2019年突然爆发的新冠疫情在今天仍深刻的影响着我们的生活，对新冠病毒SARS-CoV-2的防范已成为我们每个人日常生活的一部分，研究者们在新冠病毒的治疗、防护、免疫等方面不断探索，帮助我们认识病毒、战胜疫情。近日，来自美国犹太健康中心的一篇报道帮助我们更深入的理解新冠病毒的发病原理，该文献发表于《Nature commuunications》，揭示了影响SARS-CoV-2传染性和新冠肺炎临床结果的可能机制。新冠肺炎是由SARS-CoV-2引起的，而作者研究发现宿主蛋白ACE2和TMPRSS2在呼吸道中的表达与病人对新冠肺炎的感染相关，SARS-CoV-2可以利用宿主蛋白ACE2和TMPRSS2作为进入因子侵入人体。研究者对695名儿童的鼻呼吸道转录组数据进行分析，发现影响ACE2和TMPRSS2表达的基因突变在世界不同人群中的频率不同，如表达减少相关的TMPRSS2 eQTL变异体rs1475908，东亚人(AF=38%)的等位基因频率最高、欧洲人AF为35%、非洲人AF为26%和德系犹太人AF为23%，而拉丁美洲人AF(AF=17%)的等位基因频率最低。与表达增加相关的两个TMPRSS2 eQTL变异在世界人群中表现出更多不同的等位基因频率。研究者发现TMPRSS2是粘液分泌网络的一部分，通过IL-13（白细胞介素-13）的作用被2型(T2)炎症改变从而上调，并且通过呼吸道病毒的干扰素反应使ACE2表达上调。研究者使用Echo Revolve正倒置一体显微镜进行免疫荧光实验证实，在呼吸道上皮的蛋白质水平上也可观察到IL-13和病毒感染介导的ACE2表达的影响。a-d GALA II哮喘患儿的体外鼻呼吸道上皮细胞ALI培养的免疫荧光染色, (a)IL-13处理5天；(b) IL-13处理5天并HRV-A感染24h的上皮细胞；(c)纤毛细胞的代表性图像(ACT;红色)和ACE2阳性(白色)细胞。核用DAPI(蓝色)染色。ACE2蛋白位于根尖腔室，IL-13处理后降低，HRV-A感染后升高。f-h、j非哮喘儿童的体外鼻呼吸道上皮细胞ALI培养的免疫荧光染色 (f) IL-13处理21天；(g) IL-13 和DAPT处理21天的上皮细胞；(h)纤毛细胞的代表性图像（ACT；红色)，基底细胞(KRT5;绿色)，ACE2阳性(白色)细胞。核用DAPI(蓝色)染色。ACE2蛋白位于根尖腔室，IL-13处理时ACE2蛋白降低，DAPT处理时ACE2蛋白升高；（j）健康人的体外鼻呼吸道上皮细胞ALI培养的免疫荧光染色。所有的图像都使用Echo Revolve正倒置一体显微镜拍摄。研究者最终确认儿童对常见冠状病毒感染的呼吸道反应，并发现这些冠状病毒感染产生类似于其他病毒物种的宿主反应，包括IL6和ACE2的上调。该研究有助于进一步揭示新冠病毒的致病机制，使我们对新冠肺炎的了解更加深入。希望我们可以早日解析新冠病毒致病的全部机制，战胜新冠病毒。Revolve FL应用highlight：1.自动切换多色荧光和透射光通道，快速成像；2.自动merge多通道检测图像，快速定位；3.触摸式Retina视网膜屏，高分辨率显示和注释。Revolve正倒置一体显微镜Revolve展现了其非凡的灵活性，可以轻松地实现正置和倒置显微镜转换，创新性地把正倒置显微镜合二为一，开启了显微镜Hybrid时代。☑   视网膜屏显示技术：比拟目镜人眼观察效果。☑   全视野观察： 更清晰，更方便。☑   多通道荧光：多达4个EPI荧光通道，无须暗室，就可以轻松快速地完成多色荧光显微分析。☑   自动化操作：通过iPad Pro点触操控相机及荧光通道之间的切换，实现了完全自动化操作。☑   App应用软件：基于IOS的Echo App是与Apple团队合作研发的专业显微镜软件。☑   精湛的工艺尽显高端品质：实现非凡的性能。申请试用关注“深蓝云生物科技”公众号→云活动→免费试用。参考文献：Sajuthi S P , Deford P , Li Y C , et al. Type 2 and interferon inflammation regulate SARS-CoV-2 entry factor expression in the airway epithelium[J]. Nature Communications, 2020, 11(1).DOI：10.1038/s41467-020-18781-2

截止目前，针对疫情相关人群做新冠肺炎筛查时，主要采用鼻咽拭子核酸检测，原因是方便快捷，适合大规模筛查。但是，对于一些无症状感染者或轻症感染者来说，感染后病情恢复得很快，可能3至5天咽部核酸就检测不到了。通过研究发现，一部分感染者粪便或肛拭子核酸阳性的持续时间比上呼吸道持续时间更长。因此，增加肛拭子等复杂样本的核酸检测能够提高感染者检出率，减少漏诊。日前，湖南省疾控研究人员对已经确诊的3例新型冠状病毒肺炎患者不同时间的全血、尿液、粪便标本同时进行qPCR和Naica数字PCR（cd-PCR）的核酸检测，并比较了两种方法检测各类样本中2019-nCoV的差异性，提出改进2019-nCoV核酸检测的综合策略，为核酸检测阴性患者提供更多诊断支持。本实验中数字PCR在病例发病早、中、晚期标本中均能检测到阳性微滴，而qPCR漏检了发病小于5天的标本，检测到的阳性核酸均以中晚期为主。这也解释了受检测方法灵敏度的局限性，目前大部分假阴性患者都处于疾病发展的早期。此外，在本次实验中数字PCR在重症病例的三种标本中均测到阳性微滴，但因为血、尿和可疑粪便的标本病毒载量偏低，qPCR检测均为阴性。总之，数字PCR技术可以有效克服qPCR灵敏度不足的难题，捕捉到病毒载量较低的血液、尿液和可疑的粪便或肛拭子标本，是qPCR的有益补充，为帮助临床医生准确判断早期感染及患者是否真正痊愈起到了积极的作用，对2019-nCoV的长期监控有重要的意义。Naica数字PCR技术进行新冠病毒检测，依托高灵敏度、全封闭、判读快捷等优势，可应用于以下场景：1. 低浓度样本检测，如ct值>37个循环的样本，ct值为零的高危密接样本，排除假阴性结果；2. 医院样本的准确复核；3. 出院标准的确证；4. 阳性病人的出院后定期跟踪检测；5.取样困难病人的复杂样本检测：血浆、粪便、尿液等；6.捐献库、样本库、血库中样本新冠筛查；7.群采检测和单采群检，提高日检测能力，筛选灵敏度高。新冠相关文章：• 文献速递｜湖南省疾控两篇连发Naica™数字PCR系统检测精子/全血/尿液/粪便中的   新冠病毒SARS-CoV-2• 数字PCR方法高灵敏度群体检测新冠病毒解决方案：基于Naica自动化数字PCR系统• 深蓝云生物最新三通道高灵敏全封闭数字PCR检测新冠病毒整套方案• Naica数字PCR系统解决方案抗击Covid-19，可靠检测SARS-CoV-2病毒同时获得病毒载量

