【仪电分析】饲料中百里香酚的测定-气相色谱法

【仪电分析】饲料中百里香酚的测定-气相色谱法

百里香酚是一种从百里香和牛至中分离出来的天然酚类物质，主要应用于传统医学、食品和化妆品工业中。近年来，百里香酚作为一种极具潜力的、安全的饲用抗生素替代品而备受关注。百里香酚是一种纯天然的植物提取物，具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种活性，在动物生产中具有很大潜力。但有研究发现，百里香酚对动物皮层和黏膜等组织有刺激作用，浓度过高还会损坏肝脏和肾脏，因此使用时需注意用量。

一、方法原理    

试样中的百里香酚经乙酸乙酯提取后，经无水硫酸钠、N-丙基乙二胺和石墨化炭黑分散固体萃取净化，用配有氢火焰离子化FID检测器的气相色谱仪检测，外标法定量。

二、主要仪器及试剂

a. 气相色谱仪：GC128，配备FID检测器；

b. 微孔滤膜：0.45μm滤膜有机相；

c. 电子天平；

d. 离心机；

e．乙酸乙酯：色谱纯

f. 百里香酚标准贮备液：准确称取百里香酚0.25 g，置于25 ml棕色容量瓶中，用色谱纯乙酸乙酯溶解并定容到刻度，混匀，4℃下保存。该贮备液浓度为10 mg/ml，有效期为三个月。

g. 标准中间溶液：移取标准储备液5ml，置于50m棕色容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容到刻度，混匀， 4℃下保存。该中间液浓度为1 mg/ml，有效期为两周。

h. 标准工作液：准确移取标准中间溶液适量，用色谱纯乙酸乙酯稀释至浓度分别为1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、400μg/ml的标准工作溶液。现用现配。

三、实验方法

3.1 色谱参考条件

色谱柱：HP-5，30m×0.32mm×0.25μm；

进样口温度：250℃；

柱温：起始温度80℃，保持1min，以10℃/min升至200℃，5℃/min升至145℃，35℃/min升至250℃，保持2min；

检测器温度：300℃；

进样方式：分流进样；

分流比：10﹕1；

进样量：1μl。

3.2 试样溶液的制备

称取一定量试样置于50mL离心管中，加入20ml乙酸乙酯，超声波提取90min，温度不超过30℃，其间用手摇动两次，以4000r/min离心1min，待净化。取1ml提取液与存有50mg无水硫酸钠、50mgPSA、50mgGCB的2ml离心管，涡旋混合30s，0.45 μm滤膜过滤。供上机测定

测定：取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入气相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

3.3 结果计算

试样中百里香酚的含量按下式进行计算。

X = 

  式中：

X——试样中百里香酚的含量，单位为毫克每千克(mg／kg)

C——标准曲线上查得百里香酚的浓度为微克每毫升(μg／ml)

V——试样溶解定容体积，单位为毫升（mL）

n——试样稀释倍数

m——试样质量，单位为克(g)。

计算结果保留三位有效数字。

四、实验结果

4.1 标准工作曲线

百里香酚的标准工作曲线如图1 所示：

图1 百里香酚标准工作曲线

4.2 百里香酚标准溶液谱图

浓度为50 μg/mL的百里香酚标准溶液谱图如图2所示：

图2 标准溶液谱图