中法联合开发即用型三通道数字PCR新冠病毒核酸检测方案抗击全球新冠疫情。日前,Stilla Technologies发布:基于3色NaicaTM微滴芯片式数字PCR的2019-nCoV新冠病毒的核酸检测方案,并公布该解决方案的性能数据,此方案由法国Stilla Technologies、艾普拜生物科技(苏州)有限公司和我司北京深蓝云生物科技有限公司共同开发完成。Stilla Technologies公司发布信息原文链接:https://www.stillatechnologies.com/a-3-color-crystal-digital-pcr-kit-for-detection-of-covid-19/北京深蓝云生物科技有限公司发布信息链接:http://www.cycloudbio.com/product/36748.html北京深蓝云生物科技有限公司作为Stilla Technologies中国技术示范与服务中心,给出如下中文翻译:一步式RT-dPCR方法2019-nCoV(COVID-19)核酸检测试剂盒说明2019-nCoV(COVID-19)新冠病毒已被世界卫生组织宣布为国际关注的突发公共卫生事件。为了促进卫生当局的行动,开发可靠的检测试剂至关重要。苏州艾普拜生物(位于江苏医疗器械科技产业园)利用已公开的2019-nCoV和其他SARS相关的病毒序列,以及特异性检测2019-nCoV的PCR检测方法(Chan et al.,2020),开发基于3色NaicaTM微滴芯片式数字PCR平台的2019-nCoV(COVID-19)一步法RT-digital PCR的核酸检测试剂盒(图1),利用FAM标记探针检测2019-nCoV(COVID-19)新冠病毒RNA正链的ORF1ab基因、HEX标记探针检测N基因、CY5标记的内参基因(人类看家基因),可同时检测两个独立的2019-nCoV(COVID-19)新冠病毒序列,同时可监控RNA样本质量和PCR扩增的有效性(图2)。图1:即用型2019-nCoV(COVID-19)一步法RT-digital PCR的核酸检测试剂盒,包含在NaicaTM微滴芯片式数字PCR平台使用的全部试剂。(* 仅供科研使用)图2:NaicaTM Crystal Miner分析软件自动生成的2D(左),3D点图(右)和微滴原始图像。检测样本为试剂盒的阳性对照。FAM和HEX标记的探针特异地靶向2019-nCoV(COVID-19)基因组的ORF1ab和N基因,Cy5标记的探针检测人类看家基因。阈值线由Crystal Miner软件自动生成,也可参照试剂盒说明书2019-nCoV检测的特异性和灵敏度以1ng人类RNA为背景,将合成的2019-nCoV(COVID-19)靶标序列连续稀释七个点进行检测并重复三次。结果表明,在所有测试样本中,2019-nCoV(COVID-19)的ORF1ab基因(FAM)从80个拷贝到5个拷贝,N基因(HEX)从120个拷贝到7个拷贝均能检测到。对样本进一步稀释,上述两种基因在每25μl反应中可检测到2个拷贝。(图3)同时以人RNA为阴性对照(15个孔)进行检测,无假阳性结果。图3:2019-nCoV(COVID-19)一步法RT-digital PCR核酸检测试剂盒的灵敏度评测。检测在1ng人类RNA背景下合成的2019-nCoV(COVID-19)靶标序列的系列稀释液。竖线表示置信度为95%时平均值的置信区间。空圆圈表示未检测到2019-nCoV(COVID-19)。应用亮点★ 2019-nCoV(COVID-19)一步法RT-digital PCR的核酸检测试剂盒是即用型核酸检测试剂盒,在一个反应中即可完成两个2019-nCoV(COVID-19)靶标序列进行绝对定量检测,同时检测内参基因监控RNA样本质量和PCR扩增有效性。★ 使用NaicaTM微滴芯片式数字PCR平台进行的2019-nCoV(COVID-19)靶标序列进行特异性和灵敏度检测,可观察到低至5个拷贝的ORF1ab基因和7个拷贝的N基因。★以人RNA为阴性对照,15个样本均未观察到假阳性。【参考资料】1. Chan JF, Yip CC, To KK, Tang TH, Wong SC, Leung KH, Fung AY, Ng AC, Zou Z, Tsoi HW, Choi GK, Tam AR, Cheng VC, Chan KH, Tsang OT, Yuen KY. Improved molecular diagnosis of COVID-19 by the novel, highly sensitive and specific COVID-19-RdRp/Hel real-time reverse transcription-polymerase chain reaction assay validated in vitro and with clinical specimens. J Clin Microbiol. 2020 Mar 4.2. Stilla Technologies. A 3-color Crystal Digital PCR kit for detection of COVID-19.
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2020.03.26
在《J Proteomics》期刊杂志中2020年2月刊发了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章综述,其中指出Western blotting已经有40多年的历史,仍然是现在单一蛋白常用的分析技术,但因为其数据重复性、稳定性和定量的精准性引起科研界的关注,其数据可以通过研究方法的进步,仪器的提升,期刊杂志的对数据新要求的变化,使Western blotting数据的重现性和精准度都有所提高。那我们看看期刊杂志对提交的Western blotting数据都做了哪些要求:1. 不建议跑平行胶,因为平行胶和剥离膜,孵育体系,操作条件的不一致,影响定量的准确性,因此最好内参和目的蛋白要在同一张印迹膜上。2. 选择宽动态范围的方法,确认信号强度与所上样量之间的线性关系,例如用胶片做化学发光方法的动态范围就很窄,不建议使用。数字成像相比胶片动态范围更宽,定量更准确3. 强烈推荐使用总蛋白进行归一化,因为看家蛋白容易受处理条件影响而发生变化,影响定量的结果,使用总蛋白定量更真实地反映目标蛋白表达量的变化。4. 提交原始数据,例如:JBC,PLOS和CELL等杂志都要求要提供原始数据。对于化学发光为主,经费预算又有限的用户,Azure同样给出一个适合的配置,那就是Azure300Q:* Azure300Q带有Q模块,可激发AzureRed等染料进行全蛋白定量,最后化学发光条带和总蛋白条带同时在一张膜上成像,满足Nature,JBC等期刊杂志的总蛋白定量要求,帮助用户发表文章。* 同时Q模块还可以激发例如Cy3,AzureSpectra550,AlexaFluor546,Qdot565,罗丹明等染料,还可以做荧光内参与化学发光条带同时在一张印迹膜上成像,荧光动态范围更宽,相比于传统的化学发光内参定量更准确。荧光内参和化学发光同时成像* Azure300Q标配9.1MP的高分辨CCD,动态范围可达4.8OD,保证结果的准确性。过饱和检测可防止定量误差,相同的印迹膜分别使用胶片成像和Azure成像系统,Azure成像系统具有过饱和提醒,自动计算曝光时间以避免饱和。* Azure300Q可进行自动彩色Marker与化学发光条带的整合,符合期刊杂志中不过度裁剪Marker的要求,分子量查看更直观。彩色Marker与化学发光条带成像* Azure300Q成像系统提供16bit的tiff原始图,将更真实的数据给到客户,保证结果的真实性和可靠性。* Azure300Q还可以做考马斯亮蓝染色的蛋白胶、核酸胶、银染胶等成像。
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2020.03.23
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2020.03.23
病毒性肺炎(viral pneumonia)是由病毒侵犯肺实质细胞而造成的肺部炎症,常由上呼吸道病毒感染向下蔓延引起。随着呼吸道病毒检测技术的进步,病毒性肺炎的发病率和死亡率逐渐得到认识,研究人员发现流感病毒感染占病毒性肺炎患者的大多数。流感病毒是季节性流感和偶发性流感大流行的病原体。世卫组织估计,流行病每年导致约300-500万严重病例,全球约有29万-65万人死于呼吸道疾病。目前流行的季节性流感病毒包括A型的H1N1和H3N2以及B型。已有报道指出,平均每个季节由B型流感病毒引起的病例占流感相关死亡的29%,而在B型流感高发期,这一比例高达95%。 目前,治疗流感病毒感染的药物主要有两种,分别是M2离子通道阻滞剂(金刚烷胺、金刚乙胺)和神经氨酸酶抑制剂NAIs(奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦和拉尼米韦)。由于广泛耐药的出现和对B型流感病毒缺乏疗效,M2离子通道阻滞剂不再推荐使用;因此,NAIs成为抗病毒药物的主要类别。然而,耐NAIs突变体的出现仍会降低其疗效。因此,对耐NAIs突变体的研究变得至关重要。近日,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心(世界卫生组织流感参比和研究合作中心)等联合在《Virology》发表了名为Effectiveness of favipiravir (T-705) against wild-type and oseltamivir-resistant influenza B virus in mice的文章。Favipiravir法维吡韦也称为T-705,靶向流感病毒的RNA依赖的RNA聚合酶RdRp,可抑制A,B和C型流感病毒,包括耐奥司他韦的菌株。