考虑到mRNA转录的高度动态特性以及样品处理和下游处理步骤中引入的潜在变量，RT-qPCR工作流程的每个步骤的标准化方法对于可靠和可重现的结果至关重要。MIQE为这种方法提供了一份包含85个参数的清单，以确保质量结果符合任何期刊的接受标准。接下来，小编将为大家详细介绍如何应用MIQE指南来建立一个可靠的RT-qPCR实验流程。1、实验设计正确的实验设计是任何基因表达研究的关键。由于mRNA转录对与研究过程无关的外部刺激敏感，因此严格控制和设计实验条件的工作是十分重要的。其中包括了确定实验程序、对照组、重复组的类型和数量、实验条件以及各组内的样品处理方法等，这些对于最小化变异性至关重要（表1）。2、RNA提取及质控样品需-80℃冷冻或使用RNA储存溶液进行储存。RNA提取程序应包括DNA酶处理步骤，以去除任何的基因组DNA污染。确保仅使用高纯度（无污染物）和高完整性（未降解）的RNA是RT-qPCR实验工作流程中最关键的一点。RNA样本中的杂质可能导致RT和PCR的抑制，从而导致不同和不正确的定量结果。由于样品纯度和完整性不相关，因此应评估两者确定RNA样本符合下游工作流程的最低验收标准。3、逆转录考虑到RNA酶在环境中的普遍存在，建议在质量控制评估后立即将总RNA样本反转录成cDNA。这将避免RNA样品在转化为cDNA之前多次冷冻/解冻而降解的风险。对于RT步骤，关键是确保提取的RNA样本中转录基因组的一致性和完整性。建议使用相同数量的总RNA，并保持所有实验样本的反转录反应时间，以最小化生物复制之间的变异性。4、引物和扩增子设计引物设计和靶序列的选择是保证扩增产物特异性和高效性的关键。目前有许多软件或在线网站可设计引物对和确定扩增子，比如DNAMAN、Primer Premier、Oligo、Beacon Designer、Primer-Blast、BathPrimer、Primer3 Plus等等。5、qPCR验证qPCR验证是使用一组标准样品对引物退火温度、反应效率和特异性的适度范围进行评估的方法。具体步骤如下：1)根据仪器类型，选择合适的耗材和qPCR试剂；2)配置不同的PCR反应体系，凝胶电泳检测引物适宜浓度以及特异性；3)设置温度梯度测试引物适宜退火温度；4)实验设置NTC、NRC、POS和NEG等对照组，来监控实验体系或污染；5)标准曲线的建立(评价PCR效率)。6、内参基因的选择在RT-qPCR实验中，内参基因可以用于校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。一个好的内参基因应在不同时空样本或不同处理样本中具有相对稳定的表达水平，常见的有ATCB、GAPDH、β-actin、18S rRNA等。7、实验重复性基因表达实验中有两种可能影响结果的变异来源：1)由于个体有机体、组织或细胞样品之间基因表达水平的固有差异引起的生物变异性；2)实验过程本身的技术变异性，通常与移液器误差、操作误差或样品质量和数量有关。为了减轻生物和技术变异性的影响，一般认为至少三次生物学重复和技术重复。看完整个RT-qPCR实验流程，您是不是拨开RT-qPCR神秘的面纱了呢，现在快快来申请Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统，来感受Azure Cielo™带给您的真实可靠的RT-qPCR数据。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。

PM2.5是指直径小于等于2.5微米的空气污染颗粒物，2015年全球暴露于环境中的PM2.5导致420万人死亡和1.031亿人残疾。PM2.5吸入人体后，首先遇到由呼吸道上皮高度特化的分泌细胞和纤毛细胞形成的粘液纤毛屏障。在之前的相关研究中，人们已经确认PM2.5与呼吸系统不良有关，但PM2.5诱导的肺病理生物学机制仍知之甚少，专家猜测PM2.5可能涉及呼吸道上皮的细胞和分子变化。美国研究人员研究报告表明PM2.5刺激可以使呼吸道上皮细胞直接产生相应的转录反应。这项发表在《美国呼吸细胞与分子生物学杂志（American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology）》上的研究提取了PM2.5污染样品中的有机和水溶性成分并找出其化学表征。对这些PM2.5提取物的致病物的筛选采用人鼻粘膜纤毛上皮细胞培养物的全转录组反应进行检测（转录组测序）。研究者们将提取到的PM2.5中的污染物分为有机（OE）和水溶性成分（WE）以及未单独分离的NIST作为对照。检测发现PM2.5的非水溶性有机提取物(OE)引发了粘膜纤毛上皮细胞的有效剂量依赖性转录反应。当细胞暴露于中等剂量OE中改变了424个基因的表达，包括芳香烃受体信号激活和白细胞介素-1炎症程序。根据这种改变产生了由八个功能富集组定义的运行经验反应基因网络，它通过CYP1A1、IL1A和IL1B表现出高连通性，OE暴露还强有力地激活了粘液分泌表达程序(大于100个基因)，其中包括粘液化生的转录驱动因子(SPDEF，FOXA3)。当细胞暴露于较高OE剂量中改变了1240个基因的表达，并进一步加剧了中等剂量下观察到的表达反应，包括粘液分泌程序。较高的OE剂量显著增加了MUC5AC/MUC5B凝胶形成粘蛋白的表达比例，并强烈下调了纤毛细胞表达程序，包括关键的纤毛细胞转录因子(FOXJ1，MCIDAS)。慢性OE刺激诱导粘液化生样重塑，其特征为MUC5AC+分泌细胞和MUC5AC粘液分泌增加。获得分子和细胞层面的结果后，为了从组织学上证实这些结果，研究人员采用Alcian Blue-Periodic Acid-Schiff (AB-PAS)染色法检测培养物以鉴定粘蛋白阳性细胞，发现慢性OE刺激培养物与模拟刺激培养物中的粘蛋白阳性细胞数量更高。通过Echo Revolve显微镜对荧光免疫组织化学染色检测发现，慢性OE刺激下，MUC5AC荧光标记明显增多，其阳性细胞增加，表明这种粘蛋白是慢性OE刺激下AB-PAS染色增加的主要来源。这些数据表明，慢性OE刺激分别诱导MUC5AC+和MUC5B+粘液分泌细胞同时扩增和减少，导致这些粘蛋白分泌的相应变化。慢性OE刺激诱导粘液化生样上皮重塑可能是与高PM2.5暴露相关不良呼吸疾病的基础。Revolve正倒置一体显微镜Revolve展现了其非凡的灵活性，可以轻松地实现正置和倒置显微镜转换，创新性地把正倒置显微镜合二为一，开启了显微镜Hybrid时代。☑   视网膜屏显示技术:比拟目镜人眼观察效果。☑  全视野观察: 更清晰，更方便。☑   多通道荧光:多达4个EPI荧光通道，无须暗室，就可以轻松快速地完成多色荧光显微分析。☑   自动化操作:通过iPad Pro点触操控相机及荧光通道之间的切换，实现了完全自动化操作。☑   App应用软件:基于IOS的Echo App是与Apple团队合作研发的专业显微镜软件。☑   精湛的工艺尽显高端品质:实现非凡的性能。

实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。由于其精准度好、灵敏度高，在分子生物学研究和医学研究等方面得到了广泛的应用，尤其是在基因表达差异分析方面。基因表达差异分析一般是比较不同时空样本或不同处理样本（药物处理，物理处理和化学处理等）之间特定基因的表达差异。当检测出某个基因的表达是上调或下调时，我们并不知道这种表达差异是源自于它本身表达量的变化，还是样本量大小或者操作导致的RNA的损失等其他原因导致表达量的变化。为了减少实验偏差并产生准确的表达水平，RT-qPCR往往需要考虑几个变量（如操作误差或RNA提取量、得率及变异等）进行归一化处理。目前，RT-qPCR标准化最常用的方法是使用内参基因进行均一化处理。什么是内参基因？理想情况下，在所有发育阶段和不同实验处理的反应中，内参基因在不同组织的所有样本中应具有相对稳定的表达水平。内参基因通常是各种管家基因，例如ATCB、GAPDH、β-actin、18S rRNA等。它们的表达水平受环境因素影响较小，并且可以在生物体几乎全部组织及各个生长阶段持续表达。在不同的组织中，管家基因mRNA的含量都很丰富。内参基因的作用在基因表达差异分析中内参基因可以用于校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样定量的结果才更为可信。一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。理想的内参基因应该满足以下条件：1.不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因DNA的扩增；2.高度或中度表达，排除低表达；3.稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显著性差别；4.表达水平与细胞周期及是否活化无关；5.其稳定的表达水平与目标基因相似；6.不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响。内参基因的评估然而，已有证据表明，一些用于控制实验偏差的传统内参基因仅在特定条件下是相对恒定的表达水平。很明显，内参基因是具有一定的特异性，没有通用的内参基因可用于所有实验的内控，这也表明在进行RT-qPCR实验之前，必须正确选择内参基因。那么在选择内参基因时，可以通过geNorm、BestKeeper、NormFinder、RefGenes 等工具来评估，这是保证结果可靠准确的前提。其次可对候选的内参基因进行qPCR 实验做进一步的筛选。首选在不同样本中均稳定表达的内参基因，即比较各样品中Cq平均值以及Cq值的标准偏差，选择SD最小的基因作为实验内参。现在对内参基因的选择有所了解了吗？Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。

