新时代下对于Western Blotting发表文章的新要求（三）

在《J Proteomics》期刊杂志中2020年2月刊发了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章综述，其中指出Western blotting已经有40多年的历史，仍然是现在单一蛋白常用的分析技术，但因为其数据重复性、稳定性和定量的精准性引起科研界的关注，其数据可以通过研究方法的进步，仪器的提升，期刊杂志的对数据新要求的变化，使Western blotting数据的重现性和精准度都有所提高。

那我们看看期刊杂志对提交的Western blotting数据都做了哪些要求：

1. 不建议跑平行胶，因为平行胶和剥离膜，孵育体系，操作条件的不一致，影响定量的准确性，因此最好内参和目的蛋白要在同一张印迹膜上。

2. 选择宽动态范围的方法，确认信号强度与所上样量之间的线性关系，例如用胶片做化学发光方法的动态范围就很窄，不建议使用。

数字成像相比胶片动态范围更宽，定量更准确

3. 强烈推荐使用总蛋白进行归一化，因为看家蛋白容易受处理条件影响而发生变化，影响定量的结果，使用总蛋白定量更真实地反映目标蛋白表达量的变化。

4. 提交原始数据，例如：JBC，PLOS和CELL等杂志都要求要提供原始数据。

对于化学发光为主，经费预算又有限的用户，Azure同样给出一个适合的配置，那就是Azure300Q：

* Azure300Q带有Q模块，可激发AzureRed等染料进行全蛋白定量，最后化学发光条带和总蛋白条带同时在一张膜上成像，满足Nature，JBC等期刊杂志的总蛋白定量要求，帮助用户发表文章。

*  同时Q模块还可以激发例如Cy3,AzureSpectra550,AlexaFluor546,Qdot565，罗丹明等染料，还可以做荧光内参与化学发光条带同时在一张印迹膜上成像，荧光动态范围更宽，相比于传统的化学发光内参定量更准确。

荧光内参和化学发光同时成像

*  Azure300Q标配9.1MP的高分辨CCD，动态范围可达4.8OD，保证结果的准确性。

过饱和检测可防止定量误差，相同的印迹膜分别使用胶片成像和Azure成像系统，

Azure成像系统具有过饱和提醒，自动计算曝光时间以避免饱和。

*  Azure300Q可进行自动彩色Marker与化学发光条带的整合，符合期刊杂志中不过度裁剪Marker的要求，分子量查看更直观。

彩色Marker与化学发光条带成像

*  Azure300Q成像系统提供16bit的tiff原始图，将更真实的数据给到客户，保证结果的真实性和可靠性。

*  Azure300Q还可以做考马斯亮蓝染色的蛋白胶、核酸胶、银染胶等成像。