该研究在其基础上检测了T-705对耐奥司他韦B型流感的功效。在这项研究中,研究人员使用致死小鼠模型评估了T-705对野生型和耐奥司他韦的乙型流感病毒的影响。此外还评估了体内药物治疗后是否发生了诱导对T-705敏感性降低的突变。结果显示T-705以剂量依赖的方式保护小鼠免于致命感染。T-705还能显著降低病毒载量和抑制肺病理学。此外,表型分析显示T-705耐药病毒在T-705处理后没有出现,即T-705可以有效地保护小鼠免受野生型和对奥司他韦具有耐药性的B型流感病毒的致命感染。文中使用Naica Crystal Digital PCR系统评估了T-705对野生型和耐奥司他韦的小鼠呼吸道病毒载量的影响,具体为测定了小鼠肺部、鼻甲骨、气管(对应下面两幅图的C/E/F)中流感病毒的非结构蛋白1 (NS1)基因拷贝数。法国Stilla Technologies Naica数字PCR平台是实现DNA/RNA绝对定量的技术工具,自动生成和组装单层平铺的微滴,进行单分子PCR扩增,通过高分辨率的三色荧光通道检测,自动QC质控,识别三色荧光中有效的阴阳性微滴,从而达到目的DNA/RNA的绝对定量检测。同时提供原始数据、单微滴追溯等功能,确保数据真实可靠。* 只需一步加样操作,无需标准品和标准曲线是真正的绝对定量系统。通过对模板的有限稀释,耐受抑制剂能力强,更有利于临床、环境等复杂样本的检测。* 有效微滴:25000~30000/样本,实现低浓度、低丰度的核酸样本进行准确定量。* 封闭式芯片设计,样本间独立,避免了加样交叉污染风险,同时防止扩增后的气溶胶污染,保证结果安全可靠和实验环境安全。
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2020.03.19
新发和再发传染病对公共卫生造成了严重影响。然而,由于这些病原体例如新冠COVID-19,SARS必须在3或4级别生物安全实验室中进行处理,因此抗病毒药或疫苗的研发常常受到阻碍。人们一直在积极寻求解决这一问题的替代方法,其中使用假病毒代替野生型病毒,是一种很好的手段。假病毒是一种重组病毒颗粒,其核心/骨架和包膜蛋白来源于不同的病毒。假病毒内部的基因通常被改变或修饰,使得它们不能自行产生表面蛋白。假病毒能够感染易感细胞,但是它们仅在感染的宿主细胞中复制1轮。与野生型(WT)病毒相比,假病毒可以在2级的生物安全处理级别的实验室进行处理,更易于操作。假病毒被广泛用于细胞病毒感染机制,受体识别研究,以及疫苗开发和评估中和抗体等。由于假病毒通常经过工程改造以携带报告基因,因此对这些病毒进行定量分析比对WT病毒容易得多。在研究假病毒时通常使用qPCR检测构建的假病毒的病毒滴度,使用Western blot鉴定假病毒是否表达等。例如由北京大学健康科学中心微生物与传染病中心,在《Plos One》发表的《Development and Evaluation of a Pseudovirus-Luciferase Assay for Rapid and Quantitative Detection of Neutralizing Antibodies against Enterovirus 71》的文章中使用qPCR的方法对构建的假病毒滴度进行检测,qPCR方法可以更加准确地测定病毒滴度和病毒感染效率。更精准的定量可以选择Naica微滴芯片数字PCR系统。由军事医学科学院军事兽医研究所和河南科技学院动物科学与兽医学院在《JVS》上发表的《Packaging of Rift Valley fever virus pseudoviruses and establishment of a neutralization assay method》的文章中,使用Western blot方法对构建的假病毒进行鉴定,实验显示两个特异性条带,分子量约为65 kDa和56 kDa,分别与RVFV G1和G2蛋白的大小一致。阴性对照组未见特异性条带。这些结果表明,目的蛋白的表达是正确的。western blot检测结果均表明所得到的RVFV假病毒含有RVFV G1和G2蛋白,证实了假病毒的成功构建。Azure CieloTM实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司,融合了高品质PCR温度模块和卓越的荧光检测系统,为您的科学研究提供高精准、高灵敏可靠结果。产品特性:· 数据可靠性——连续1000次实验,结果高度一致。· 应用灵活性——提供多种qPCR应用分析。· 流程智能化——触控屏和直观用户界面,操作简单,可多机联用。· 在线便捷性——主机可独立运行qPCR程序,数据可USB、Wi-Fi等网络传输。连续运行1000轮qPCR实验(GAPDH定量)Cq值。在Azure IRIS上,连续运行1000轮qPCR实验(GAPDH定量),每轮96个反应,并连续计算Cq值的平均值和Cq值的标准偏差。Cq值=22.4±0.01选择western blot检测方法时,使您不再受限于成像系统。荧光检测方法具备出色的定量检测和多重检测能力。化学发光检测具备绝佳的灵敏度,适用于低丰度蛋白检测;Azure Biosystems试剂开放,您可以任选方法、任选试剂获取数据。产品特性:· 双红外检测-激光光源658nm和784nm,较LED光源和白光光源灵敏度更高,信噪比更好。· 同时4通道荧光成像,配合AzureRed荧光蛋白染色试剂进行全蛋白定量,更符合期刊杂志数据要求。· 快速高灵敏化学发光检测,具有多种曝光方式可供选择,包括快速自动采集,宽动态范围采集,低丰度样品长时间采集,累积曝光,多重曝光等。· 彩色Marker成像,分子量查看更直观。· 2min完成制冷,即插即用。· 符合21 CFR Part 11。参考文献:1. Yuetao Li,Yongkun Zhao etc. Packaging of Rift Valley fever virus pseudoviruses and establishment of a neutralization assay method. J Vet Sci2018, 19(2), 200-206 https://doi.org/10.4142/jvs.2018.19.2.2002. Qianqian Li etc. Current status on the development of pseudoviruses for enveloped viruses. Rev Med Virol.2017;e1963.https://doi.org/10.1002/rmv.19633. Eva Chand etc .evelopment of a Moloney Murine LeukemiaVirus–Based Pseudotype Anti-HIV Assay Suitable for Accurate and RapidEvaluation of HIV Entry Inhibitors. Journal of Biomolecular Screening 11(6);2006DOI: 10.1177/1087057106288881
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2020.03.13
病毒性疾病不仅严重危害人类健康,而且其爆发还会造成社会恐慌并导致一系列的损失,比如此次的新型冠状肺炎疫情。除了尽快研发出抗病毒药物之外,抗击新冠肺炎的重要一步就是对携带病毒患者的确诊以及及时的隔离治疗,这是预防和控制病毒性疾病传播的基础。目前主要的确诊方法是基于病毒核酸检测和病人临床表现,但是在样本量比较大时,该确诊方法比较耗费医护人员的体力。在生命科学领域,荧光成像技术是一种重要的研究手段。科研人员经常使用荧光探针标记病毒核酸或者衣壳蛋白,从而研究病毒的感染机制,比如单颗粒示踪技术等。那么在新冠病毒检测方面,我们也可以使用荧光标记病毒并通过荧光显微镜确证是否有病毒感染。在标记荧光的选择上,常用的有机荧光染料和荧光蛋白等,因光学稳定性差,并且易发生光漂白,难以实现对病毒颗粒的长时间示踪。量子点(quantum dots, QDs)是一种直径约为2-10nm的荧光无机纳米材料,荧光性质优异,可弥补现有荧光蛋白和荧光染料的不足。是用量子点可以对病毒的囊膜和内部核酸进行标记。图示:量子点标记病毒用于活体动物的安全性研究Echo Revolve正倒置一体显微镜,凭借超高优异性能帮助您的新冠病毒确诊研究。正置倒置均可实现荧光拍照,新型LED光源对病毒样本损伤小,超长稳定性并且无需预热,即开即用。在当前的新冠疫情下,时间就是生命。多达4个EPI荧光通道,通过iPad Pro实现全自动化操作。Revolve可实现4个荧光通道和1个明场通道的图像自动叠加整合。多个荧光通道可以满足您标记不同荧光的需求,有效区分不同病毒。Echo Revolve正倒置一体显微镜拍摄的多通道荧光图片展示除此之外,无目镜设计,符合人体功能学,释放眼睛和颈椎,超高分辨率Retina视网膜显示屏,轻松检测大量实验样本。
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2020.03.13