Paper -1：全球新型冠状病毒肺炎疫情日益严峻，除了齐心协力对抗病毒外，科研人员也在对新冠病毒进行更深入的研究，比如疫苗研发，感染后患者生理机能是否会受影响等。其中，关于新冠对生殖方面的影响一直备受关注，迄今为止，已在精液和精子中检测到27种病毒。那么在新冠大流行的背景下，SARS-CoV-2（covid-19）是否存在于精液中呢？如果精液样本中存在极低病毒载量的SARS-CoV-2（covid-19），一旦被使用，那么必定会有传染风险。湖南省疾病预防控制中心以湖南省人类精子库在大流行期间和之后收集的冷冻精液为研究对象，开展了一项回顾性研究，并发表在《Reproductive BioMedicine Online》杂志上。  研究包括来自100个供体的100对精液和血液样本，考虑到两种标本的病毒载量均较低，所以研究人员使用了自主改良的一步法-单管巢式定量PCR（OSN-qRT-PCR）进行SARS-CoV-2（covid-19）检测。此外，为了避免出现“假阴性结果”，使用Naica™数字PCR（cd-PCR）对来自阴性精液样品的RNA进行了第二轮群体检测。结果：对于单个血液和精液样本，分别检测了核衣壳蛋白（N）和开放阅读框（ORF-1ab）基因，在100对样本中均呈阴性。此外，根据cd-PCR结果，群体检测的RNA样本中，每孔均> 20,000个微滴，并且均不存在阳性液滴。结论：冠状病毒大流行期间和之后，湖南省人类精子库冷冻保存的精液均不含SARS-CoV-2（covid-19），可以安全使用。Paper -2：本研究对已经确诊的3例新型冠状病毒肺炎患者按照不同时间的全血、尿液、粪便标本同时进行qPCR和Naica™数字PCR（cd-PCR）的核酸检测，并比较了两种方法检测各类样本中2019-nCoV的差异性，提出改进2019-nCoV核酸检测的综合策略，为核酸检测阴性患者提供更多诊断支持。本实验中数字PCR在病例发病早、中、晚期标本中均能检测到阳性微滴，而qPCR漏检了发病小于5天的标本，检测到的阳性核酸均以中晚期为主。（表2）这也解释了受检测方法灵敏度的局限性，目前大部分假阴性患者都处于疾病发展的早期。此外，在本次实验中数字PCR在重症病例的三种标本中均测到阳性微滴，但因为血、尿和可疑粪便的标本病毒载量偏低，qPCR检测均为阴性。（表3）总之，数字PCR技术可以有效克服qPCR灵敏度不足的难题，精准捕捉到病毒载量较低的血液、尿液和可疑的粪便或肛拭子标本，是qPCR的有益补充，为帮助临床医生准确判断早期感染及患者是否真正痊愈起到了积极的作用，对2019-nCoV的长期监控有重要的意义。两篇Paper均采用了--Naica™数字PCR平台法国Stilla Technologies公司的Naica™数字PCR技术在进行核酸检测时具有独特的优势。系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片作为数字PCR过程的耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要2.5小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。操作流程：原文链接：Paper1：doi.org/10.1016/j.rbmo.2020.11.015Paper2：doi:10.3969/j.issn.1006-3110.2020.11.009

naica® dPCR Mixes介绍：Stilla Technologies公司在今年推出全新的试剂产品线--naica® dPCR Mixes，专门用于数字PCR分析。为了提高检测效率和检测灵敏度，同时开发了适用于荧光探针（TaqMan®）检测和嵌合染料（EvaGreen®）检测的PCR预混液。本系列产品属于即用型预混液，是Naica™ Crystal微滴数字PCR系统的最佳搭档，包括naica® PCR Mix和naica® multiplex PCR Mix，提供5x和10x浓度，可以大幅度地提高检测灵敏度，同时保证反应的灵活性。naica® dPCR Mixes特点☑ 兼容TaqMan® 和EvaGreen®检测。☑ 高耐受性：复杂样本仍然可以得到高质量的实验结果。☑ 高特异性：广泛适用于各种反应条件。☑ 高灵敏度：精准定量低浓度样品和稀有目标的检测。☑ 宽动态范围：多重反应的动态范围可与单重反应相媲美。naica® dPCR Mixes分类：★ naica® multiplex PCR MIXnaica® multiplex PCR MIX 是一种即用型双组分预混液（包括Buffer A和Buffer B），适用于Naica™ Crystal微滴数字PCR系统的TaqMan®探针法多重检测。本制品的核心成分是一种高效的热启动DNA聚合酶，在95°C下只需3分钟的激活时间，使用时加入模板、引物探针和水即可，其多重反应的动态范围可与单重反应相媲美。10x预混液极大地降低Mix用量，额外的体积可被样本、探针或引物所利用，进而提高多重反应效率，并为低浓度样品或稀有靶标提供优越的检测灵敏度。★ naica® PCR MIXnaica® PCR Mix 是一种即用型双组分预混液（包括Buffer A和Buffer B），适用于Naica™ Crystal微滴数字PCR系统的Eva Green®染料法检测。本制品的核心成分是一种高效的热启动DNA聚合酶，可大幅度地提高检测灵敏度和特异性。

介绍：Azure Cielo™ 3和Cielo™ 6 实时荧光定量PCR系统具有卓越的灵敏度。该系统配置新型的高性能光学系统，采用16组光纤单孔扫描设计，一根光纤用于高能LED激发，另一根用于光信号检测，可16孔同时采集(图1)。特殊的激发/发射方式保证单孔扫描时仅激发一个孔，光纤传导也有效消除光散射，完全避免孔外区域的激发，减少背景噪声的来源，以便更灵敏的检测。同时Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统采用“全孔检测”技术，每个孔可采集大约100,000个数据点。检测时取读数的平均值，精准测定每个孔的荧光强度。这种“全孔检测”为每个采集时间点提供了比单孔扫描系统更准确的数据，因为单孔扫描系统仅仅采集少量的数据点。如何可靠地检测低拷贝数的靶标呢？首先要考虑引物和探针的特异性，这会直接影响qPCR检测能力的高低，其次考虑灵敏度，即当探针信号高于背景噪声时仪器检测的灵敏度。在其他的反应成分相同的情况下，更高灵敏度的仪器可以更早的检测到信号或得到更小的Cq值。为了证明Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统在低拷贝数的靶标检测中的灵敏度和重复性，进行了单拷贝靶标DNA的扩增实验。方法：配制20µl反应体系，利用单拷贝DNA为模板进行qPCR扩增。分别在Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统和竞争产品的系统上运行两次96孔板。使用每个仪器提供的软件收集和分析数据，以确定每个孔的Cq值。结果与讨论：单拷贝DNA扩增结果发现，在Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统中检测到88个孔(92%)有荧光信号，竞争产品中检测到77个孔(80%)(图2A)，结果表明，Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统提高了单拷贝扩增的检测概率，这也反映了其检测灵敏度更高。那么对于单拷贝DNA扩增来说，那些没有荧光信号的孔可能是靶标DNA没有进入到孔中，所以没有检测到荧光信号。同时发现，Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统测量的Cq平均值比竞争产品要早2个循环(Cq 36.39 vs 38.53)(图2A)。并且Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统的Cq值SD小于竞争产品的值(0.91 vs 1.16)，这进一步说明了Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统的检测具有良好的重复性。此外，将两者的扩增曲线进行比较，发现在竞争产品上某些扩增曲线起峰较晚，扩增曲线起峰位置不一致（图3B），Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统的扩增曲线起峰位置基本一致（图3A）。这也说明了Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统高灵敏度的“全孔检测”技术和多数据点的捕获方式可以给您带来真实可靠的扩增结果。总的来说，随着靶标DNA数量的减少，qPCR的可靠性也会逐渐降低，然而现代应用不断突破这一技术的极限，对qPCR的性能提出了更高的要求。以上结果证明了Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统具有卓越的灵敏度和可靠性，即使检测单拷贝DNA分子，仍可获得具有高度重复性的定量数据。参考文献：1. Lockey C, Otto E, Long Z. Real-Time Fluorescence Detection of a Single DNA Molecule. BioTechniques. 1998; 24:744–746.2. Stowers CC, Haselton FR, Boczko EM. An Analysis of Quantitative PCR Reliability Through Replicates Using the Ct Method. J Biomed Sci Eng. 2010;3(5):459-469.3. Stadler J, Eder J, Pratscher B, et al. SNPase-ARMS qPCR: Ultrasensitive Mutation-Based Detection of Cell-Free Tumor DNA in Melanoma Patients. PLoS One. 2015;10(11):e0142273.4. Tosiano MA, Jacobs JL, Shutt KA, et al. A Simpler and More Sensitive Single-Copy HIV-1 RNA Assay for Quantification of Persistent HIV-1 Viremia in Individuals on Suppressive Antiretroviral Therapy. J Clin Microbiol. 2019;57(3):e01714-e01718.

