。热位移TSA结果表明，AF-1是典型的固有无序蛋白，其在加热过程中没有明显的发射强度变化；然而，与ET516孵育诱导了AF-1熔化温度的剂量依赖性变化，表现为球状蛋白，表明ET516与重新分布后稳定的构象AF-1结合。Promethus系列仪器通过内源荧光检测，无需加入染料，对缓冲液没有要求，高精准的检测精度可以保证即使是极小结构变化造成的Tm值shift都可以很好表征。
对于固有无序蛋白，因为其蛋白的无序性的特性，其他常规方法难以进行检测。在这篇工作中，通过MST技术及nanoDSF技术，很好的筛选到目的分子。
Monolith系列分子互作仪基于MST技术，不依赖于分子量的改变，蛋白用量少，对于蛋白聚集耐受度高，可以轻松表征不同类型的分子间相互作用。
生物分子互作仪 Monolith X
Promethus系列仪器，以nanoDSF技术为核心，通过检测蛋白内源荧光监测蛋白的稳定性，该技术检测蛋白浓度宽泛，低浓度也可轻松表征，媲美DSC的高精准检测结果，快速高通量的检测速度，在小分子筛选上具有不可比拟的优势。
蛋白稳定性分析仪 PR Panta
下载本篇解决方案：
更多
结构生物学膜蛋白研究必看！
NanoTemper 与美国麻省理工学院 Imperiali 实验室及德国 Cube Biotech 公司进行深度合作，共同开发了一种更加简化的工作流程，通过使用Prometheus Panta 多参数蛋白稳定性分析仪进行快速筛选来自NativeMPTM平台的共聚物纳米盘（Copolymer nanodiscs），从而事半功倍的找到结构分析的最佳溶解条件。
制药/生物制药
2024/10/30
【设备更新】NanoTemper抗体药物开发实验指南
我们将介绍用于检测生物治疗药物稳定性的各种技术，阐明单克隆抗体配方的来龙去脉，介绍新药临床试验申请(IND)和新药上市申请（NDA）的典型时间线，并深入研究存储条件如何影响单抗稳定性。
制药/生物制药
2023/07/14
【设备更新】生物制剂研究人员必备宝典-DLS动态光散射技术指南
动态光散射（DLS）是一种强大的技术，是一种测量颗粒大小、低聚化和分散性，以及环境变化（如药物偶联物的添加或储存缓冲液的变化）对它们的影响的方法。可提供有关生物制剂制备物的纯度和聚集状态的信息，并增加对候选物稳定性的更深入了解。 阅读DLS技术指南电子书，了解其工作原理，以及它如何帮助您优化候选药物的筛选过程。 我们介绍了在整个生物制药流程中，DLS技术如何帮助您改善每一个决策，同时也提供了一些设计DLS实验的实用技巧。
制药/生物制药
2023/04/06
【设备更新】MST 技术在中药成分靶点检测中的解决方案
中药成分及天然产物的药效是通过与多个靶点的相互作用来实现的，它们与靶蛋白瞬时、弱亲和力相互作用，这种作用机制的复杂性为其靶点鉴定带来很大挑战。 传统的基于亲和力的靶点垂钓方法取决于小分子化合物和靶点蛋白质的亲和力，这种结合需要足够强，以便从整个蛋白质组中分离目标蛋白质，而NanoTemper的微量热泳动技术（MST）检测结合亲和力的范围非常广，可发现从皮摩尔级 (pM) 到毫摩尔级 (mM) 的极强和极弱结合分子。
制药/生物制药
2023/06/25
公司名称： 诺坦普科技（北京）有限公司
公司地址： 北京市朝阳区东三环北路五号北京发展大厦1609-1611室 联系人： NanoTemper市场部 邮编： 100004 联系电话： 400-860-2855
仪器信息网APP
展位手机站