国家卫健委发布了《新型冠状病毒肺炎防控方案(第五版)》,其中在实验室检测技术指南中明确提出,核酸检测结果阴性不能排除新型冠状病毒感染。3月4日,国家卫健委发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》 中提到了以下两点:对疑似病例要尽可能采取包括快速抗原检测和多重PCR核酸检测等方法对呼吸道病原体进行检测。在传播途径中提到:“在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在传播的可能”。目前检测困难:从感染到治愈,至少需3次使用PCR检测:疑似筛查、确诊、治愈。针对2019-nCoV病毒的检测相关技术已成为应对疫情的紧急。在《中华医学杂志》2020年2月11日刊登的《新型冠状病毒肺炎病毒核酸检测专家共识》在判断条件中提出:“当报告为"可疑"时,实验室应考虑以下措施:(1)更换不同厂家的试剂盒重复实验或采用敏感度更高的方法,如数字PCR方法进一步确定;(2)建议临床重新采集标本或更换部位采集标本再次检测。” Naica微滴芯片式数字PCR针对新冠病毒检测解决方案(仅供科研使用)基于Naica自动化微滴芯片式数字PCR系统和三通道探针法新冠病毒检测试剂盒,高特异性,高灵敏度且全封闭过程确保安全性。通过一步法反转录-数字PCR-探针方法,只需加入RNA模板,即可实现高特异性、高灵敏度、全封闭地新冠病毒RNA定性检测和绝对定量。在一个样本管中同时检测新冠病毒的开放读码框1ab(ORF1ab)、核壳蛋白(N)基因区域和人内源质控基因。新型冠状病毒2019-nCoV一步法核酸检测试剂盒(数字PCR法)应用1、用于有接触史尚无症状者排查,检测病毒携带状况;2、 用于荧光PCR的Ct值在37-40之间的可疑样本的核酸精准检测。3、 用于新型冠状病毒感染患者病毒载量动态观察:基于数字PCR的绝对定量能力,提供更为准确的病原体载量。4、可用于治愈后患者体内病原体核酸检测。5、 标准参考物质的制备:数字PCR是制备标准参考物质定量的重要方法,为荧光PCR试剂盒提供可靠的标准物质。优势1、采用创新的一步法逆转录数字PCR检测试剂盒,可将逆转录及数字PCR扩增整合到一个反应,实现单反应三重的检测,可同时检测2019-nCoV新冠病毒两个靶基因和人源内参基因,监控上样同时也消除病毒变异带来的风险。2、试剂盒里含有阴性质控样本和阳性质控样本,可以对实验过程和核酸样本进行质控。3、能够从大量背景和干扰信号中检测到病原体核酸,检测灵敏度较普通荧光PCR可提高1-2个数量级,最低检测可实现单拷贝检测。4、可搭配Naica微滴芯片数字PCR使用,独立反应芯片设计,不易产生交叉污染,也避免了气溶胶的污染。5、操作简易,核酸提取完成后只需要一步加样就可完成所有人为操作,其他操作由仪器自动来完成。6、检测迅速,核酸提取完成后,检测流程约2.5h即可完成。7、根据《新型冠状病毒感染的肺炎实验检测技术指南(第二版)》,本指南中的核酸检测方法主要针对新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b(open reading frame 1ab,ORF1ab)、核壳蛋白(nucleocapsid protein,N),同时增加人源内参基因的检测。
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2020.03.11
Western Blot方法是生物实验室常用的蛋白检测方法之一,自从1979提出至今已有40 多年的历史。通过抗原抗体的特异性结合来检测靶标蛋白,主要用于分析蛋白的表达情况。传统的化学发光法由于是酶促动力学反应,受温度,PH,底物浓度影响,重复性,稳定性很难保证,只能达到定性或者半定量的分析结果。 近红外荧光Western Blot检测方法克服了传统化学发光检测方法的局限,同时各主流期刊杂志对Western Blot数据也做了新的一些规定,尽可能提高Western Blot数据的可靠性、准确性和重复性。★ 讲座主题:如何获得满足期刊杂志要求的定量Western Blot数据★ 讲座内容:1.Western Blot技术原理和进展介绍2.如何选择合适的方法进行Western Blot检测3.如何获得定量Western Blot数据4.激光近红外检测的优势5.Azure成像平台技术的优势★ 讲座嘉宾:卢辉,Azure产品应用专家,毕业于中国农业大学,在Western Blot检测成像领域有着丰富的理论和实验经验。★ 讲座时间:2020-03-19 上午10:00至11:00★ 报名参会:识别二维码报名参会★ 公司简介:北京深蓝云生物科技有限公司致力于为用户提供新型生命科学研究仪器和分析产品以及优化的整体应用解决方案,承担着美国 Azure Biosystems多功能分子成像系统在中国的技术示范与服务职能,深蓝云生物配备着专业的技术支持和应用支持,依托国际领先的生命科学产品和解决方案,专注为用户提供分析产品和完善的售前咨询和售后服务。
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2020.03.11
人类DNA中HPV16和HPV18的灵敏度和特异性检测全世界有超过5%的癌症是因人乳头瘤病毒(HPV)导致的,它主要通过性传播的方式感染[1]。十多种HPV亚型由于其在细胞转化中的作用以及宫颈癌和口咽癌发病率的增加而被认为是高风险的。在这些亚型中,HPV16和HPV18是最普遍的,在大约70%的宫颈癌和90%的口咽癌中均能检测到[1]。HPV16和18通过将其病毒序列的片段(包括致癌的E6和E7区域)整合到细胞基因组中,从而使细胞永生并转化。使用能够区分高危型HPV和低危型HPV的灵敏而特异的分子技术,进行早期HPV检测对于治疗癌前病变和预防宫颈癌进展至关重要。在这里,我们展示了使用3色荧光通道NaicaTM自动化微滴芯片数字PCR系统上的检测方法(表1)如何可靠地检测和定量人类DNA样品中的HPV16,HPV18和人类参考基因ALB(图1)。表1使用优化的3色NaicaTM自动化微滴芯片数字PCR系统进行HPV分析,在仅包含人类野生型基因组DNA(最终浓度为400 cp /μL)的36个重复样品中,未检测到假阳性,空白限为0。在以人类野生型DNA(最终浓度为400 cp /μL)为背景下对合成的HPV16和HPV18 DNA进行系列稀释,并进行了3次重复,结果检测到HPV16和HPV18基因在95%的置信水平下,最终浓度降至每微升0.2个拷贝,突变等位基因频率为0.05%(图2)。图1Crystal Miner软件生成的3D点图,图中同时显示检测到的HPV16、HPV18和ALB参考基因。荧光基团名称显示在括号中。3色NaicaTM自动化微滴芯片数字PCR系统检测(A)HPV16和(B)HPV18靶标的线性和灵敏度。在400 cp/μL WT-DNA(10000拷贝/25μL反应)的背景下,对HPV16和HPV18的连续稀释样本进行了3次测定,稀释范围为20-0.2 cp/μL(500-5拷贝/25μL反应)。竖线表示95%置信区间下的浓度范围。患者样本中稳健的HPV16和HPV18检测采用3色荧光通道NaicaTM自动化微滴芯片数字PCR系统技术,利用HPV试剂盒对4例口咽癌患者福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)肿瘤组织和4例非HPV感染的非小细胞肺癌(NSCLC)患者FFPE组织中提取的DNA进行分析(表2)。口咽部FFPE样本先前使用实时荧光定量PCR进行了检测[2]。采用3色NaicaTM自动化微滴芯片数字PCR系统检测的4份HPV16和HPV18样本均为阳性,非HPV样本检测结果为阴性。表2癌症患者FFPE DNA样本中HPV16和HPV18的定量。结果以sapphire芯片中的每微升拷贝数(最终浓度)给出。应用说明亮点· 3色荧光通道NaicaTM自动化微滴芯片数字PCR系统能够同时检测和定量HPV16和HPV18以及人类参考基因ALB。· 在每25μL反应10000个拷贝的野生型DNA背景下,尽管突变等位基因的频率为0.05%,HPV16和HPV18依然能够精准的被检测到,并且在95%的置信区间内没有检测到假阳性。· 在连续稀释实验中,3色HPV检测显示预期和测量的HPV16和HPV18浓度之间存在良好的相关性。· 3色荧光通道NaicaTM自动化微滴芯片数字PCR系统成功地检测出口咽癌患者FFPE肿瘤标本DNA中HPV16和HPV18。
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2020.03.06
科研战“疫”有我为应对新型冠状病毒感染的肺炎疫情,除了医院、疾控中心等抗疫一线的工作人员的不断奋战,全国高校科研工作者纷纷把科研精力投入到最紧迫的疫情防控攻关任务上来,实验室,也是这些科研工作者们拯救生命的战场。从1月下旬起,各大高校,启动了一批应急科研攻关项目,在这场与病毒争夺生命的战“疫”中贡献高校科研力量。图源:中国科学院大学公众号科研团队将从病原学研究及溯源分析、诊断试剂研发、疫苗制备、人源化抗体制备、病理机制研究、药物靶点筛选等方面开展研究工作。上图为中国科学院大学在研究mRNA疫苗的开发,进行中和抗体基因扩增的检测,使用的Azure Biosystems的c系列成像系统进行成像,在后期动物实验抗体检测中,Azure成像系统也可出色的完成相关实验,包括多重荧光western blot检测,激光近红外精准定量western blot,高灵敏化学发光检测和普通凝胶成像等等。这场无硝烟的战疫中,Azure也是一份子,贡献自己的一份力量,科研战疫有我-Azure。
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2020.02.27
新冠病毒疫情防控进入攻坚阶段,如何快速准确地确诊疑似病例是防控关键且紧急的一个环节。面对严峻的疫情形势,深蓝云生物为了更好的为国家疾病防控体系的多家实验室和全体战斗在疫情最前端的Naica自动化数字PCR系统用户提供技术支持和服务,深蓝云视讯实验室正式上线。随时随地实现远程技术支持和实操培训,保障前线高灵敏新冠检测的每一个步骤正确实现!同时也非常感谢中创视讯的全线支援,感谢中创视讯的技术人员,确保了清晰流畅的数据传输!工作人员在安装调试远程装置技术人员在远程实操培训同时今天工作人员为一线紧急发送新冠病毒数字PCR检测试剂盒。在此次新型冠状病毒疫情防控中,深蓝云生物与那些奋战在一线的战士们一起,携手共渡难关!他们与我们,我们与你们,共克时艰,投身战“疫”,胜利的号角即将踏春而来!
