实验室的小师妹,天天一脸崇拜的的跟着师兄学实验,“师兄,实时定量PCR曲线好完美啊”“师兄,Western Blot条带好漂亮啊,都没有杂带”……,这样下去,我师姐的威信如何立得住,师姐在实验室这么多年,也不是白学的,必须在小朋友面前秀秀我高大上的组织免疫荧光的片子,怎么也得让他们崇拜一下,接下来就和大家分享下免疫荧光相关的经验!
什么是免疫荧光
免疫荧光是在免疫学,生物化学和显微技术的基础上建立的一项技术,再用荧光抗体(或者)抗原作为探针检测细胞或组织内相应的抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光在细胞或者组织的表达,从而确认抗原或抗体的性质和定位。常用的方法有直接法和间接法。
间接法实验步骤说明
冰冻切片为例:
1.切片固定:冰冻切片从冰箱拿出来复温,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮完全干后于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
2.抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)的修复盒中,于微波炉内中低火5min进行抗原修复。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
3.封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加3%BSA均匀覆盖组织,室温封闭30min。
4.加一抗:甩掉封闭液,在切片上滴加配好的一抗,平放于湿盒内4°C孵育过夜(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)。
5.加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的荧光二抗覆盖组织,避光室温孵育50min。
6.DAPI复染细胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。
7.封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
8.镜检拍照:切片于Echo Revolve Gen2正倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
显微镜在最后结果的呈现中发挥重要作用,我用的Echo Revolve Gen2正倒置荧光显微镜那是其他小伙伴羡慕的对象。
第一:高颜值,2021缪斯(MUSE)国际设计奖铂金奖 。
第二:独有的实时DHR数字处理技术,通过数字化图像处理,在镜下实时显示高分辨图像,清晰展现样本细微结构,颠覆传统成像效果。
第三:Z轴高精度自动层扫,配合实时DHR数字降噪技术,在保持高分辨率的同时,对较厚样本进行全景深扫描合成,实现全景深观察。
下面秀一秀师姐的荧光图
部分图源:网络,侵删
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