近日在《Stem Cells and Development》期刊杂志上发表题为《Bone Marrow Stromal Cell-Derived Exosomes promote muscle healing following contusion through macrophage polarization》的文章。在这项研究中，使用梯度离心从BMSC的上清液中分离和纯化外泌体。纳米粒子跟踪分析，透射电子显微镜和蛋白质印迹被用来鉴定外泌体。使用ECHO正倒置一体荧光显微镜对HE染色，Masson染色和免疫荧光的肌肉样本进行成像。最后得到的结论：BMSC-Exos通过改变巨噬细胞的极化状态抑制炎症反应，减轻了小鼠的肌肉挫伤损伤并促进了肌肉的愈合。背景介绍：骨骼肌挫伤是运动医学和临床最常见的损伤之一。由于挫伤后局部纤维化形成，受伤的肌肉很容易再次受伤，骨骼肌纤维化被证明与损伤初期的过度炎症反应有关，而与炎症浸润密切相关的巨噬细胞被发现在骨骼肌的愈合过程中起着至关重要的作用。如何调节巨噬细胞极化仍然是肌肉愈合的重要问题。最近的研究表明，骨髓基质细胞源性外泌体（BMSC-Exos）可以影响炎症和组织恢复。因此，作者假设BMSC-Exos可以通过影响巨噬细胞极化来下调炎症反应，从而促进挫伤后骨骼肌的愈合。在这项研究中，作者从BMSC中分离了BMSC-Exos，在体内和体外测试了它们的功能，并研究了BMSC-Exos对巨噬细胞免疫调节和肌肉愈合影响的潜在机制。实验方法：通过粒度分析、透射电镜和Western Blot方法鉴定外泌体，为了检查靶蛋白的表达和位置，在TA（胫前肌）切片上进行了免疫荧光染色。使用的一抗是抗CD206，抗α-SMA，抗MyoD和抗Pax7，DAPI用于定位细胞核，通过荧光显微镜（ECHO Revolve，美国）观察图像。结果：总体外观，相对重量，形态特征：挫伤损伤后3d，挫伤组的TA肌肉比BMSC-Exos组的肌肉血肿更大（图3A）。两组之间在第三天，TA肌肉的相对肌肉重量也显著不同，挫伤组的TA肌肉较重（图3B）。对于HE染色，在阴性对照组中，肌肉纤维规则且密集地排列。但是，在挫伤组中，随着时间的流逝，肌肉纤维变得越来越分散，许多增殖的胶原纤维占据了肌肉纤维的空间，这些现象在BMSC-Exos组中得到了改善。Masson染色中，在挫伤组中观察到大量胶原纤维，而BMSC-Exos治疗在所有时间点均显著减少了纤维化区域（图3C-D）。此外，为了进一步检查纤维化状况，作者对平滑肌肌动蛋白α（α-SMA）进行了免疫荧光染色。形态学结果表明，BMSC-Exos治疗显著降低了挫伤在不同时间点引起的高蛋白表达和α-SMA的广泛分布（图4）。巨噬细胞耗竭后，BMSC-Exos的抗纤维化作用受到抑制，挫伤和BMSC-Exos治疗组在第14天均观察到大的纤维化区域和广泛分布的α-SMA蛋白。为了确定卫星细胞的不同成肌状态，进行了Pax7和MyoD的共定位。形态上，从受伤后3天开始，总的Pax7 + / MyoD +卫星细胞显著增加。显然，BMSC-Exos治疗组的数量多于挫伤组和阴性对照组。在三个不同的组中，相对的Myod蛋白表达也呈现出类似的趋势（图5D）。综上所述，BMSC-Exos注射液可在早期促进肌肉再生。结论：研究表明局部使用BMSC-Exos可以减少挫伤后的纤维化组织，增强肌肉再生并改善骨骼肌的生物力学特性。BMSC-Exos通过促进M2巨噬细胞极化，抑制了受伤肌肉的炎性微环境。作者的研究为BMSC-Exos在临床实践中可用于肌肉愈合提供了有力的支持。Revolve正倒置一体显微镜Revolve展现了其非凡的灵活性，可以轻松地实现正置和倒置显微镜转换，创新性地把正倒置显微镜合二为一，开启了显微镜Hybrid时代。*   视网膜屏显示技术：比拟目镜人眼观察效果。*  全视野观察：更清晰，更方便。*   多通道荧光：多达4个EPI荧光通道，无须暗室，就可以轻松快速地完成多色荧光显微分析。*  自动化操作：通过iPad Pro点触操控相机及荧光通道之间的切换，实现了完全自动化操作。*   App应用软件：基于IOS的Echo App是与Apple团队合作研发的专业显微镜软件。*   精湛的工艺尽显高端品质：实现非凡的性能。

在决定实时荧光定量PCR检测灵敏度、准确性和可靠性的众多因素中，模板质量是决定重复性和生物学相关性的重要因素之一。诸多报告中也描述了生物样品中常见的抑制成分会导致qPCR分析灵敏度和动力学的显著降低。如何检测抑制剂：多种方法可用于评估生物样品中是否存在抑制剂。常用方法是通过连续稀释样品来评估样品的PCR效率，PCR效率的高低一定程度上反映出样品质量的好坏。一个高效的PCR反应要求扩增效率在90%-110%之间，当扩增效率＞110%或＜90%，无论是相对定量还是绝对定量其最终结果都会不准确。那么怎么来判断是由于抑制剂引起的扩增效率异常呢？如图1所示，通过标准曲线的状态判断，当原液的数据点位于标曲上方（红色箭头），则极有可能是样本抑制剂抑制PCR反应导致Cq值偏大。内部扩增控制（IACs）是一种与目标核酸共纯化和共扩增的方法，可用来检测抑制剂和指示加工过程中的模板丢失。IACs可包装在噬菌体外壳中，也可以是包含引物结合序列和探针检测序列的单链寡核苷酸。在荧光信号采集过程中，探针结合位点的部分不匹配阻止了与IACs杂交，随后可对熔解曲线进行分析，用以区分IACs和目标扩增子。IACs将是检测病原体的优质方案，但这种方法不适用于细胞mRNA定量，因为考虑为每个单一mRNA设计模拟物是不现实的。另外，也可以通过使用外源性对照来测试抑制剂，也称为Spikes。该方法无论是在其构造技术的复杂性方面，还是在分析之后与它们的准确检测相关的额外工作方面，相对都是比较简单的。Spikes可以是RNA也可以是DNA分子，这取决于靶标类型。mRNA表达分析首选RNA Spikes，DNA靶标分析首选DNA Spikes。Spikes通常是几千个碱基/碱基对异型序列，所以不会与任何已知目标交叉反应。抑制剂类型：抑制剂可以是核酸提取过程中使用的试剂，也可以是从生物样品中提取的成分。抑制剂的影响，较好的情况是抑制剂会产生不准确的定量结果；最坏的情况是高度抑制会产生假阴性结果。常见的抑制剂类型如下：1）样品本身的成分：许多生物样品本身就含有严重抑制逆转录和PCR反应的成分，如血液中的血红蛋白、免疫球蛋白G，肌肉中的肌红蛋白、胆盐、腐殖酸、尿素和胶原蛋白，植物中的多糖多酚等。2）提取和纯化试剂的成分：许多用于纯化核酸的试剂，如苯酚、氯仿、硫氰酸胍、盐酸胍、乙二胺四乙酸、二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠、噻唑、三唑和核糖核酸等。如何降低抑制剂的影响：当样本中存在抑制剂，高浓度模板中抑制剂浓度较高，对PCR反应的影响较大。低浓度模板由于稀释使得抑制剂浓度有所下降，抑制剂的抑制作用也相应降低。如果是样品本身的成分，可对模板进行稀释，或者进一步纯化，又或者改进提取方法来降低抑制剂的干扰。如果提取和纯化试剂的成分，其本身就是最有效的逆转录和聚合酶链反应的抑制剂，因此需要在提取和纯化过程中注意对试剂成分的去除，防治污染模板。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。?   数据可靠性：连续1000次实验后，结果高度一致。?  应用灵活性：提供多种qPCR应用分析。?   流程智能化：中英文用户界面，触控操作，可多机联用。?   在线便捷性：主机可独立运行qPCR程序，数据可USB、Wi-Fi等网络传输。

做过PCR的小伙伴都知道，PCR前期的验证引物探针性能和确定最适反应条件是确保正式实验顺利进行的前提。PCR实验中有个相当重要的工作——即是PCR扩增效率的评估。扩增效率是PCR检测性能最重要的指标之一，也是定量分析计算结果时所需要的参数。接下来，让小编给大家细细说来吧。什么是扩增效率PCR是一种DNA体外扩增技术，通常包括了30 - 50个循环周期。每个循环中，目标DNA分子的拷贝数最多会增加1倍。但在实际反应中，1个DNA分子在1个扩增循环后被成功复制的概率，也就是扩增效率E如何评估扩增效率标准曲线是评估PCR扩增效率最可靠和稳定的一种方法，被研究者们广泛认可。该方法涉及到制作一系列的样品来控制目标模板的相对数量。这些样品通常由浓缩的原液连续稀释而成，最常用的是10倍稀释。使用一系列稀释样品，采用标准qPCR程序进行扩增获得Cq值，最后根据各样品浓度及相应的Cq值绘制标准曲线，得到线性方程Cq= -klgX0+b，扩增效率E=10(-1/k)-1。利用qPCR进行定量分析时，要求扩增效率范围在90%-110%（3.6＞k＞3.1）。影响扩增效率的关键因素PCR的效率取决于许多因素，包括以下方面：1）检测的性能。这取决于引物、模板的序列和结构。二级结构和分子间的相互作用都会降低PCR效率。2）样品基质。其中可能含有来自样品的抑制剂和其他干扰物质，或携带来自上游加工步骤的试剂。检测样品是否有抑制作用，可使用RNA或DNA Spikes方法进行检测，或者通过倍比稀释得到标准曲线也可以观察到。3）所用试剂及其浓度。本质上，任何PCR试剂都会一定程度上限制PCR反应速率和性能。4）竞争性反应。多重反应时，各基因的扩增存在反应成分的竞争。5）qPCR仪器。由于仪器特定的硬件/软件属性和设置、以及用于提取Cq值的特定算法不同，相同的实验中，不同的仪器会产生不同的PCR效率。6）技术重复。一般进行3次以上的技术重复以校正实验误差，重复数越多精确度越高。7）连续稀释中的移液体积。移液体积越大，移液器误差或操作误差引起的影响越小。qPCR扩增效率的判断qPCR扩增效率主要是通过标准曲线的线性关系方程Cq=-klgX0+b来判断，扩增效率E在90%-110%之间时，认为扩增接近理想情况；参数R2要求≥0.98，R2越接近1，则说明Cq和X0的Log值之间的相关性越高。那么扩增效率E表现不好，主要分为两种情况：1）过低的扩增效率（可能存在的原因：? 移液器校准不良或移液技术差。? 不正确的稀释导致标准曲线出现错误。? 染料浓度低荧光或者仪器未校准染料。? 引物设计不好或扩增子具有二级结构。? 标准曲线动态范围太小。? Taq酶无活性或活性降低。? 样品抑制。2）过高的扩增效率（> 110％）可能存在的原因：? 移液器校准不良或移液技术差。? 不正确的稀释导致标准曲线出现错误。? 引物二聚体或非特异性扩增。? 标准曲线动态范围太小。? 基因组DNA污染（仅限RNA模板未进行DNase I处理或DNase I消化不完全）。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统来自美国Azure Biosystems公司，可为您提供3/6检测通道，根据实验需求灵活配置。这款产品采用了高能LED作为光源系统，可保证光源强度高，光源一致性好；高品质的帕尔贴温度模块作为温控系统，升降温速率快，可设置12列跨度30°C的温度梯度；卓越的CMOS拍照+光纤信号传输作为检测系统，CMOS检测灵敏度高，光纤传输速度快，无光损失和噪音干扰，无需ROX校准。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统可为您的科学研究提供高精准度、高灵敏度和高可靠性的实验结果。