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2020.02.26
在此次的新型冠状病毒疫情中,核酸检测作为确诊的金标准发挥着重要的作用。众所周知,本次新冠病毒的核酸检测流程为采样(咽拭子、肺泡灌洗液),提取病毒RNA,再经过RT-qPCR或者一步法RT-数字PCR检测样本。但近期关于核酸检测准确性的讨论也甚嚣尘上,其中PCR实验污染是导致实验有偏差的原因之一, 造成PCR实验污染的主要原因有以下几点,样本间交叉污染(样本泄漏引起的交叉,样本提取过程中移液器、耗材的污染),PCR试剂的污染(容器、耗材、移液器,水等被污染),PCR扩增产物污染,气溶胶污染,克隆质粒污染等。在病毒核酸检测过程中,结果的准确性除了检测方式的灵敏度很重要以外,保证提取RNA样本的完整性也十分重要。今天我们就聊聊如何防止RNA降解,获得高质量的RNA进行后续试验。导致RNA降解最主要的物质就是RNase,RNase非常稳定,且无处不在,用常规的高温高压蒸汽方法和蛋白酶抑制剂不能使所有的RNase完全失活。RNase结构除上述方法外,研究人员最常用的就是使用DEPC等对实验过程中使用的耗材和试剂进行处理,但DEPC处理时间长且有毒,下面给出远离DEPC的三大理由:1、DEPC 对人体有害,DEPC为高活性烷化试剂,能对蛋白质进行共价稀释,使其组氨基团的乙氧基甲酸化(RNase 活性位点有两个组氨基酸,故能被灭活);同时能使 RNA 分子中没配对的腺嘌呤羟甲基化,改变其活性,严重时会影响 RNA 形成杂交双链的能力,归为强致癌物,使用时要十分小心。2、不能处理一些试剂:例如:一级胺的试剂TRIS,PBS等,会发生化学反应;二是不能高压灭菌的试剂,DTT,dNTP,Mgcl2,因为 DEPC必须通过高压灭菌去除;三是不能用于PH低于4及以下的试剂,DEPC在此条件下对RNase没有灭活作用。3、DEPC不适合某些实验,测OD值的实验,OD读数跟 PH 有关, DEPC 在溶液中分解后变成乙醇和二氧化碳,部分二氧化碳与水反应形成碳酸,导致 PH 降低,进而降低OD值。实验者迫切需要一种非常快速且方便的去除RNase的方法,保证结果的准确性。使用 KeyPro™KP100生物污染紫外净化仪,通过275nm和365nm双紫外的协同作用可在5min解除上述污染烦恼。免清洗,无化学残留,方便快捷,适用于高保真 RNA 文库制备,测序和 PCR 实验室中的微孔板去污、移液器、水、金属、陶瓷、塑料、玻璃等表面RNase的灭活等。同时KeyPro™KP100还可以去除病毒和细菌等的污染,防止实验用品导致的实验结果和环境污染。KeyPro™KP100 生物污染紫外净化仪采用 SLM™专利技术将 LED 阵列,光学元件和热冷却技术集于一身,可最大限度地提高消毒和去污性能,为您节省宝贵的科研时间。仪器优势:1. 5min 完全灭活污染物2. 触屏操作,简单易用3. 快速,通量高4. 稳定,一致的效果5. 降低实验室耗材成本6. 工作流程集成化
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2020.02.26
2月27日北京时间24:00(巴黎时间:17:00),来自LGC国家计量实验室的Dr. Alexandra Whale将于Genomeweb平台在线分享“dPCR在量化常用于诊断和选择靶向治疗的基因CNVs方面的应用。”本次网络研讨会将重点讨论dPCR在量化常用于诊断和选择靶向治疗的基因CNVs方面的应用。利用乳腺癌中的HER2基因的模型,研究dPCR测量基因拷贝数的微小变化的能力,并进一步研究以开发方法来抵消可能由样品中连锁的目标拷贝数引起的测量偏差。此外,还将重点介绍dMIQE指南更新版本中的关键dPCR性能参数,从而促进dPCR最佳实践以及将dPCR作为金标准方法。Alexandra Whale是位于LGC的国家计量实验室(NML)的分子和细胞生物学团队中核酸创新的科学带头人。NML是英国化学和生物分析测量的指定机构。自2009年加入以来,她的研究集中在数字PCR的广泛应用,包括与微生物和抗菌素耐药性相关的DNA的定量和检测,以及癌症中拷贝数变异和罕见序列的检测。内容简介:自2013年数字MIQE指南:数字定量PCR实验发表的最低信息(the Digital MIQE Guidelines: Minimum Information for publication of Quantitative Digital PCR Experiments, dMIQE)发布以来,dPCR的应用范围大幅扩大,如与疾病诊断相关的单核苷酸变异(single nucleotide variance, SNVs)和拷贝数变异(copy number variance, CNVs)的检测。与此同时,国际计量组织,如LGC的国家计量实验室(NML),一直致力于开发SI可追溯的分子方法,以支持将这些应用转化为临床。数字PCR有可能成为一种可追溯的方法,因为靶标的浓度是根据目标阳性分区的比例和泊松统计的应用来计算的。利用乳腺癌中的HER2基因的模型,我们将研究dPCR测量基因拷贝数的微小变化的能力,并进一步研究以开发方法来抵消可能由样品中连锁的目标拷贝数引起的测量偏差。此外,还将重点介绍dMIQE指南更新版本中的关键dPCR性能参数,从而促进dPCR最佳实践以及将dPCR作为金标准方法。注册页面:注册地址:https://event.on24.com/eventRegistration/EventLobbyServlet?target=reg20.jsp&partnerref=stillalp&eventid=2171779&sessionid=1&key=091C2B0B84CD7231B3FBC9FF2AE050D4&re
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2020.02.26
如何快速、准确筛查并确诊新冠肺炎患者成为当前全民战“疫”的重中之重。目前被广泛采用的核酸检测方法检测结果阳性比率低,仅为30%-50%。此外,还有检测流程繁琐、检测时间过长、存在安全风险等缺点。找到快速、准确、安全的新冠病毒检测方案迫在眉睫。2020年2月18日~19日由仪器信息网特别举办“新型冠状病毒检测”专题网络研讨会,为广大一线工作人员开展新冠病毒检测技术交流和推介优秀解决方案。报告题目: Naica数字PCR检测新冠病毒的解决方案2019年12月以来新型冠状病毒肆虐,深蓝云生物开发了基于Naica三色自动化数字PCR系统新冠病毒核酸超敏检测试剂盒方案,数字PCR技术通过将PCR反应体系分成万级以上的反应体系,实现核酸的单分子扩增,通过泊松分布获得核酸的拷贝数,是真正的绝对定量检测方法,具备高灵敏度、高精准度、高分辨力、高耐受力等技术特征。较qPCR检测提供了更好的检测限和灵敏度,降低了抑制剂的影响,对qPCR核酸检测提供有效的灵敏度补充,拥有三荧光通道的设计为新冠病毒核酸提供了数字PCR多重检测能力,Naica微滴芯片式数字PCR系统正在中国疾病预防控制中心病毒所等多家单位进行新冠病毒的超敏核酸检测的方法验证。检测后利用Keypro生物污染快速净化仪5min对移液器和耗材等表面进行污染消除,防止实验用品导致实验结果污染和环境污染。时间:2月19日9:30-10:00主讲人介绍:李冰,北京深蓝云生物科技有限公司数字PCR产品经理,毕业于中科院生物物理所,从事分子诊断产品的应用开发及市场推广近十年,致力于数字PCR技术在分子诊断领域的应用解决方案开发及实施。日程:参会报名:点击“新型冠状病毒检测专题网络研讨会”官方页面进行报名。为保网络畅通,仅向全国开放200个免费席位。详细报名指南请见官方报名指南。报名网址:https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/2019-ncov/
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2020.02.15
2019年12月以来新型冠状病毒肆虐,深蓝云生物科技全力推出Naica自动化微滴芯片式数字PCR系统配合多家Naica用户开发的三通道探针法新冠病毒检测试剂盒,高特异性、高灵敏度,全封闭过程确保安全性。数字PCR技术通过将PCR反应体系分成万级以上的反应体系,实现核酸的单分子扩增,通过泊松分布获得核酸的拷贝数,是真正的绝对定量检测方法,具备高灵敏度、高精准度、高分辨力、高耐受力等技术特征。针对2019-nCov新型冠状病毒,Naica数字PCR平台用户开发出针对新型冠状病毒的开放读码框1ab(open reading frame,ORF1ab);核壳蛋白(nucleoprotein,N)基因区域进行绝对定量检测,同时增加CY5标记的质控基因检测。通过一步法反转录-digital PCR结合TaqMan探针方法,只需在扩增试剂中加入RNA模板,即可直接获得病毒RNA拷贝数浓度。实现高度特异、高灵敏的数字PCR绝对定量检测方案。Naica数字PCR平台三通道检测新冠病毒绝对拷贝数的整套方案,具备的如下特征,在核酸检测领域体现了卓越的性能和潜在的应用意义。◆ 高耐受力、高特异性——复杂样本的精准检测◆ 操作快速、过程封闭:高度安全◆ 严格质控、流程快速:结果客观可靠新冠病毒数字PCR检测试剂盒说明新型冠状病毒三重数字PCR检测试剂盒能在同一管中,针对同一样本中同时进行三重检测,包括核壳蛋白(nucleoprotein,N)基因:FAM标记;开放读码框1ab(open reading frame,ORF1ab)VIC标记;和内标基因:CY5标记,实现对样本重量的质控。试剂盒组成:1)新冠引探混合物(N基因FAM标记,ORF1ab VIC标记,内标基因CY5标记):1管;2)新冠阳性质控品:1管。3)2x新冠病毒数字PCR扩增试剂:1管。4)10X荧光染料:1管注:需自备试剂① 核酸提取试剂盒用于核酸提取;② DEPC H2O;③ 微滴反应板Sapphire Chips;* 仅供科研使用试剂盒信息来源于使用Naica数字PCR平台进行新冠病毒数字PCR检测试剂盒开发者。在Naica数字PCR系统的使用过程中,深蓝云公司将提供7X24小时在线支持服务。法国Stilla Technologies公司的Naica 自动化微滴芯片数字PCR系统是最新一代的数字PCR平台,是目前市场上唯一款自动化完成三色检测的、闭管检测的、带有可视化质控的数字PCR平台。该平台只需一步人工操作,只需一种耗材——Sapphire 芯片,通过单层微滴阵列的方式分散PCR体系,在25000-30000个均匀一致的微滴中,对靶标DNA序列在同一温度循环的条件下进行独立且稳定的PCR扩增,最大程度简化工作流程,提高了结果的重复性和重现性,从而显著提高工作效率。法国Stilla Technologies公司成立于2013年,位于法国首都巴黎Villejuif生物园,致力于开发新一代的核酸定量和检测工具。参与欧盟2012-2019年的地平线Horizon计划,与PHILIP公司共同承担LIMA计划中的液态活检项目,作为提高欧洲卫生健康检测的重要方向。在美国波士顿和欧洲分别设置研发和应用测试与开发基地,是进行创新型生命科学开发公司。2018年获illumina Ventures 投资,并获选2019年11月新亮点产品,并荣获全球SLAS自动化产业大会NPA大奖。2019年获得启迪控股增资。启迪控股是依托清华大学设立的聚焦科技服务领域的科技投资控股集团,是清华科技园开发建设与运营管理单位,公司控(参)股上市及非上市企业800多家,管理总资产规模近2000亿元人民币。
