ELISA这个方法的原理，大家都很明白，网上的资料很多。可真正用起来的时候，偶然间就会有点犯糊涂，我谈一下自己的理解。1、有些客户会用OVA（卵清卵白）做一些哮喘，过敏性肠炎的模型，然后会检测粘膜特异性的sIgA以及血清内里IgG，IgE等指标。当客户向我咨询购置这几个指标的试剂盒的时候，我很肯定地说这些指标的检测要你自己特制，不会有商品化的试剂盒出售的。当你百度一下时，页面出来大量的商品化的试剂盒，千篇一律的明书时候，我真的是蒙了，我怀疑自己跟不上时代了。我不去评论这些试剂盒的真假，我仍旧建议做这些检测指标的朋友，选择sigma公司V级别的OVA，然后用这个来造模，自己包板摸条件，用OD值来比较抗体含量的变化。2、NO的检测，一般都是采用经典的Greiss法，如今市场上竟然有NO ELISA试剂盒，真是彻夜未眠也搞不明白。另外还有做氧化应激指标MDA的检测，我还是推荐各位用碧云天或者进口的检测试剂盒，而不是ELISA试剂盒。3、ELISA检测方法简单，灵敏度高，我个人认为ELISA最适合检测血清或者培养上清的细胞因子、胰岛素、激素等排泄型的小分子卵白的定量检测；病原体抗原的定性与定量；评估自己制备的血清抗体的效价等。很多客户有个误区，拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测，我还是建议多动脑，该检测活性的检测活性，该做western的做western。 4、对付一些小分子的检测，例如：前线腺素、糖皮质激素的检测，我的理解是要用竞争法ELISA去检测，也要购买采用这个方法的盒试剂盒。ELISA试剂盒一般细胞因子的检测，都是采用常规的夹心法ELISA检测，由于因子分子量比力大，一般10几个KD左右，很容易找到两个或多个抗原表位。而小分子很难找到两个不通的表位，也就决定了包被抗体和检测抗体无法同时结合小分子并固相化。解决方案便是酶标板上包被二抗，每个孔加入一定量的酶标的小分子，然后加样品，再加不带标志的检测抗体，显色底物。样品的目标小分子的含量越高，吸光度越低。

日常膳食中含有3-4份以上乳制品的人，发胖的几率只有不吃乳制品人的六分之一。临床研究也证实，在摄入热量不变的前提下，每天多喝200克左右的奶，便能减肥并缩小腰围。 牛奶易被人体吸收，含有高级脂肪、蛋白质、矿物质、维生素，能美白润肤、消除皱纹。   近期研究又发现牛奶减肥的原理：奶中丰富的钙可有效降解人体脂肪、减少脂肪沉积、维持正常体重。研究人员发现，当人体内钙含量低时，会分泌一种名为“Calcitriol"的激素，它能促进脂肪的生成和贮藏。 而钙可以抑制这种激素的生成，从而减少脂肪生成、加快燃烧脂肪的速度。通过牛奶摄入的钙比通过其他途径摄入的钙作用高出一倍;同时，牛奶含有促进肌肉生长的氨基酸。所以，多食用奶制品，你就可以更多地减掉脂肪而非肌肉。   专家提醒，成人每天要摄入1000到1200毫克钙，身体每次能吸收的钙仅有500毫克左右，所以最好不要一口气食用全天的量，而是分三次。   食品指南建议一天喝三次牛奶，早餐配合谷类食品喝一杯奶，有利于蛋白质和钙的吸收，并调动人体机能;下午吃零食时来份牛奶，促进肠道蠕动清理肠道;晚上200毫升低脂奶静心安神，为全天“纤体工程"画个完美的句号。

