Azure 多功能荧光凝胶成像系统

如何做好近红外Western Blot实验，需要关注这5点

化学发光Western Blot的流程大家再熟悉不过，近红外荧光Western与化学发光步骤基本相似，但是有些小伙伴做不好荧光Western，小编给大家总结了做荧光Western的几点注意事项,赶紧下载下来看看吧！

免疫界的传奇—CAR-T疗法

CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy指的是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，基本原理是利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞。换言之，通过基因改造技术，让患者T细胞表达嵌合抗原受体，使效应T细胞的靶向性，杀伤性和持久性均比常规的免疫细胞高，并可以克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受状态的一种特异性免疫细胞抗肿瘤治疗方法。

定量western blot ：为什么需要验证抗体

验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的，即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白，抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前，经常需要验证抗体的特异性，但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证，因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而，抗体与抗原的亲和性高度依赖于实验条件，因此，验证您的试验方法中的条件适用于抗体与抗原的结合是十分重要的。在《JBC》杂志中关于抗体验证信息如下： ? 定义所有使用的抗体的来源和种类，包括目录/批号。 ? 描述如何产生新抗体，包括表位/抗原的制备和纯化。 ? 描述支持抗体特异性的数据，包括翻译后修饰或新表位。 ? 证明对抗原进行遗传或其他分子修饰后免疫反应性降低。

一文教你如何在Western Blot中选择一抗？

说到免疫印迹最重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体，本文着重给大家介绍一下一抗的选择。 一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型，如鼠抗，兔抗，羊抗等等，那么在使用时我们应该怎么选择呢？ 检测任何一种目的蛋白都有不止一种抗体可供选择，为了在试验过程中尽快找到最适合的抗体，往往需要考虑以下几种因素： 1.确定自己的实验类型。如WB、IHC、ICC、ELASA等。一般的抗体说明书上都会给出该抗体适用于哪一种分析类型。 2. 单克隆or多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但极易出现非特异性条带。 3.确定自己的实验样本的结构信息。不同的抗体是由不同的免疫原（全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体或细胞等）免疫宿主而制备得来，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果检测的样本是蛋白片断或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段结构域的免疫原制备出的抗体。还有一点就是样本的制备过程，有些抗体要求样本经过某些特殊处理，比如将样本还原和变性等，还有一些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。 4.抗体信息的确认。这一点虽然不是技术方面的限制因素，但对于结果还是会有很大影响的。当我们拿到抗体时，一定要仔细确定抗体的名字，别名、亚型等信息，千万不要因为这些小细节导致我们的实验毁于一旦。 当然选择了正确的抗体之后，要想有高质量，满足期刊杂志发表的图片，还需要有高品质的成像仪来保驾护航。美国Azure多功能分子成像系统，全新升级，为您的实验护航。

Western Blot结果出乎意料，有可能是转印海绵垫惹的祸

您上一次何时更换的转印海绵垫？答案可能是“从不”。因为如果转印有效，为什么要更换？只有当海绵变成灰色和块状时，才会想起来更换。 但是具有多年Western Blot经验的Azure技术专家对定期更换转印海绵垫给出了必要性的解释，我们来具体看一看： ★ 为什么更换海绵垫很重要？★ 转印问题的常见根源是三明治结构的松紧度。三明治结构一定要紧！请定期更换转印海绵垫，以确保实验结果的准确性。使用额外的滤纸来填补海绵的磨损，可能会导致传输不一致。 我们都会定期更换海绵垫，因为它们会吸收污染物，随着时间的推移，转印海绵垫也会被污染。使用干净的海绵垫对荧光应用尤为关键，因为这些污染物会产生自发荧光，从而导致高背景。

Western blot除了化学发光检测，还有更优秀的近红外荧光检测方法

在介绍近红外荧光凝胶成像凝胶成像检测方法之前，我们来回顾下化学发光的历史：WB是目前蛋白检测的主要方法之一，1981年由尼尔·伯奈特（Neal Burnette）所著的《分析生物化学》中首次被提出，一直延续至今，仍有很多忠实的粉丝。

让蛋白质磷酸化清晰可见

WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！WB 磷酸化蛋白曝不出条带的时候，会特别沮丧。Azure君在此给大家列出几点小建议，希望能帮助您改善一下实验结果。 1、样本是否表达： 查阅资料或通过预实验确定。 2、对照设置： 阳性和阴性对照。 总蛋白抗体对照，对于特定时间的特定样品，磷酸化和非磷酸化蛋白质的总和代表该特定蛋白质的总量。在相同的 WB 检测中， 磷酸化蛋白质的量增加通常伴随着非磷酸化蛋白质的降低。 3、内参设置： 根据实验选择合适的内参，如Actin、GAPDH 等