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2020.02.14
连日来,新型冠状病毒感染的肺炎疫情牵动人心,疫情当前,人人责无旁贷。深蓝云生物科技全体员工各尽其职,坚守岗位,积极支持全国抗疫战斗。2月12日深蓝云生物科技公司工作人员奔赴一线,为疾控中心做技术支持和服务。疾控中心工作人员使用Naica数字PCR平台2月13日深蓝云生物科技公司工作人员为河南一线紧急发送全封闭Naica 自动化数字PCR核酸超敏检测系统 。2月13日,多家Naica数字PCR平台用户陆续推出基于此平台的开三通道新冠病毒检测试剂盒。自1月23日起深蓝云生物科技全体人员在线值班,7X24持续待命,为中国国家疾控中心、各省级疾控中心、和全体战斗在疫情最前端的Stilla Naica自动化数字PCR系统用户提供7X24小时的技术支持和服务。另附病原体分子生物学检测解决方案,供抗疫一线的您选择。优先保证疫情检测重点单位的高灵敏度扩增试剂和核酸检测耗材紧急供应。致敬那些奋战在一线的战士们,请你们保护好自己。众志成城战疫情,深蓝云与您同在。
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2020.02.14
巴黎,2020年2月11日—领先的数字PCR (dPCR)高精度基因分析解决方案的供应商Stilla Technologies,刚刚在一系列B轮融资中筹集了2000万欧元(合2200万美元),这轮新的投资者包括中国的TUS‐Holdings控股公司,以及现有投资者Illumina风险投资公司,Kurma Partners, LBO France, Paris Saclay Seed Funds, BNP Paribas Développement 和Idinvest Partners。Stilla Technologies的联合创始人兼首席执行官Remi Dangla说:“我们将利用这笔资金来促进我们下一代解决方案的开发,该方案将具有卓越的分析性能,包括6色通道检测能力。我们未来的重点是将我们最先进的技术应用于临床诊断,造福患者。”Remi补充道:“通过引入TUS‐Holdings,我们也希望在保持欧洲和美国业务强劲增长的同时,迅速扩大在中国和整个亚洲的业务。继2018年10月的A轮融资之后,公司一直在快速扩张,销售增长强劲,新产品的开发也取得了令人兴奋的进展。新的B轮谈判将使我们以更快的速度继续这一成功的进程。”“我非常高兴地欢迎TUS‐Holdings成为Stilla的投资者之一,并任命TUS欧洲子公司的负责人Daniel Wang为我们董事会的新成员。中国一直是Stilla的主要市场。多年来,我们与本地分销商和合作伙伴Apexbio/Cycloud建立了成功的合作关系。我认为我们的微滴数字PCR技术在中国的前景非常广阔,很高兴Daniel能帮助我们制定最佳战略,抓住中国的机遇。”“无论从技术还是从市场角度来看,TUS都确信Stilla的潜力很大。我们相信公司在中国有一个光明的未来。因此,我们很高兴能将Stilla加入到我们30多家生命科学和生物技术公司的投资组合中。”TUSpark欧洲分公司的首席执行官Daniel Wang表示,“TUS将不遗余力地促进Stilla的发展,包括允许该公司使用我们的创新生态系统和网络。”Mr. Wang将加入Stilla的董事会。自2016年以来,Stilla Technologies一直通过其Naica微滴芯片式数字PCR系统为专门从事分子生物学和遗传分析的研究机构提供突破性的数字PCR(聚合酶链反应)解决方案,使科学家能够以无与伦比的精度来检测和量化DNA突变。Stilla Technologies瞄准的20亿美元的数字PCR市场将成为分子生物学的新标准(2018年有超过3300份科学出版物,主要是肿瘤学方面的)。Stilla Technologies在2016年推出了第一代Naica微滴芯片式数字PCR系统,并在2017年产生了第一笔收入。关于Stilla’s Naica微滴芯片式数字PCR系统Naica微滴芯片式数字PCR系统是一种高度敏感的数字PCR解决方案,微滴数字PCR是运行在该公司的下一代基因检测和核酸定量的技术。Naica微滴芯片式数字PCR系统具有独特的三色检测能力,能够表征多种类型的核酸。它的易用性和最快的结果时间2.5小时这一创新技术区别与市场上的其他数字PCR系统。Naica微滴芯片式数字PCR系统支持广泛的遗传检测和分子生物学检测,包括癌症诊断的液体活检检测、病毒载量定量检测、产前检测和转基因检测。总的来说,Naica微滴芯片式数字PCR系统的优越性能使其成为精准医学研究和治疗监测的首选技术。关于Stilla公司Stilla Technologies成立于2013年,是一家总部位于巴黎的欧洲生命科学公司,专注于通过提供突破性的灵活数字PCR (dPCR)解决方案(Naica系统)来加速下一代基因检测的发展。利用尖端的微流控创新,Stilla的目标是使微滴数字PCR系统成为生命科学所有领域的实验室商品。Stilla通过其充满活力的多学科研发团队,从微流体到化学,包括分子生物学和人工智能,为全球客户提供积极的建议和支持。关于Illumina公司合资企业Illumina Ventures是一家独立管理、专注于医疗保健的风险投资公司,与Illumina建立了战略合作伙伴关系,致力于解开基因组的奥秘。作为早期阶段、增值型投资者,我们帮助企业家将突破性的科学技术发展成为市场领先的公司,以实现医疗保健的转型。我们专注于生命科学工具、治疗、诊断和个人健康方面的投资。关于LBO FranceLBO France公司发展30多年,是法国和意大利私人股本领域的主要参与者,共筹集了60多亿欧元。LBO France公司自成立以来就是一家独立的公司。它的投资活动集中在5个不同的领域,其中风险投资是一个。每个领域都由一个专门的团队支持。LBO France风险投资部门凭借其SISA和数字健康 II基金引领欧洲数字健康领域。关于Kurma PartnersKurma Partners是欧洲在医疗、生物技术和数字诊断创新融资方面的重要参与者,特别是通过Kurma Biofund I和II、Kurma diagnostics以及与欧洲著名研究和医疗机构的战略伙伴关系。关于Idinvest PartnersIdinvest Partners是欧洲领先的中型市场私人股权投资公司。该公司管理着近80亿欧元的资金,开发了多个专业领域,包括创新创业风险资本交易;中端市场公司债务,即单级、优先级和次级债务;一级和二级投资及私募股权咨询服务。成立于1997年的Idinvest Partners曾是Allianz的子公司,直到2010年才作为一家独立公司扩展业务。2018年1月,Idinvest Partners与Eurazeo联手,创建了一家管理着180亿欧元资产的欧洲和北美私募股权投资公司。关于BNP Paribas Développement法国巴黎银行(BNP Paribas Dédeveloppement)成立于1988年,是法国巴黎银行集团的子公司,它将自有资本直接投资于有前途的中小企业和中型公司。作为这些目标公司的少数股东,法国巴黎发展银行(BNP Paribas Dédevelopment)寻求通过促进所有权转让来促进其增长并确保其长期繁荣。它管理着400家公司的投资组合,其中包括50家初创公司。关于TUS‐HoldingsTUS‐Holdings(启迪控股)起源于世界上最大的大学园区清华大学科技园。在全球投资了200多家园区/孵化器,形成了“孵化+投资+并购”的全供应链孵化模式。该集团目前拥有超过35只风险和行业基金,表现出了专注于回报的基金管理能力,这笔对Stilla的投资是通过其卢森堡CLIIF基金进行的。TUS通过投资IVD和精准医疗、医疗器械和医疗服务,积极拓展医疗领域。这一领域的总投资已超过3亿欧元。
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2020.02.13
新型冠状病毒在全国范围内已经肆虐了小半个月了,之前由于猪瘟疫情,猪肉价格涨的很快,一直是大众的谈资,没想到年底被口罩截胡了,成了抢手货,特别是在前线抗战的医务人员,防护资源有很大缺口,口罩就是其一。那是否有合适的处理方法,可以对口罩进行杀毒处理呢?国家出的诊疗方案也更新很快,在试行的第五版诊疗方案中,冠状病毒对紫外线敏感。这不是什么诡异的事情,紫外一直都有杀菌的功效。紫外线对细菌、病毒等微生物的照射,可以破坏微生物机体细胞中的DNA(脱氧核糖核酸)或RNA(核糖核酸)的分子结构,引起DNA链断裂、核酸和蛋白的交联破裂,造成生长性细胞死亡和再生性细胞死亡,达到杀菌消毒的效果,并且有相关文献指出紫外对口罩的防护能力影响较小,在当前的物资紧缺的情况下可以用于口罩的消毒。总结上述,紫外是很好的消毒手段,Keypro采用双紫外UVC-275nm和UVA-365nm,最大可达5W/cm2的辐照强度,照射剂量可达300J/m2,在5min迅速杀死病毒,这样的强紫外可以让口罩中的病毒完全杀死,达到二次使用的效果。除了上述的小应用外,病毒核酸检测人员也会接触到病毒,有被感染的风险。KeyPro还主要用于PCR实验室中的微孔板、移液器、水和试剂、金属、陶瓷、塑料、玻璃等表面细菌,病毒的去除,减少实验人员感染风险。产品特点? 5min完全杀死病毒,细菌等污染物。? 触屏操作,简单易用。? 快速,通量高。? 稳定,一致的效果。? 降低实验室耗材成本。? 工作流程集成化。
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2020.02.11
