【仪电分析】菊花中三种有效成分的测定—高效液相色谱法

【仪电分析】菊花中三种有效成分的测定—高效液相色谱法

中药菊花是菊科植物菊Cheysanthemum morifolium Ramat的干燥头状花絮。9~11月花盛开时分批采收，阴干或焙干，或熏、蒸后晒干。菊花味苦、甘，性微寒，有散风清热，平肝明目，清热解毒的功效，用于风热感冒，头痛晕眩，目赤肿痛，眼目昏花，疮痈肿毒。仪电分析参照《中华人民共和国药典》2020版中菊花测定要求，使用带紫外检测器的LC220高效液相色谱仪对菊花中绿原酸、木犀草甘和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸三种有效成分进行测定。

一、方法原理

菊花有效成分为绿原酸、木犀草甘和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸，其在348nm处有较强的紫外吸收。衍生后的样品通过色谱柱后各组分得到分离，用紫外检测器检测，用保留时间定性，峰面积外标法定量。

二、主要仪器和试剂   

a. LC220高效液相色谱仪，带紫外检测器；

b. 万分之一天平；

c. 超声波水浴；

d. 甲醇，色谱纯；

e. 乙腈，色谱纯；

f. 磷酸，色谱纯。

三、实验方法

3.1 对照品溶液的制备

取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含绿原酸35 μg，木犀草苷25 μg，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸80 μg的混合溶液，即得（10℃以下保存）。

3.2 供试品溶液的制备

取本品粉末（过一号筛）约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300 W，频率45 kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.3 高效液相色谱仪参考条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为348 nm。理论板数按3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸峰计算应不低于8000。梯度洗脱程序如下表1（因菊花样品中一有机杂质较多，所以40→70 min为冲洗梯度，以防影响后面样品出峰）：

表1 高效液相色谱梯度洗脱程序

四、实验结果

4.1 对照品高效液相色谱图

图1对照品高效液相色谱图

4.2 供试品高效液相色谱图

图2 供试品高效液相色谱图

4.3 重复性

谱图相叠后重复性很好，目标峰的RSD分别为0.71%、0.69%、0.75%。

图3 供试品重复性测试图谱叠放