12月3日-4日，第四届现代临床分子诊断研讨会在上海好望角大饭店如期举行。来自国内外数十位专家做主题演讲，吸引了全国各地近500名业内人士参会，齐聚一堂，在思想的碰撞与融合中，共话分子诊断领域广阔的未来。本次论坛聚焦生物标记物、基因检测、分子病理、微生物诊断、疾病特异性诊断、新药研发、新型诊断方法开发、遗传病检测、医疗大数据、市场与法规等精准医学领域的关键问题进行积极探讨，促进基础科学与临床应用的转化。在本次大会现场，深蓝云生物联合复旦大学附属中山医院、中国医药生物技术协会基因检测技术分会、转化医学网和艾普拜生物成功举办了第四届现代临床分子诊断论坛之Gene π实战课堂——数字PCR分子诊断方法建立和验证，本次训练营聚焦于第三代数字PCR技术详解、实验操作、结果分析、分子诊断方法的建立和验证，先进治疗质控体系的量化、液体活检、标准品定量应用案例分析等核心内容，受到了学员们的一致好评。为了更好地让广大临床、科研工作者了解数字PCR技术，本次训练营对第三代数字PCR技术及Naica™多通道微滴数字PCR系统介绍、数字PCR系统原理、数字PCR多重检测在临床分子诊断中的应用实践、核酸定量检测中数字PCR方法学转换和体系验证等方面进行了详细介绍，同时进行实操。Stilla公司首席执行官- Rémi DANGLA发表致辞，简单介绍了Naica™ 数字PCR系统的特点和应用前景。希望通过举办Gene-π数字PCR培训课程，让更多的人能了解数字PCR这一技术。大会现场还发布了全新Naica™六色数字PCR系统，在原有优势的基础上，六色新品带来的多重荧光通道能够让您在实验时有多种选择，能够从少量样本中获取更多基因信息，提高实验效率，节省实验的时间和经济成本。数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量与基因检测提供了全新的思路，在医学、环境、食品检测等多个领域展现出良好的应用前景，尤其以医学方面为最， 在先进治疗（Advanced Therapy）如细胞治疗、基因治疗、免疫治疗等研究中，质控体系至关重要，目标核酸的绝对定量有助于直观有效的量化指标，受到了学员们的一致好评。同时在大会论坛中就评价无创液体活检中dPCR dEGFR39的检测方案做精彩报告，除此之外，深蓝云携Naica™微滴芯片数字PCR系统、Azure Cielo™定量PCR系统及Echo Rebel正倒置一体显微镜等产品亮相在大会现场，现场专业的产品展示和解决方案介绍，吸引了大量参会者驻足参观、咨询、体验，受到了高度认可。第四届现代临床分子诊断研讨会虽已圆满落幕，但我们的服务不会结束！深蓝云生物致力于为用户提供新型生命科学研究仪器、分析产品以及优化的整体应用解决方案，不忘初心，不断探索，继续前行！

在荧光定量PCR检测实验中可以采用多种方法来进行基因的定量。定量的方法也取决于实验的目标。当实验者对待测样品中的核酸的具体拷贝数比较感兴趣时，可以选择绝对定量。如果实验者关注的是实验样本与对照样本之间的倍数变化，无需精确测定拷贝数，则选择相对定量。目前相对定量方法适用于大多数基因表达研究，可分析对照样本和一个或多个实验样本中目的基因表达水平的上调或下调。在此我们将详细介绍目前使用广泛且适用于基因表达研究的相对定量方法：2-ΔΔCq法。首先相对定量也需要仔细规划，实验生成的数据是相对丰度，而非确切的基因拷贝数。相对定量方法--2-ΔΔCq2-ΔΔCq法是一种非常普遍的技术，它比较了包括对照样本 (如未处理或野生型样本) 和内参基因 (如看家基因表达) 在内的实验样本的结果。采用该方法，可根据检测样本和对照样本中内参基因的Cq来调整相同样本中的目的基因的Cq。最后得出的ΔΔCq值可用于测定目的基因表达量的倍数差异。具体计算方法如下：该方法要求内参基因和目的基因具有相一致的扩增效率，并尽可能接近100% 。确定扩增效率的方法是采用同样的样本进行梯度稀释，生成内参基因和目的基因的标准曲线（下图）。确定内参基因和目的基因的扩增效率是否在90-110%的范围内，且相互间效率偏差在5%以内。内参基因的必要性内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样定量的结果才更为可信。一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。理想的内参基因应该满足以下条件：① 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因DNA的扩增；② 高度或中度表达，排除低表达；③ 稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显著性差别；④ 表达水平与细胞周期及是否活化无关；⑤ 其稳定的表达水平与目标基因相似；⑥ 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响。内参基因的评估，可通过geNorm、BestKeeper、NormFinder、RefGenes 等工具来评估，这是保证结果可靠准确的前提。其次可对候选的内参基因进行qPCR 实验做进一步的筛选。首选在不同样本中均稳定表达的内参基因，即比较各样品中Cq平均值以及Cq值的标准偏差，选择SD最小的基因作为实验内参。Azure CieloTM实时荧光定量PCR系统——相对定量示例1、实验方法方法:从组织中提取RNA，逆转录成cDNA，以SYBR Green法进行荧光定量检测。试剂:PerfeCTa qPCR ToughMix UNG(QuantaBio)实验步骤:提取RNA→cDNA合成→设计特异性引物→qPCR扩增→结果分析。2、结果计算Step1:ΔCq值=目的基因Cq–内参基因CqStep2:ΔΔCq值=处理样品ΔCq–对照样品ΔCqStep3:最后计算出倍数关系: 2-ΔΔCq值3、相对表达量结果：Azure Cielo™实时荧光定量PCR来自美国Azure Biosystems公司，以创新服务于生命科学为愿景。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统融合了高品质Peltier温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏的可靠结果。Azure Cielo 3/6检测通道，可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3触控系统，主机本身可独立运行、连接、远程交互，让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。申请试用关注“深蓝云生物科技”公众号→云活动→免费试用；您也可以登录深蓝云官网：www.cycloudbio.com，点击首页右上角的试用申请进行填写。

背景导读—何为嵌合状态的检测？骨髓和外周血干细胞移植是许多恶性和非恶性疾病的有效治疗方法。造血干细胞移植后，受体产生新的血细胞，这些血细胞在遗传上来自于供体DNA。确认新的造血系统来源于供体是临床复发监测的重要组成部分。一般采用血细胞基因型检测的方式，称为嵌合体分析。完全供体细胞嵌合状态意味着100%的血细胞来自供体，而混合或部分嵌合意味着受体细胞也存在。因此检测时需要分析受体在移植后的血液或骨髓中供体和受体的基因型的各自比例。法国苏黎世输血服务中心实验室使用Stilla Technologies的Naica™ Crystal数字PCR系统进行双等位基因单核苷酸变异（SNV）检测，从而确定嵌合体状态。嵌合体检测的两步策略移植前：要想得到正确的移植后的检测结果,必须选择合适的标记物，苏黎世输血服务中心实验室建立了一个由24种特定SNV分析组成的组合，用于寻找在单个样品分析中筛选供体和受体DNA的合适标记。移植后：在临床上，嵌合体监测至少需要0.5%的等位基因敏感性。Naica™ Crystal 数字PCR仅使用5ng DNA，就达到了所需的0.5%的灵敏度。使用标准的20ng DNA进行检测可以使一个等位基因频率的可重复量化精度达到0.25%。(图2)总结Naica™ Crystal数字PCR在造血干细胞移植后嵌合状态检测方面的优势：• 可与建立的SNV嵌合体检测方法完全兼容。•   使用Naica™系统进行的标准测试可使等位基因频率检测灵敏度降至0.25%，远低于0.5%的最低临床限值要求。•   此次研究，使用了Naica™系统中的高通量Opal芯片，一次可检测48个样本，每个样本可进行3荧光通道读取，仅需较低的DNA输入量，即可实现更高的样品通量和谱系特异性嵌合体检测的能力。