Sapphire具有10μm的高分辨率,并具有25 cm x 25 cm的扫描面积,可以扫描印迹,也可扫描组织和小型模式生物(如小鼠,大鼠,小型植物和斑马鱼),快速采集并定量。应用1:追踪蛋白在组织中的移动情况-小鼠后足中淋巴抗原追踪Sapphire不仅可用于凝胶和印迹,还可用于小动物成像。 您可以使用荧光,化学发光和磷屏方法对整个小动物进行成像。 在这里,我们展示将荧光标记的抗原皮下注射到小鼠后爪中,对动物实施安乐死,并测量从引流的腘窝和坐骨神经淋巴结发出的荧光。应用2:成像非洲爪蟾卵母细胞并追踪蛋白定位Sapphire 10μm分辨率有助于对非洲爪蟾卵母细胞和胚胎等样品进行成像。 在这里,我们展示直接将卵母细胞玻片放在扫描仪上。使用荧光标记的蛋白样品,研究人员可以轻松地观察到卵母细胞特定区域的定位。应用3:获取有关组织结构信息-使用CLARITY对小鼠全脑的高清成像随着CLARITY的发展,大大增强了对大脑形态和神经连通性的研究,CLARITY是一种使大脑组织对荧光和其他成像方式透明的方法。分辨率可达10μm的Sapphire可用于小型动物大脑清晰成像。什么是CLARITY技术?开发CLARITY技术是为了帮助神经科学家更好地对整个大脑成像,它是一种光学的方法清除大脑组织,同时在较大的大脑结构中保留蛋白质和DNA等生物学重要分子的方法。 以类似于化石的方式,脂质双层被更坚固而又多孔且透明的水凝胶网代替。可以对位于大脑深处的标记大分子成像。 借助Sapphire灵活强大的聚焦能力,您可以从小型动物中获得清晰制备的大脑的宽视野成像。应用4:追踪病毒感染并量化病毒载量FITC标记的病毒被用来感染斑马鱼,然后将斑马鱼直接放在Sapphire上成像。应用5:可视化解剖结构Sapphire的扫描面积25X25cm,可以容纳许多最常见的小型模式动物。这里展示可视化标记的大鼠肠。Sapphire 双模式多光谱激光成像系统可完成NIR和RGB荧光,化学发光和磷屏成像等多种检测。无论您的实验室进行哪种成像,例如普通的Western Blot、Southern印迹、2D和2D DIGE、可视化组织或小型模式动物成像都可高质量实现。
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2020.02.10
疫情当前,北京深蓝云生物科技有限公司作为生命科学仪器和应用解决方案知名供应商,公司在第一时间做出紧急响应:1月23日起公司全体人员在线值班,为中国国家疾控中心、各省级疾控中心、和全体战斗在疫情最前端的Stilla Naica自动化数字PCR系统用户提供7X24小时的技术支持和服务;为全国范围内的Azure IRIS荧光定量PCR系统开发核酸检测试剂盒合作伙伴提供7X24小时的技术支持;优先保证疫情检测重点单位的高灵敏度一步法RNA qPCR方法扩增试剂和核酸检测耗材紧急供应;1月23日深蓝云公司技术部根据国家CDC和WHO的核酸检测要求和实验室安全需求,正式发布2019-nCoV新型冠状病毒核酸全封闭式荧光定量PCR、全封闭超敏数字PCR检测的解决方案,同时包含了保证RNA质量的5分钟消除RNase净化仪Keypro-KP100,为病毒检测开发方法的科研工作者提供安全的、高灵敏度的检测工具。全封闭Naica 数字PCR 2019-nCoV新型冠状病毒超敏核酸检测方案,区段分别为:RdRP基因(特异性靶点),E蛋白基因,N蛋白基因,保守基因S区位点。确保对2019新型冠状病毒鉴定的高度特异性和灵敏度,并与人冠状病毒HcoV-229E、 HcoV-HKU1、 HcoV-OC43、 HcoV-NL63等型无交叉。年假期间深蓝云公司全体员工保持随时支持和高度警惕的工作状态,与战斗在一线的核酸检测用户和检测方法开发用户共同抗击病毒。同时为共抗2019-nCoV新型冠状病毒,深蓝云生物科技愿为进行新型冠状病毒核酸检测的您提供5套免费试用的可连续工作超过1000小时的、三荧光通道检测——Azure IRIS 实时荧光定量PCR系统,并提供无偿的技术支持和售后支持,直至战胜疫情。2月3日深蓝云生物科技为中部一线紧急发送全封闭Naica 自动化数字PCR核酸超敏检测系统 2月4日 深蓝云生物科技为东北一线紧急发送全封闭Naica 自动化数字PCR核酸超敏检测系统深蓝云生物科技全体人员与广大一线科研人员共同抗击2019新型冠状病毒,及时有效提供分子检测解决方案,同时提供7×24小时技术支持!深蓝云生物科技公司作为法国Stilla Technologies公司数字PCR技术和美国Azure Biosystems示范与服务中心,在北京亦庄经济技术开发区建有研发中心、苏州医疗器械产业园建有GMP车间,并在上海、广州分别建有技术示范中心为生命科学研究人员提供创新型研究工具和整体的应用解决方案。最终解释权归深蓝云生物科技所有。投稿:深蓝云生物科技PCR仪专场“抗击新冠疫情 仪器人在行动”特别专题
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2020.02.06
2020年1月,美国癌症协会(ACS)在CA杂志发布2020年度美国癌症统计数据(最新发病率统计截至2016年,死亡数据截至2017年)。报告显示,美国癌症死亡率从1991年到2017年的26年间持续下降29%,意味着从1991年至今避免了290万例癌症死亡。其中,2016年到2017年下降了2.2%,成为历史最大年度降幅。美国癌症死亡率连年下降的主要原因除了科技较发达,靶向药研发领先等方面,还有一点很重要的是较强的癌症预防和早筛意识。虽然我国近几年也在提倡癌症早筛,但是和欧美等发达国家相比仍有较大差距。在我国癌症筛查结果中,80%的癌症查出来时已经是中晚期了,只有20%是早期,而这20%的癌症早期还是体检查出来的。一般情况下,常规体检得来的报告结果,其灵敏度和准确度都相对较低。目前应用最广泛最精确的的癌症筛查手段便是液体活检了,而液体活检这一监测手段主要用数字PCR的方法来实现。因其出色的灵敏度和精确度,数字PCR在检测微量核酸样本,稀有突变,拷贝数变异,复杂样品检测等方面均有广泛的应用前景。法国Stilla Technologies公司的Naica数字PCR技术在进行液体活检检测时具有独特的优势。系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片作为数字PCR过程的唯一耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。并且还是首款3色荧光检测仪器,整个流程只需要两个半小时。目前,越来越多的科研平台利用Naica系统进行癌症研究。如中山大学附属孙逸仙医院-广东省恶性肿瘤表观遗传学和基因调控重点实验室在著名杂志Molecular Cancer上发表的一项研究指出,circGSK3β对于食管鳞状细胞癌(ESCC)转移有重要的促进作用,用数字PCR技术检测血浆中circGSK3β水平,发现circGSK3β有可能是一种新的ESCC诊断和预后指标检测的生物标志物。◐ 详情请点击下面的链接查看:https://mp.weixin.qq.com/s/teLFFvPYZFwXahs0uo8PMw法国著名大学-巴黎萨克雷大学血液学系以及转化研究实验室等联合在德国Annals of Hematology上发表了一篇研究成果,研究揭示了急性髓白血病的自发性完全缓解(SCR)与IDH2 R140Q有关,并且IDH突变的评估可以通过数字PCR量化并与总生存期相关联。◐ 详情请点击下面的链接查看:https://mp.weixin.qq.com/s/xROwMQ1ayz6jDUE4PTjUwQ我们知道,肺癌一直是人类健康的头号杀手,其中非小细胞肺癌患者占肺癌患者的比例可达80%。法国巴黎癌症中心Gustave Roussy,也是欧洲最大的癌症研究中心的科学家Cécile Jovelet等在Plos one杂志发表的文章中,同时使用两种不同的方法-Naica Crystal数字PCR方法和大规模并行测序( MPS)对61例晚期非小细胞肺癌患者的游离DNA (cfDNA)进行检测,结果显示两种方法的相关性为78 %,其中有7例含EGFR突变活化位点的样本和4例含EGFR耐药突变位点的样本用数字PCR方法检测出来了,而MPS平台未检出。◐ 详情请点击下面的链接查看:https://mp.weixin.qq.com/s/o3tj1pB9ssrQqDWgzcJDBQ综上,我们可以看出数字PCR技术是目前非常重要的分子诊断技术,也是未来临床分子诊断的关键平台。科学界对于数据准确性和结果的可靠性要求越来越高,因此选择一款可靠的数字PCR产品对于科研来说十分重要,Naica全自动微滴芯片式数字PCR系统结合了强大的检测功能和直观可视的图像分析技术,从而达到了数字PCR定量卓越的置信水平,获得的数据真实可信。尤其是在目前的癌症大环境下,能够快速检测并确诊患者病情是治疗癌症的关键一步。CA报告指出,估计2020年,美国将有180万例癌症新发病例和60万例癌症死亡病例,预计每天有4950名新发癌症病人,有1600人死于肿瘤。2020年美国按性别分类估计的癌症新发病例和十种主要癌症死亡病例因此,人类在攻破癌症上仍然任重道远,但在科技水平高速发展的今天,癌症早筛已经是很成熟的技术了,所以为了自身的健康,小编呼吁大家要一定要定期体检,一些癌症发现的早是可以治疗的。【部分资料来源于网络整理,侵删】文献来源:https://doi.org/10.3322/caac.21590
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2020.02.05
