在《J Proteomics》期刊杂志中2020年2月刊发了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章综述,其中指出Western blotting已经有40多年的历史,仍然是现在单一蛋白常用的分析技术,但因为其数据重复性、稳定性和定量的精准性引起科研界的关注,其数据可以通过研究方法的进步,仪器的提升,期刊杂志的对数据新要求的变化,使Western blotting数据的重现性和精准度都有所提高。
那我们看看期刊杂志对提交的Western blotting数据都做了哪些要求:
1. 不建议跑平行胶,因为平行胶和剥离膜,孵育体系,操作条件的不一致,影响定量的准确性,因此最好内参和目的蛋白要在同一张印迹膜上。
2. 选择宽动态范围的方法,确认信号强度与所上样量之间的线性关系,例如用胶片做化学发光方法的动态范围就很窄,不建议使用。
数字成像相比胶片动态范围更宽,定量更准确
3. 强烈推荐使用总蛋白进行归一化,因为看家蛋白容易受处理条件影响而发生变化,影响定量的结果,使用总蛋白定量更真实地反映目标蛋白表达量的变化。
4. 提交原始数据,例如:JBC,PLOS和CELL等杂志都要求要提供原始数据。
对于化学发光为主,经费预算又有限的用户,Azure同样给出一个适合的配置,那就是Azure300Q:
* Azure300Q带有Q模块,可激发AzureRed等染料进行全蛋白定量,最后化学发光条带和总蛋白条带同时在一张膜上成像,满足Nature,JBC等期刊杂志的总蛋白定量要求,帮助用户发表文章。
* 同时Q模块还可以激发例如Cy3,AzureSpectra550,AlexaFluor546,Qdot565,罗丹明等染料,还可以做荧光内参与化学发光条带同时在一张印迹膜上成像,荧光动态范围更宽,相比于传统的化学发光内参定量更准确。
荧光内参和化学发光同时成像
* Azure300Q标配9.1MP的高分辨CCD,动态范围可达4.8OD,保证结果的准确性。
过饱和检测可防止定量误差,相同的印迹膜分别使用胶片成像和Azure成像系统,
Azure成像系统具有过饱和提醒,自动计算曝光时间以避免饱和。
* Azure300Q可进行自动彩色Marker与化学发光条带的整合,符合期刊杂志中不过度裁剪Marker的要求,分子量查看更直观。
彩色Marker与化学发光条带成像
* Azure300Q成像系统提供16bit的tiff原始图,将更真实的数据给到客户,保证结果的真实性和可靠性。
* Azure300Q还可以做考马斯亮蓝染色的蛋白胶、核酸胶、银染胶等成像。
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