2020第四届现代临床分子诊断研讨会（Clinical Molecular Diagnostics Forum CMDF） 、分子诊断新技术新产品展览会将于2020年12月3-4日在上海好望角大饭店举办。北京深蓝云生物科技有限公司将携带相关产品亮相在此次论坛，同时就评价无创液体活检中dPCR dEGFR39的检测方案做精彩报告，恭候您的参观咨询（4号展位）。作为精准医学与分子诊断领域重要的学术论坛，旨在为生物医学领域的专家、优秀青年学者、行业从业者提供一场高质量的学术盛宴，一个让产学研医充分交流互动的平台。本次论坛将聚焦生物标记物、基因检测、分子病理、微生物诊断、疾病特异性诊断、新药研发、新型诊断方法开发、遗传病检测、医疗大数据、市场与法规等精准医学领域的关键问题进行积极探讨，促进基础科学与临床应用的转化。数字PCR是目前非常重要的核酸分子诊断技术之一，届时深蓝云生物将联合复旦大学附属中山医院、中国医药生物技术协会基因检测技术分会、转化医学网和艾普拜生物举办第四届现代临床分子诊断论坛之Gene π实战课堂——数字PCR分子诊断方法建立和验证，本次训练营聚焦于第三代数字PCR技术详解、实验操作、结果分析、分子诊断方法的建立和验证，先进治疗质控体系的量化、液体活检、标准品定量应用案例分析等核心内容，将携资深技术专家，为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。欢迎大家积极参与！此次论坛还将邀请樊嘉院士、王红阳院士、宋尔卫院士、李金明主任、卢洪洲主任、王向东教授、白春学教授、席建忠教授等40余位顶尖专家发言分享。将有300+医院、第三方临验中心、科研机构、分子诊断企业及大专院校等专业听众线下参与。阵容强大，不容错过！培训班时间地点时间：2020年12月03日地点：上海好望角大饭店宗洛厅（上海市徐汇区肇嘉浜路500号）培训班日程您在PCR实验操作中是否遇到过问题？实验设计是否遇阻？如何判断判读标准？这是一次与新技术“零距离”接触的机会哦，赶紧报名吧！场地有限，报名从速哦。可以通过扫描下方二维码进行报名哦！彩蛋来袭惊喜来了！！！联系我们即可有机会获得免费参加2020第四届现代临床分子诊断研讨会的名额哦，名额有限，先到先得！大会详细信息可以复制下方链接进行查看：https://www.qdj8.cn/share/event/1317750727719784450详情咨询方式：电话：010-57256059，15801106547邮箱：info@cycloudbio.com

2020年11月18日，备受瞩目的慕尼黑上海分析生化展，圆满落下了帷幕。作为今年亚洲乃至全球规模庞大的实验室行业盛会，吸引了来自国内外多家参展企业及合作单位共襄盛举，为实验圈人士奉上了一场集创新产品、高端技术及解决方案为一体的行业饕餮盛宴。深蓝云生物盛装参展，现场专业的产品展示和解决方案介绍，吸引了大量参展者驻足参观、咨询、体验，受到了业内同仁的高度认可。北京深蓝云生物科技公司携Naica™ Crystal微滴芯片数字PCR系统、ECHO正倒置一体显微镜和Azure Cielo™荧光定量PCR系统等产品亮相此次展览会现场，受到各方专业人士的好评，同时受邀转化医学网进行现场采访。慕尼黑上海分析生化展虽已圆满落幕，但我们的服务不会结束！深蓝云生物致力于为用户提供新型生命科学研究仪器、分析产品以及优化的整体应用解决方案，不忘初心，不断探索，继续前行！

第二届全国植物光生物学大会即将于2020年11月20日至23日在深铁塘朗城君璞酒店（深圳市留仙大道3333号塘朗城广场C座）拉开帷幕。本次大会由中国植物生理与植物分子生物学学会与南方科技大学植物与食品研究所联合举办，展示我国植物光生物学研究的成果与进展，促进植物光生物学领域科研人员之间的交流与合作。北京深蓝云生物科技有限公司将携带相关产品亮相在此次会议，恭候您的参观咨询。大会将围绕光受体、光信号转导、光与其他信号整合等主题设立报告专题，邀请植物光生物学领域著名专家学者以及优秀青年科学家进行学术报告，是国内植物生物学研究领域具有代表性与传承性的学术交流活动。Naica数字PCR平台Naica Crystal微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片为耗材，形成25,000-----30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而得到精准的核酸绝对数量。2.5小时内，可快速获得结果。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，融合了高品质PCR温度模块和荧光检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏可靠结果。Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；以iPad Pro替代了传统目镜设计，进行操控，观察，传输，采集图像和管理，同时基于iOS的Echo app，使软件操作更加人性化。KeyPro™ KP100生物污染紫外净化仪KeyPro™ KP100生物污染紫外净化仪采用SLM™技术将LED阵列，光学元件和热冷却技术集于一身，可以提高消毒和去污性能。进行污染的消除，无残留，免冲洗，可节省高达90％的化学去污时间和成本。只需将适用的试剂和溶液，在加入样品前进行净化即可。

2020年11月13日，Gene-π数字PCR学堂——数字PCR基础培训、应用扩展及体系开发（深圳站）成功举办。本次训练营以理论结合实践的形式，聚焦第三代数字PCR技术详解、实验操作、结果分析、在新冠病毒检测领域中的应用、数字PCR技术绝对定量的方法学转化等核心内容，受到了学员们的一致好评。为了更好地让广大临床、科研工作者了解数字PCR技术，本次训练营对第三代数字PCR技术及Naica™多通道微滴数字PCR系统介绍、数字PCR系统原理、Naica全自动数字PCR系统在新冠病毒检测领域中的应用、在新冠病毒检测中利用数字PCR技术绝对定量的方法学转化等方面进行了详细介绍，同时进行实操。本次大会现场还发布了全新Naica™六色数字PCR系统，在原有优势的基础上，六色新品带来的多重荧光通道能够让您在实验时有多种选择，能够从少量样本中获取更多基因信息，提高实验效率，节省实验的时间和经济成本。数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量与基因检测提供了全新的思路，在医学、环境、食品检测等多个领域展现出良好的应用前景，尤其以医学方面为最，比如病原微生物分子诊断、肿瘤液体活检、器官移植损伤评估、无创产前筛查以及二代测序文库质控和结果验证等。 在先进治疗（Advanced Therapy）如细胞治疗、基因治疗、免疫治疗等研究中，质控体系至关重要，目标核酸的绝对定量有助于直观有效的量化指标，受到了学员们的一致好评。Naica™ crystal数字PCR技术是一种高灵敏度的数字PCR解决方案，作为下一代基因检测和核酸定量技术。Naica™ crystal数字PCR系统具有独特的三色检测能力，能够在同一反应中检测多种核酸。操作简单，反应快速，2.5小时内即可获得结果，是全新的创新技术，完全区别于市场上同类产品。Naica™ crystal数字PCR系统支持广泛的基因检测和分子生物学分析，包括用于癌症诊断的液体活检研究、病毒载量检测、产前筛查和转基因成分检测等，是精准治疗中用药组合和疗效监测的首选技术。

2020年慕尼黑上海分析生化展即将于2020年11月16日-18日在上海新国际博览中心拉开帷幕。北京深蓝云生物科技有限公司将携带相关产品亮相在此次展览会，我们将在5424展位恭候您的参观咨询。此次展会的详细信息可登录http://www.analyticachina.com.cn/zh-cn/进行查看。慕尼黑上海分析生化展（analytica China）是亚洲较大的分析和生化技术领域的国际性博览会，是业内优秀企业全面展示新技术、产品和解决方案的平台。在这场为期三天的分析界“盛筵”上，深蓝云生物将通过产品展示、解决方案介绍等形式为用户提供实验室各类应用的解决方案。Naica数字PCR平台Naica Crystal微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片为唯一耗材，形成25,000-----30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而得到精准的核酸绝对数量。2.5小时内，可快速获得结果。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，融合了高品质PCR温度模块和卓越的荧光检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏可靠结果。Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；以先进的iPad Pro替代了传统目镜设计，进行操控，观察，传输，采集图像和管理，同时基于iOS的Echo app，使软件操作更加人性化。KeyPro™ KP100生物污染紫外净化仪KeyPro™ KP100生物污染紫外净化仪采用SLM™专利技术将LED阵列，光学元件和热冷却技术集于一身，可以提高消毒和去污性能。进行污染的消除，无残留，免冲洗，可节省高达90％的化学去污时间和成本。只需将适用的试剂和溶液，在加入样品前进行净化即可。