2月27日北京时间24:00(巴黎时间:17:00),来自LGC国家计量实验室的Dr. Alexandra Whale将于Genomeweb平台在线分享“dPCR在量化常用于诊断和选择靶向治疗的基因CNVs方面的应用。”本次网络研讨会将重点讨论dPCR在量化常用于诊断和选择靶向治疗的基因CNVs方面的应用。利用乳腺癌中的HER2基因的模型,研究dPCR测量基因拷贝数的微小变化的能力,并进一步研究以开发方法来抵消可能由样品中连锁的目标拷贝数引起的测量偏差。此外,还将重点介绍dMIQE指南更新版本中的关键dPCR性能参数,从而促进dPCR实践以及将dPCR作为金标准方法。Alexandra Whale是位于LGC的国家计量实验室(NML)的分子和细胞生物学团队中核酸创新的科学带头人。NML是英国化学和生物分析测量的指定机构。自2009年加入以来,她的研究集中在数字PCR的广泛应用,包括与微生物和抗菌素耐药性相关的DNA的定量和检测,以及癌症中拷贝数变异和罕见序列的检测。内容简介:自2013年数字MIQE指南:数字定量PCR实验发表的最低信息(the Digital MIQE Guidelines: Minimum Information for publication of Quantitative Digital PCR Experiments, dMIQE)发布以来,dPCR的应用范围大幅扩大,如与疾病诊断相关的单核苷酸变异(single nucleotide variance, SNVs)和拷贝数变异(copy number variance, CNVs)的检测。与此同时,国际计量组织,如LGC的国家计量实验室(NML),一直致力于开发SI可追溯的分子方法,以支持将这些应用转化为临床。数字PCR有可能成为一种可追溯的方法,因为靶标的浓度是根据目标阳性分区的比例和泊松统计的应用来计算的。利用乳腺癌中的HER2基因的模型,我们将研究dPCR测量基因拷贝数的微小变化的能力,并进一步研究以开发方法来抵消可能由样品中连锁的目标拷贝数引起的测量偏差。此外,还将重点介绍dMIQE指南更新版本中的关键dPCR性能参数,从而促进dPCR实践以及将dPCR作为金标准方法。注册页面:
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2020.02.05
2019新型冠状病毒,即“2019-nCoV”,因2019年武汉病毒性肺炎病例而被发现,2020年1月12日被世界卫生组织命名。酒精用于包括2019-nCoV,流感,SARS等病毒性呼吸道传染性疾病的预防,主要用法是用来洗手/搓手,因为酒精可以通过破坏其生物包膜而快速杀灭它们。那么我们来看看Keypro生物污染净化仪是如何杀死病毒的?◐ UV-C高效率杀菌:紫外线对细菌、病毒的杀菌作用一般在几秒内完成,几乎是瞬时发生,杀菌消毒能力比氯大600~3000倍。◐ 紫外杀菌广谱性:紫外线技术在目前所有的消毒技术中,杀菌的广谱性是最高的。它对几乎所有细菌、病毒都能高效率杀灭。◐ 紫外线杀菌原理:通过紫外线对细菌、病毒等微生物的照射,破坏微生物机体细胞中的DNA(脱氧核糖核酸)或RNA(核糖核酸)的分子结构,引起DNA链断裂、核酸和蛋白的交联破裂,造成生长性细胞死亡和再生性细胞死亡,达到杀菌消毒的效果 。KeyPro™KP100生物污染紫外净化仪采用SLM™专利技术,具有275nmUV-C深紫外和365nm紫外协同作用,光学元件和热冷却技术集于一身,可最大限度地提高消毒和去污性能。3-5min完成细菌,病毒的去污,无残留,免冲洗,可节省高达90%的化学去污时间和成本。只需将适用的试剂和溶液,在加入样品前进行净化即可。产品特点:▷ 5min完全杀死病毒,细菌等污染物。▷ 触屏操作,简单易用。▷ 快速,通量高。▷ 稳定,一致的效果。▷ 降低实验室耗材成本。▷ 工作流程集成化 。应用:主要用于高保真RNA文库制备,测序和PCR实验室中的微孔板、移液器、水、金属、陶瓷、塑料、玻璃等表面细菌,病毒,真菌和RNase的去除。深蓝云生物科技全体人员与广大一线科研人员共同抗击2019新型冠状病毒,及时有效提供分子检测解决方案,同时提供7×24小时技术支持!
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2020.02.04
Azure CieloTM实时荧光定量PCR系统来自于美国Azure Biosystems公司,融合了高品质PCR温度模块和卓越的荧光检测系统,为您的科学研究就提供高精准、高灵敏可靠结果。直观触摸屏操控软件,主机本身可独立操控,软件可远程监控,让您随时随地监控实验进程和及时获得实验结果。两年质保期,让您对稳定性放心的同时,更专注于您的科学研究。产品特性:● 数据可靠性——连续1000次实验,结果高度一致。● 应用灵活性——提供多种qPCR应用分析。● 流程智能化——触控屏和直观用户界面,操作简单,可多机联用。● 在线便捷性——主机可独立运行qPCR程序,数据可USB、Wi-Fi等网络传输。非凡的性能:● 极佳的重复性——源于优异的孔间均一性96孔重复的扩增曲线图:A)线性图和B)对数图。105拷贝数GAPDH模板,GAPDH引物扩增,96孔重复结果。Cq平均值=19.1,变异系数(Cv)=0.002。● 准确区分2倍浓度差异样品图A:10个浓度样品对数扩增曲线。图B标准曲线。10个梯度,2倍稀释,人内参cDNA(3个重复),使用Azure CieloTM检测人类GAPDH。2倍浓度稀释,R2=0.998,扩增效率E=99.89%。● 长时间连续工作数据稳定连续运行1000个qPCR实验(GAPDH定量)Cq值。在Azure CieloTM上,连续运行1000个qPCR实验(GAPDH定量)并连续计算Cq值得平均值和Cq值的标准偏差。Cq值=22.4±0.01。● 智能化工作流程* 向导式程序设计Azure CieloTM qPCR配备10.2英寸触摸屏,智能化向导式程序设置,快速简便。* 数据分析直观灵活实验设置,模板多样化;软件中英文界面,方便上手,样本设置简捷直观,信息全面;实验设计、孔板设置、程序设置可独立或全部保存模板。* 交互方便,操控灵活• USB连接、WiFi无线连接、互联网远程连接。• 可先运行再进行孔板设置、可边运行边分析。• 数据可导出excel、pdf、word等格式,可定制化报告。* 依据应用选择多种Cielo通道为共抗2019-nCoV新型冠状病毒,深蓝云生物科技愿为进行新型冠状病毒核酸检测的您提供5套免费试用的可连续工作超过1000小时的、三荧光通道检测——Azure CieloTM实时荧光定量PCR系统,并提供无偿的技术支持和售后支持,直至战胜疫情。
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2020.02.04
深蓝云提供5套免费试用的Azure CieloTM Real Time PCR荧光定量系统和无偿技术支持服务为共抗2019-nCoV新型冠状病毒,深蓝云生物科技愿为进行新型冠状病毒核酸检测的您提供5套免费试用的可连续工作超过1000小时的、三荧光通道检测——Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统,并提供无偿的技术支持和售后支持,直至战胜疫情。· 触控屏和直观用户界面,操作简单· 主机本身可独立操控,软件可远程监控, · 连续1000次测试后,结果高度重复· 兼容多种染料和多种孔板· 可远程监控运行状况和分析结果连续运行1000个qPCR实验(GAPDH定量)Cq值在Azure IRIS上,连续运行1000个qPCR实验(GAPDH定量)并连续计算Cq值得平均值和Cq值的标准偏差。Cq值=22.4±0.01。更多参数和信息请点击详情(http://www.cycloudbio.com/product/38054.html)北京深蓝云生物科技有限公司 地 址:北京市北京经济技术开发区经海四路25号院2号楼2单元2层201室 电 话:010-57256059 E-mail:info@cycloudbio.com 网 址:www.cycloudbio.com
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2020.02.04
Cycloud与MicroFuture合作 深蓝云生物科技与北京微未来科技,基于国家疾控中心和WHO推荐区域,针对2019新型冠状病毒的四段保守序列作为检测靶标,开发超敏的数字PCR检测方法和快速的定量PCR检测方法。【图源:北京微未来科技】区段分别为:RdRP基因(特异性靶点),E蛋白基因,N蛋白基因,保守基因S区位点。确保对2019新型冠状病毒鉴定的高度特异性和灵敏度。 与人冠状病毒HcoV-229E、 HcoV-HKU1、 HcoV-OC43、 HcoV-NL63等型无交叉。深蓝云生物科技以专业服务科学为使命,愿所学,以致用,共战病毒! 北京微未来科技有限公司以“解码病原微生物,致力于传染病防控”为企业使命。与北京深蓝云生物科技共同在病毒的超敏检测的数字PCR方法展开深入合作。
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2020.02.01
湖北武汉市新型冠状病毒时间线新型冠状病毒2019-nCoV在系统分类上属冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus),是一类主要引起呼吸道、肠道疾病的病原体,属于RNA病毒。武汉市不明原因肺炎患者下呼吸道分离出的冠状病毒为β属的新型冠状病毒。如何进行新型冠状病毒的实验室检测?根据权威指南建议: · 收集上呼吸道样本、下呼吸道样本和血清样本等; · 通过 RT-PCR 进行 2019-nCoV 核酸检测; · 仅在无法使用 RT-PCR 时才建议使用血清血进行诊断; · 确诊患者也应重复收集呼吸道样本用于核酸检测,以便确认病毒是否清除; · 核酸检测在生物安全第二等级(BSL-2)设施中进行即可。针对本次冠状病毒感染,实验室如何进行全套病原体分子生物学检测?目前,最重要的是如何正确筛选出阳性新型冠状病毒患者。由于本次病毒感染的潜伏期较长,大量潜伏期患者因体内病毒载量过低无法用常规方法检测,从而耽误治疗。针对新型冠状病毒感染造成的严重急性呼吸道感染的临床处置,世界卫生组织于1月17号给出了实时荧光定量PCR法的检测方案。基于PCR方法的核酸定量是目前最快速的病毒检测方法之一。【信息由中国疾控中心病毒病预防控制所提供】深蓝云生物科技全体人员与广大一线科研人员共同抗击2019新型冠状病毒,及时有效提供分子检测解决方案,同时提供7×24小时技术支持!我们可提供Azure Cielo多通道荧光定量PCR系统,Naica自动化数字PCR超敏检测系统,同时可提供全套核酸提取试剂盒以及RT-PCR预混液。Azure Cielo多通道荧光定量PCR系统可实现在线集中数据处理和监控,多机联用,3/6荧光通道,无需ROX校正。Naica自动化数字PCR超敏检测系统可快速检测样本,2.5小时即可完成48个样本检测,数据真实可靠。针对病毒传染,我们一定要从源头进行清除。KeyproTM KP100生物污染快速净化仪,5min内可以去除病毒、细菌等的污染。Echo Revolve/Rebel All-in-one 自动显微镜,可快速完成病原体镜检。病毒防护关键点☆ 勤洗手☆ 注意个人卫生☆ 合理佩戴口罩☆ 避免接触野生动物☆ 身体不适及时就医☆ 避免去人群聚集的场所目前天气寒冷,正是病毒肆虐的最佳时机,大家一定要做好自身防护。相信坚守一线的医务人员,我们一起跨过这场风波!
