文献速递|Naica数字PCR技术检测血浆中circRNA：中山大学科学家发现circGSK3β可作为食管鳞癌早期检测生物标志物

食管鳞状细胞癌

食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC，简称食管鳞癌）在我国占食管癌的90%以上。食管癌是发病率较高的恶性肿瘤之一，其发病率在全球范围内居恶性肿瘤第8位，在我国大陆居各类肿瘤第5位，其死亡率在全球范围居恶性肿瘤第6位，在我国大陆居第4位。（源自：中国早期食管鳞状细胞癌及癌前病变筛查与诊治共识，2015年，北京）。  

环状核糖核酸

环状核糖核酸即circRNA（Circular RNAs）是一类不具有5’末端帽子和3’末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。目前发现的circRNAs主要来源于基因外显子exon，但还有其他类型，比如来源于内含子intron，基因间intergenic，反义链antisense，重叠区sense overlapping。

作为一类新型的非编码核糖核酸，circRNA由于反式剪切，大量存在于真核细胞的细胞质中（定位于细胞质是miRNA海绵机制研究的充分必要条件），少部分内含子来源的circRNA存在于核酸内，具有一定的组织特异性、时序和疾病特异性，非常适合做分子标志物，故此近年来在人类癌症研究中，引起了人们的广泛关注，但是circRNA在食管鳞状细胞癌中的作用(ESCC)仍不清楚。

近日中山大学附属孙逸仙医院广东省恶性肿瘤表观遗传学和基因调控重点实验室，在由BioMed Central出版社发行的英国Molecular Cancer杂志上发表“circGSK3β promotes metastasis in esophageal squamous cell carcinoma by augmenting β-catenin signaling”。这项研究旨在识别调节ESCC进程中新的circRNA，并探索其在ESCC的调节机制和临床意义。该杂志影响因子10.679。（详情请见文末）

文献内容

该研究得出结论:

circGSK3β对于ESCC转移有重要的促进作用，有可能成为ESCC的治疗新靶点。同时血浆中circGSK3β水平有可能作为ESCC一种新的诊断和预后指标检测的生物标志物。

方法：

使用微阵列方法筛选ESCC和临近正常组织之间表达有差异的circRNA。在体外和体内研究特定的差异表达的circRNA (circGSK3β)对肿瘤进展的影响。

使用数字PCR方法对ESCC患者、良性病变患者和健康对照组血浆样本中circGSK3β分析，并对血浆样本中circGSK3β与ESCC检出率进行相关性研究。

结果：

证明circGSK3β的表达上调与晚期ESCC患者的临床分期和不良预后呈正相关。同时进一步揭示了circGSK3β通过与GSK3β的直接相互作用和抑制GSK3β活性对ESCC细胞的迁移和侵润有促进作用，展现一种circRNA在癌症进展中的新作用机制。

更重要的发现是，血浆中circGSK3β的表达可作为ESCC和ESCC早期检测生物标志物，AUC分别为0.782和0.793。 

文中描述的血浆中circGSK3β水平，使用数字PCR进行检测，方法描述如下所示：

可复制此链接地址进行全文下载：

https://molecular-cancer.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12943-019-1095-y  

Naica数字PCR平台

法国Stilla Technologies Naica数字PCR平台是实现DNA/RNA绝对定量的技术工具，自动生成和组装单层平铺的微滴，进行单分子PCR扩增，通过高分辨率的三色荧光通道检测，自动QC质控，识别三色荧光中有效的阴阳性微滴，从而达到目的DNA/RNA的绝对定量检测。同时提供原始数据、单微滴追溯等功能，确保数据真实可靠。

 只需一步加样操作，无需标准品和标准曲线是真正的绝对定量系统。通过对模板的有限稀释，耐受抑制剂能力强，更有利于临床、环境等复杂样本的检测。

 有效微滴数~30000/样本，实现低浓度、低丰度的核酸样本进行准确定量。

 闭式芯片设计，样本间独立，避免了加样交叉污染风险，同时防止扩增后的气溶胶污染，保证结果安全可靠和实验环境安全。

北京深蓝云生物科技有限公司承担法国Stilla Technologies公司中国技术示范与服务中心职能，致力于为用户提供新型生命科学研究仪器和分析产品以及优化的整体解决方案。

期刊介绍

Molecular Cancer杂志主要接收靶向治疗、分子与细胞生物学、基因组学、遗传学、病理与肿瘤免疫学等领域相关的学术论文。

在230本肿瘤学学SCI期刊中，Molecular Cancer杂志的SCI影响因子排名前11位。据WOS检索结果：Molecular Cancer在2017-2018年共发表357篇论文，已在2019年被引用4221次（2019.11.1），2017-2018年发表的论著、综述文章为351篇，即时影响因子为4221/351=12.026分。