数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量与基因检测提供了全新的思路，在医学、环境、食品检测等多个领域展现出良好的应用前景，尤其以医学方面为最，比如病原微生物分子诊断、肿瘤液体活检、器官移植损伤评估、无创产前筛查以及二代测序文库质控和结果验证等。数字PCR通过泊松分布校正得到目标基因的绝对拷贝数，可以提供比qPCR更精准的核酸定量，不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数，并具有灵敏度好、精确度高、耐受抑制剂能力强等优点。该技术是目前最适合用于体液样品（如血液、尿液、粪便、痰液、胸腹水、脑脊液等）中痕量核酸标记物检测的方法。多荧光通道的特异性检测且快速获得检测结果，实现了生物样本量有限的情况下获得更多信息的同时，显著提高检测能力和工作效率。为更好地让广大学者了解数字PCR技术，Gene-π数字PCR学堂——数字PCR基础培训、应用扩展及体系开发（深圳站）将于2020年11月13日在深圳召开。聚焦于第三代数字PCR技术详解、实验操作、结果分析、核酸绝对定量中数字PCR方法学转换及应用、在新冠病毒检测领域中的应用等核心内容，训练营将携资深技术专家，为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。培训时间地点时间：2020年11月13日地点：深圳市中海凯丽酒店二楼马德里厅（深圳市龙岗区大运路168号）培训日程您在PCR实验操作中是否遇到过问题？如何在实验过程中设置质控要求？在本次训练营中都可以得到答案，心动了吗？心动了就赶紧报名吧！场地有限，报名从速哦。可以通过扫描下方二维码进行报名哦！敲黑板了！我们的初衷是--真诚的把先进的科研技术带给大家!只要您提交了报名申请，经主办方审核通过后，收到报名成功确认通知，就可以参加我们的培训班啦！因场地有限，先到先得哦。赶紧报名吧！详情咨询方式：电话：010-57256059，15801106547邮箱：info@cycloudbio.com

TaqMan探针法因其良好的特异性以及可多重检测而受到实验人员的青睐，其实除了探针法外，还有很多好的实验方法也被实验人员广泛认可，这次就介绍一下另一个应用广泛的方法：SYBR Green染料法，它又是因为哪些优点获得实验人员的青睐呢？染料法原理染料法一般使用的是SYBR Green I染料，这是一种可以与双链DNA小沟结合的荧光染料，其不会与单链DNA结合，且在游离状态下几乎无荧光，只有与双链DNA结合才会发出荧光，因此将PCR扩增产生的双链DNA数量与荧光强度直接关联，产生实时监测的效果。SYBR Green染料法优点?  通用性好，适合进行大多数类型的定量反应，可以进行熔解曲线的分析。?  无需设计探针，引物设计相对简单，不用考虑基团选择，易于上手；成本低，无需合成探针。?  无需PCR后处理，减少分析工作量并节省材料成本。SYBR Green染料法缺点SYBR Green染料法也有其缺点，SYBR Green染料法一个反应只能检测一个基因，无法进行二重甚至多重的实验。同样的相对于TaqMan探针法其特异性较差，当引物存在二聚体或者非特异性扩增时，染料同样可以结合并发出荧光，影响定量结果。因此对于SYBR Green染料法而言，设计一套好用的引物是重中之重。深蓝云生物为您提供Gene-π网站在线设计引物，可为您快速设计引物并进行评估，复制链接可进行查询：https://www.gene-pi.com/item/primers-and-probes-2/设计好引物后，我们该怎么进行实验呢？1.实验条件的优化我们需要对设计的引物扩增效果进行分析，使用阳性模板进行扩增，确定扩增产物为单一条带，且大小符合设计预期，如有条件可以对扩增产物进行测序，保证准确性。当引物无问题后，进行反应条件的探索，对退火温度进行温度梯度检测，找到合适的退火温度，即PCR扩增效果最好，阴性模板无扩增，条带单一，熔解曲线单峰等。2.预实验设计好引物并探索好实验条件后，对样本进行一次预实验，预实验将样本进行梯度稀释用以制作标准曲线，分析内参基因以及目的基因的扩增效率是否接近且在100%左右，其次可确认高浓度模板中是否有抑制剂干扰，从而确定实验时合适的模板浓度（样本是否需要稀释或浓缩）。3.正式实验当我们完成了实验条件和预实验后就可以进行正式实验了，每个样品都需要3个或以上的重复，保证结果的准确性。Azure Cielo™实时荧光定量PCR来自美国Azure Biosystems公司的Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统，为您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道两种机型，可根据实验需求灵活配置。除此之外，Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统融合了高品质Peltier温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，可为您的科学研究就提供高精准、高灵敏可靠结果。▶   数据可靠性连续1000次实验后，结果高度一致，温控精准，性能稳定可靠。▶   应用灵活性提供多种qPCR应用分析，定制化报告。▶    流程智能化中英文用户界面，触控操作，可多机联用。▶    交互灵活性主机可独立运行qPCR程序，电脑、Wi-Fi、网络交互。

有些朋友说因时间关系，没能赶上昨晚的数字PCR网络研讨会直播，太遗憾了！没关系，善解人意外加小贴心的小编已经把研讨会的精华总结好了，回放同样可以助你好好学习，天天向上，下面赶紧跟着小编一起来回顾一下！视频分享：【视频回放】基于Naica数字PCR技术进行干细胞移植后嵌合体的精准监测点击下方链接观看 ↓https://v.qq.com/x/page/h3162fsvp3n.html主题：基于Naica数字PCR技术进行干细胞移植后嵌合体的精准监测内容简介：1、 通过Naica微滴数字PCR系统来监测干细胞移植后患者的嵌合现象，这也是监测是否会发生临床复发的关键部分。2、 讨论如何确认dPCR平台在先前监测的患者样品以及外部质量评估样品上的可靠性。值得注意的是，仅用5ng的DNA即可达到临床所需的0.5％的次要等位基因灵敏度。3、 Naica微滴数字PCR系统是如何快速、便捷的带来高精准的实验结果。

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肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，具有表皮生长因子受体（EGFR）突变的患者可进行针对性的靶向药物治疗。宋翔教授研究团队通过高灵敏的数字PCR技术对非小细胞肺癌患者血浆中的游离DNA进行突变检测，可同时检测EGFR基因第18-21外显子的39个突变，极大提高临床EGFR突变检测能力，尤其是当组织样本有限时，该方法可从血液样本中获得更多基因信息。该成果近日发表于知名杂志《British Journal of Cancer》。扫描二维码进入直播间

在做qPCR实验时，我们经常会问：“你是做绝对定量还是相对定量呢？”，而定量方法的选择是取决于实验的目标。绝对定量可测定目标核酸分子的实际拷贝数，但也是最费力、最复杂的定量形式。此方法要求周密的实验方案和高度准确的标准曲线，常用于确定病毒滴度。使用标准曲线进行绝对定量绝对定量是通过样品的Cq值和标准曲线进行比较实现的。首先为了建立标准曲线，需要已知拷贝数浓度的标准品，对标准品进行5次以上的连续梯度稀释，将稀释的标准品进行实时荧光定量PCR扩增，最后根据各样品的拷贝数浓度及相应的Cq值绘制标准曲线，得到线性方程Cq= -klgX0+b，其中X0为起始模板量。然后将未知样本的Cq值与此标准曲线进行比较，确定其拷贝数浓度。从图1可以发现，当模板起始浓度越大时，荧光达到阈值的循环数越少，即Cq值越小。反之，模板起始浓度越小时，Cq值越大。起始模板量的Log值与循环数Cq值呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品作出标准曲线，即可确定未知待测样本中目的基因的量。如何选择标准品？如前所述，生成绝对标准曲线采用的模板将决定数据的准确度。所以最好使用与实验样本尽可能类似的目标模板，可优选有证的标准物质或参考物质。那么制备标准品的常见方法如下：?  DNA 标准品：目的靶点的PCR扩增片段或含有目的靶点的质粒克隆（图2）。优点：易于生成、定量，可在适当的储存条件下维持稳定性。缺点：无法进行qRT-PCR 的逆转录步骤，大大影响了反应效率。PCR扩增片段：通过常规PCR进行目的片段扩增，回收纯化PCR扩增片段，可直接作为标准品，相对于质粒，PCR扩增片段不是那么稳定。质粒克隆：将目的片段进行PCR扩增，回收目的条带后连入T载体，再进行质粒提取，OD值定量，将质粒梯度稀释作为标准品使用。?  RNA 标准品：目的靶点的体外转录RNA(图3)优点：结合了RT效率，最大程度地模拟了目的靶点。缺点：需要耗费时间生成该标准品，因其不稳定，难以保持长期准确度。体外转录RNA：利用实时荧光定量PCR生成的PCR 产物可利用包含5’ T7启动子的序列和包含 3’ poly(T) 的逆转录引物重新扩增。体外转录反应生成多聚腺苷酸化正义mRNA。纯化后可将其准确定量并稀释，用于生成标准曲线。Azure  Cielo™实时荧光定量PCR系统——绝对定量示例1、实验方法：•方法:从组织中提取基因组DNA，以TaqMan探针法进行荧光定量检测•试剂:PerfeCTa qPCR ToughMix UNG(QuantaBio)•标准品:质粒标准品浓度为106、105 、104 、 103 、102、101；3个重复；设阴性空白对照•实验步骤:提取gDNA→设计特异引物探针→qPCR扩增→结果分析2、实验数据：3、标准曲线：R^2=1    y= -3.349x+32.87关于Azure  Cielo™实时荧光定量PCR系统来自美国Azure Biosystems公司，以创新服务于生命科学为愿景。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统融合了高品质Peltier温度模块和基于光纤传输的光学检测系统，为您的科学研究提供高精准、高灵敏的可靠结果。Azure Cielo-3/6检测通道，可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3触控系统，主机本身可独立运行、连接、远程交互，让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。