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2020.02.01
数字PCR检测解决方案北京深蓝云生物科技有限公司针对2019-nCov新型冠状病毒,为您提供过国家权威机构验证的超敏数字PCR绝对定量检测方案,高度特异,且高度灵敏。该方案基于:* Naica 自动化微滴芯片式数字PCR系统。* qScript XLT One-Step RT-qPCR ToughMix:高品质一步法预混液。* 引物和探针序列:参考中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所提供序列,可自行合成,也可以联系深蓝云技术人员进行合成。* KeyproTM KP-100生物污染快速净化仪。通过对一步法反转录-digital PCR结合TaqMan探针方法,只需再扩增试剂中加入RNA模板,即可直接获得病毒RNA拷贝数浓度。针对2019-新型冠状病毒:新型冠状病毒的开放读码框1ab(open reading frame,ORF1ab);核壳蛋白(nucleoprotein,N)基因区域两个区段进行绝对定量检测。 整个检测过程在Naica 自动化微滴芯片式数字PCR系统中全封闭完成,只需加入RNA样本的反应液加入到Sapphire芯片中,上机即可自动化进行扩增过程。· 无需标准品和标准曲线:直接对RNA/DNA绝对定量。· 检测速度快:2.5小时即可完成样本检测。· 有效微滴数量多:~25000个/样本,超敏精准,可多孔合并分析,微滴越多越精准。· 动态范围宽:0.2-20000cp/μL,低浓度低丰度样本直接检测。· 数据可靠:自动质控和可视化微滴溯源。· 自动化操作:一步上样,上手容易,人为误差小。· 唯一耗材,系统零维护,管理方便。KeyproTM KP-100生物污染快速净化仪5min可将所用移液器和耗材等表面的RNase进行失活处理。同时可以3-5min对病原体进行灭活,防止实验用品导致实验结果污染和环境污染。货号和订货信息:另有病毒RNA提取试剂提供:北京深蓝云生物科技有限公司同时还提供美国Azure Biosystems的高品质荧光定量PCR IRIS Real Time PCR系统。
应用实例
2020.02.01
数字PCR技术的诞生和发展为核酸精准定量与基因检测提供了全新的思路,可实现单细胞/单分子层面的绝对定量。目前,该技术已经在肿瘤个体化诊疗、基因编辑、液体活检、病原微生物、标准品定值的检测等前沿生命科学研究、临床医学检验、药物研发等多个领域实现突破性应用和发展。数字PCR通过泊松分布校正得到目标基因的绝对拷贝数,可以提供比qPCR更精准的核酸定量,无需标准品,并具有灵敏度好、精确度高、耐受抑制剂能力强等优点。该技术是目前最适合用于体液样品(如血液、尿液、粪便、痰液、胸腹水、脑脊液等)中痕量核酸标记物检测的方法。为更好地让广大学者了解数字PCR技术,“Gene-π数字PCR技术训练营——核酸绝对定量分析及应用”将于2020年02月29日在上海张江召开。本期训练营由上海市浦东新区生物产业行业协会、转化医学网、艾普拜生物科技(苏州)有限公司、北京深蓝云生物科技有限公司主办。聚焦于数字PCR原理、实验操作、应用进展、结果分析、质量控制、标准品定量等核心内容,训练营将携中外知名学者、资深技术专家,为广大学员带来从理论到实战、从入门到精通的饕餮盛宴。主办单位上海市浦东新区生物产业行业协会转化医学网艾普拜生物科技(苏州)有限公司北京深蓝云生物科技有限公司培训安排时间:2020年02月29日地点:张江·中国药谷生物医药创新交流中心培训日程报名方式如果您心动了就赶紧动动手指报名吧!可以通过扫描下方二维码.我们的初衷是--真诚地把先进的科研技术带给大家!所以,本次培训活动完全免费!!!不收取任何费用! 您提交报名申请,经主办方审核通过后,收到报名成功确认邮件后,就可以参加我们的培训班啦~因场地有限,本次开放50个名额。详情咨询方式:电话:0512-86860010,15801106547邮箱:info@cycloudbio.com注:活动最终解释权归艾普拜生物科技(苏州)有限公司所有
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2020.01.17
国立首尔大学化学系CRI化学蛋白组学Wan Gi Byun团队在《Chembiochem》发表了他们最新的研究成果,基于荧光的紧密结合分析发现了一种蛋白质-RNA相互作用的小分子调节剂。那为什么要研究RNA-蛋白之间的相互作用呢?RNA和蛋白是可以相互作用的生物分子,可以通过物理性相互作用,调节彼此的生命周期和功能。mRNA编码序列指导蛋白质和一些调节序列的合成,而mRNA的非翻译区域通过调控蛋白质的翻译、定位和与其他蛋白质的相互作用,影响编码蛋白的命运。另一方面,从RNA合成到降解的过程中,蛋白质反过来可以结合和调控RNA的表达和功能。RNA与蛋白质的相互作用对于维持细胞稳态是非常重要的,而干扰两者的相互作用会造成细胞功能失调和相关疾病的发生。那如何来检测蛋白-RNA间的相互作用呢?让我们一起来看看Wan Gi Byun团队是怎么做的:蛋白质结合会引起微环境的变化,而这将会显著改变与之结合的核酸偶联的荧光基团的荧光强度。鉴于此,Wan Gi Byun团队构建了一种简单而强大的分析方法来检测let-7 miRNA及其转录后调控蛋白Lin28之间的相互作用。通过荧光EMSA来确定化合物的活性以及IC50,测定荧光结合强度后,经4%丙烯酰胺凝胶电泳后,使用Azure Sapphire对Cy3和TAMRA以及Cy5的荧光信号进行可视化检测。 Figure 3. Hit identification and validation (a) Chemical structure of hit compounds. (b) Dose-response curve obtained by fluorescence intensitybased binding assay. Error bars represent the standard deviation from three independent measurements. (c) Hit validation by EMSA.此外,通过Western Blot来检测下游信号通路蛋白的含量变化。仅需一台Sapphire即可完成EMSA和Western Blot的检测,Sapphire的功能绝不仅限于此……Sapphire是市面上唯一可以进行扫描式和CCD成像化学发光的双模式成像系统,也是唯一使用3种检测器检测信号的成像系统(APD,PMT,CCD),具有更宽的动态范围,灵敏度更高,分辨率可达10-1000微米。Sapphire除了完成Paper中使用的EMSA凝胶阻滞实验外,还能完成哪些实验呢?可以完成DNA/Protein凝胶成像,Western Blot化学发光,多通道荧光检测, in-cell western检测,2D和2D-DIGE以及磷屏成像检测……看到这里,您对Azure Biosystems是不是更加了解了呢?是不是也想试用一下呢?那就赶紧搜索“北京深蓝云生物科技”来联系我们吧!
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2019.11.29