2022/08/17 16:13
阅读:156
分享:免费下载
方案摘要:
产品配置单:
NanoTemper Prometheus Panta 蛋白稳定性分析仪
型号: Panta
产地: 德国
品牌: NanoTemper
面议
参考报价
联系电话
方案详情:
方案标题: 通过早期发现筛选预测抗体可开发性
检测样品:单克隆抗体
检测项目:抗体可开发性评估
应用领域: 制药
方案摘要:
Merck的研究人员在mAbs杂志分享了抗体可开发性评估流程。在早期筛选阶段使用高通量分析方法对抗体进行表征(比如纯度、热稳定性、结合活性等)之后将产生的大量实验数据上传至数据管理系统,进行关联分析排序,从而选择具有最小风险的抗体进行开发。
方案详情:
研究人员对152个单克隆抗体使用不同的分析方法(包括UP-SEC 聚集,PR检测解链温度Tm,聚集起始温度Tagg,毛细管电泳检测纯度等)进行高通量检测后,制作关联分析热图,根据关联性强弱进行分群(图2)。相关系数为1,红色区域为强烈的正相关;相关系数为0,灰色区域无相关性;相关系数为-1,蓝色区域为强烈的负相关。
图1. spearman相关系数热图
表1为相关性最高的实验结果(如spearman相关系数ρ>0.5,p<0.001),可以看到使用PR检测到的解链起始温度Tonset,解链温度Tm以及聚集起始温度Tagg有很高的相关性,并且Tonset,Tm及Tagg与高等电点 ,抵抗聚集体形成之间呈现非常强的关联,接下来研究人员将这些指标应用到抗体的筛选中。
表1. 相关性最强的实验结果
mAb87纯化后由低pH调节到7时出现白色沉淀,造成20%的蛋白损失并出现2%可溶性聚集,可能是因为pI较低造成。pI较低也可能会带来风险,例如影响宿主细胞蛋白或病毒蛋白的清除,因此研究人员生产了9个variants以提高pI。根据10种抗体的PR,SEC,毛细管电泳等检测结果(图3)进行可开发性比较后发现mAb107(红框处)的纯度,热稳定性,聚集倾向,等电点均有明显的提升。
图2. mAb87及其variants可开发性比较
研究人员选取mAb87,mAb107及其突变体mAb111进行大量纯化检测后发现,mAb107及其突变体mAb111几乎所有的下游工艺开发属性均得到了提升(图4),例如溶解度提升,自相互作用变弱。50℃放置10天后用流式细胞仪计算颗粒数量,从mAb87的8053个降低至不到2000个。结果表明通过SEC、热稳定性Tonset,Tm、胶体稳定性Tagg进行早期的可开发性评估,可以快速锁定属性最佳的候选分子。
图3. 工艺开发属性对比
在进行早期可开发性评估时,通常可用于检测的样品量较少并且需要检测结合活性、稳定性等多种参数。PR只需10μl样品,一次运行可检测48个样品并同时得到解链起始温度Tonset,解链温度Tm,聚集起始温度Tagg三种关键参数,帮助用户降低成本,提升筛选效率,快速发现最合适的候选抗体。
原文链接:https://doi.org/10.1080/19420862.2020.1743053
仪器链接
https://www.instrument.com.cn/netshow/C442003.htm
https://www.instrument.com.cn/netshow/C281822.htm
https://www.instrument.com.cn/netshow/C281825.htm
下载本篇解决方案:
更多
结构生物学膜蛋白研究必看!
NanoTemper 与美国麻省理工学院 Imperiali 实验室及德国 Cube Biotech 公司进行深度合作,共同开发了一种更加简化的工作流程,通过使用Prometheus Panta 多参数蛋白稳定性分析仪进行快速筛选来自NativeMPTM平台的共聚物纳米盘(Copolymer nanodiscs),从而事半功倍的找到结构分析的最佳溶解条件。
制药/生物制药
2024/10/30
【设备更新】NanoTemper抗体药物开发实验指南
我们将介绍用于检测生物治疗药物稳定性的各种技术,阐明单克隆抗体配方的来龙去脉,介绍新药临床试验申请(IND)和新药上市申请(NDA)的典型时间线,并深入研究存储条件如何影响单抗稳定性。
制药/生物制药
2023/07/14
【设备更新】生物制剂研究人员必备宝典-DLS动态光散射技术指南
动态光散射(DLS)是一种强大的技术,是一种测量颗粒大小、低聚化和分散性,以及环境变化(如药物偶联物的添加或储存缓冲液的变化)对它们的影响的方法。可提供有关生物制剂制备物的纯度和聚集状态的信息,并增加对候选物稳定性的更深入了解。 阅读DLS技术指南电子书,了解其工作原理,以及它如何帮助您优化候选药物的筛选过程。 我们介绍了在整个生物制药流程中,DLS技术如何帮助您改善每一个决策,同时也提供了一些设计DLS实验的实用技巧。
制药/生物制药
2023/04/06
【设备更新】MST 技术在中药成分靶点检测中的解决方案
中药成分及天然产物的药效是通过与多个靶点的相互作用来实现的,它们与靶蛋白瞬时、弱亲和力相互作用,这种作用机制的复杂性为其靶点鉴定带来很大挑战。 传统的基于亲和力的靶点垂钓方法取决于小分子化合物和靶点蛋白质的亲和力,这种结合需要足够强,以便从整个蛋白质组中分离目标蛋白质,而NanoTemper的微量热泳动技术(MST)检测结合亲和力的范围非常广,可发现从皮摩尔级 (pM) 到毫摩尔级 (mM) 的极强和极弱结合分子。
制药/生物制药
2023/06/25