基因调控区的DNA甲基化状态的改变可导致多种癌症的发生。这种表观遗传学改变在生物学上是稳定的，并存在于循环肿瘤DNA（ctDNA）中，使其适合于早期检测和无创动态监测肿瘤负荷。数字PCR技术凭借其较高的灵敏度、精准度以及对抑制剂的耐受度，在对低拷贝样品检测时表现出了极大的优势。在转移性和II/III期结直肠癌（CRC）患者中，WNT抑制因子1（WIF1）和神经肽T（NPY）的甲基化程度较高，为了评估是否可以使用WIF1和NPY的甲基化程度作为一种结直肠癌标志物，法国Stilla Technologies联合法国国家科学研究中心（CNRS）、AP-HP等相关单位建立了一种将亚硫酸氢盐法（bisulfite-将未甲基胞嘧啶转化为尿嘧啶）与数字PCR相结合的方法。为了检测WIF1和NPY，利用亚硫酸氢盐-3色dPCR检测方法，选择白蛋白基因ALB作为参考基因，测试了从健康个体和CRC患者血浆中提取的ctDNA。并对WIF1和NPY的LOB和LOD进行评估。3色Naica Crystal Digital PCR检测WIF1和NPY分别检测了10个来自III期或IV期CRC患者和5个健康个体的血浆样品。来自CRC患者的所有血浆DNA样本的高甲基化WIF1和NPY得分均为阳性，而在健康个体中未检测到高甲基化的WIF1和NPY。通过将WIF1和NPY浓度与ALB参考浓度对比评估，血浆DNA中的高甲基化WIF1比例范围为8％至93％，而高甲基化NPY的比例范围为0.1％至78％。血浆样品中检测到的最低甲基化WIF1和NPY量分别为5.1和1.2cp/μL。通过上述方法，即经亚硫酸氢盐转化后再进行3色数字PCR方法，能够在每25μL体系中可靠的检测低至25和5个拷贝的高甲基化WIF1和NPY，并且该检测结果可以用作通用的结直肠癌标志物和肿瘤特异性突变的替代物。使用3色Naica Crystal Digital PCR检测WIF1和NPY，结果和理论值一致，未出假阴性和假阳性结果。Naica数字PCR平台法国Stilla Technologies公司的Naica数字PCR技术在进行核酸检测时具有独特的优势。系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片作为数字PCR过程的唯一耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要2.5小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。数字PCR学堂为了方便大家更好的学习数字PCR相关知识，我们为大家提供了Gene-π数字PCR学堂（www.cycloudbio.com数字PCR学堂快速入口），您可以选择感兴趣的应用教程，其中包含从实验设计到数据分析的详细工作流程。您还可以通过搜索导航工具直接搜索特定的项目（"dPCR的DNA准备"，"荧光溢出"等），或点击我们的"HOW TO" 选择您需要的部分（设计、分析、报告）。详细信息可登陆网站或扫描二维码查看。

2020年9月18-20日以“药”聚兰州、“园”梦未来为主题的第四届中国生物医药园区产业创新发展大会暨第三届兰州自主创新论坛在甘肃兰州成功举办。为引导中国生物医药产业园区转型升级与创新发展，深入推进新时期生物医药产业集群高质量发展，聚焦国家重大战略需求，着力攻克关键核心技术。本次论坛以“生物医药”为主题，聚力创新需求与行业产业化方向，采取大会报告、专家互动和疑难解答等方式，探讨关键核心技术的创新能力提升，共同构建协同创新体系，助推生物医药产业发展。专家学者还就体外诊断前沿技术与产业发展进行l了现场交流和讨论，聚焦分子诊断、免疫诊断、POCT 三大领域，共同探讨最新前沿技术及发展方向。深蓝云生物科技就评价无创液体活检中dPCR dERGF39的检测方案在此次大会做精彩报告。深蓝云生物自成立以来，一直致力于为用户提供新型生命科学研究仪器和分析产品以及优化的整体应用解决方案。Naica数字PCR平台Naica Crystal微滴芯片数字PCR系统，以Sapphire芯片为唯一耗材，形成25,000-----30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三通道成像，从而得到精准的核酸绝对数量。2.5小时内，可快速获得结果。Azure Sapphire™双模式多光谱激光成像Azure Sapphire™双模式多光谱激光成像是新一代激光扫描成像系统，多达四个固态激光器，提供极高的激发灵敏度，具有无与伦比的灵活性、出色的灵敏度和图像质量。Echo正倒置一体显微镜Echo正倒置一体显微镜兼具正置和倒置显微镜的功能，方便小巧，一机多能，可以非常便利地通过旋转实现正倒置配置的切换；以先进的iPad Pro替代了传统目镜设计，进行操控，观察，传输，采集图像和管理，同时基于iOS的Echo app，使软件操作更加人性化。Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统Azure Cielo实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司，融合了高品质PCR温度模块和卓越的荧光检测系统，为您的科学研究就提供高精准、高灵敏可靠结果。

9月24日北京时间11:00-12:00，Azure Biosystems应用领域专家Stanley Domijan将在Webex Meeting平台在线分享“Western Blot总蛋白归一化原理及如何进行分析”。扫描海报二维码注册 ▼Azure Sapphire™双模式多光谱激光成像系统▶ 多达四个固态激光器（488nm，520nm，658nm或685nm可选，785nm），提供极高的激发灵敏度。▶   短波长荧光检测和磷屏成像用PMT，长波长和近红外荧光检测使用APDs，可见光和化学发光用CCD。▶  超宽动态范围，同时成像和定量低丰度和高丰度样品。▶  图像分辨率可达10微米，用于高质量图像分析。▶   Sapphire Capture和AzureSpot软件，可实现完美的成像和准确的分析。

2020年9月9日，Gene-π数字PCR学堂——在核酸绝对定量中数字PCR方法学转换及应用（杭州站）在西湖大学成功举办。本次训练营以理论结合实践的形式，聚焦第三代数字PCR技术详解、实验操作、结果分析、核酸绝对定量中数字PCR方法学转换及应用、液体活检、标准品定量应用案例分析等核心内容，受到了学员们的一致好评。为了更好地让广大临床、科研工作者了解数字PCR技术，本次训练营对第三代数字PCR技术及Naica™多通道微滴数字PCR系统介绍、数字PCR系统原理、全自动数字PCR在核酸绝对定量领域的应用简介、核酸标准物定量检测中数字PCR的方法转换、数字PCR的结果解析进行了详细介绍，同时进行实操。数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量与基因检测提供了全新的思路，在医学、环境、食品检测等多个领域展现出良好的应用前景，尤其以医学方面为最，比如肿瘤液体活检、器官移植损伤评估、无创产前筛查、病原微生物分子诊断以及二代测序文库质控和结果验证等，在先进治疗（Advanced Therapy）如细胞治疗、基因治疗、免疫治疗等研究中，质控体系至关重要，目标核酸的绝对定量有助于直观有效的量化指标，受到了学员们的一致好评。

数字PCR为第三代PCR技术，凭借较高灵敏度和精准度广泛应用于核酸检测领域。目前，越来越多的领域都会用到数字PCR（dPCR）技术，但关于实验细节和结果评估缺少一个共识。在很多发表的文章中都缺乏足够的dPCR实验细节，这样不利于评审文章，甚至难以根据文章重复实验。本期在线研讨会给大家介绍通过6色荧光数字PCR技术检测乳腺癌相关靶点，并借此阐述了整个数字PCR操作流程以及如何运用MIQE，希望对大家的文章发表能有所帮助，少走弯路，多发好文章。扫描二维码进入直播间