完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：    （1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；    （2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；    （3）酶的底物；    （4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；    （5）结合物及标本的稀释液；    （6）洗涤液，在板式ELISA试剂盒中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；    （7）酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒 ，英文名： TGF-β1 ELISA Kit小鼠转化生长因子β(TGFβ1)ELISA试剂盒 ，英文名： TGFβ1 ELISA Kit小鼠转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒 ，英文名： TGF-α ELISA Kit小鼠转化生长因子α(TGFα)ELISA试剂盒 ，英文名： TGFα ELISA Kit小鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA试剂盒 ，英文名： MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA Kit小鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ)ELISA试剂盒 ，英文名： MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA Kit小鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA试剂盒 ，英文名： MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit小鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)ELISA试剂盒 ，英文名： TSGF ELISA Kit小鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TGSF)ELISA试剂盒 ，英文名： TGSF ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子样细胞凋亡弱诱导因子(TWEAK)ELISA试剂盒 ，英文名： TWEAK ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒 ，英文名： TRAIL-R4 ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒 ，英文名： TRAIL-R3 ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒 ，英文名： TRAIL-R1 ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)ELISA试剂盒 ，英文名： TRAF6 ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员11A(TNFRSF11A/RANK)ELISA试剂盒 ，英文名： TNFRSF11A/RANK ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子配体相关分子1(TL1)ELISA试剂盒 ，英文名： TL1 ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒 ，英文名： TNFsR-Ⅱ ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒 ，英文名： TNFsR-Ⅰ ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒 ，英文名： TNF-β ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒 ，英文名： TNF-α ELISA Kit小鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒 ，英文名： TNFα ELISA Kit小鼠肿瘤蛋白p53(TP53)ELISA试剂盒 ，英文名： TP53 ELISA Kit小鼠肿瘤标志物(CA724)ELISA试剂盒 ，英文名： CA724 ELISA Kit小鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒 ，英文名： NGAL ELISA Kit小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA试剂盒 ，英文名： NE ELISA Kit小鼠脂氧素A4(LXA4)ELISA试剂盒 ，英文名： LXA4 ELISA Kit小鼠脂联素(ADP)ELISA试剂盒 ，英文名： ADP ELISA Kit小鼠脂联素(Acrp30)ELISA试剂盒 ，英文名： Acrp30 ELISA Kit小鼠脂肪酸合成酶(FASN)ELISA试剂盒 ，英文名： FASN ELISA Kit

ELISA试剂盒研究人员说：“这项研究展示了一些新分子工具的能力——可以推拉同一回路看看是什么驱动了行为。并增进了我们对于情感记忆作用机制的认识，有望解开这些机制遭到破坏的一些脑回路混乱的秘密。"在这项新研究之前，科学家们就怀疑有一些最终牵连在一起的回路参与其中，但他们被一个看似自相矛盾的观点困住了。在大脑深处情感中枢杏仁基底外侧核（basolateral amygdala）中一些会聚回路的交叉点似乎与恐惧和奖励学习有关，但对于一个大脑区域协调接近和逃避这样两种相反行为的机制仍不清楚。一些信号在路径的这一岔口是如何找到正确道路的呢?为了阐明这一问题，ELISA试剂盒研究人员探究了从交叉点发出的两种怀疑的回路投射是否有可能掌握着一些线索。一个投射到奖赏中心伏隔核（Nucleus accumbens），另一个投射到了恐惧中心——情感中枢的输出站杏仁中央内侧核 ( centromedial amygdala)。每种回路投射都是由不同的交织在一起的神经元细胞群组成。ELISA试剂盒研究人员首先利用荧光珠示踪剂分选出了属于每个回路的神经元。随后他们在小鼠经历了恐惧或奖励学习后检测了投射中神经连接的强度。他们训练动物或是对与电击配对的一种音调产生恐惧，或是将这一音调与糖奖励联系起来。

ELISA试剂盒的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度，建议孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物ELISA试剂盒酶的活性。    试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。    洗板方法：    ① 手工洗板，吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；ELISA试剂盒将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。    ② 自动洗板，如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒 ，英文名： Eotaxin 1/CCL11 ELISA Kit小鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA试剂盒 ，英文名： CyPA ELISA Kit小鼠视黄醇结合蛋白4(RBP-4)ELISA试剂盒 ，英文名： RBP-4 ELISA Kit小鼠视黄醇结合蛋白(RBP)ELISA试剂盒 ，英文名： RBP ELISA Kit小鼠生长抑素(SS)ELISA试剂盒 ，英文名： SS ELISA Kit小鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒 ，英文名： GHRP-Ghrelin ELISA Kit小鼠生长激素释放多肽(GHRP)ELISA试剂盒 ，英文名： GHRP ELISA Kit小鼠生长激素(GH)ELISA试剂盒 ，英文名： GH ELISA Kit小鼠生长分化因子15(GDF15)ELISA试剂盒 ，英文名： GDF15 ELISA Kit小鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒 ，英文名： Kim-1 ELISA Kit小鼠肾素前体(renin precursor)ELISA试剂盒 ，英文名： renin precursor ELISA Kit小鼠肾素(Renin)ELISA试剂盒 ，英文名： Renin ELISA Kit小鼠肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒 ，英文名： ADM ELISA Kit

（a）牛奶前处理方法┅┅取牛奶样本，3000g以上，10℃离心10min，吸除上层脂肪；┅┅取5ml去除脂肪牛奶样本至10ml聚苯乙烯离心管中，加入150ulC液（见配液1）出现沉淀，振荡15s，再加入150ulD液（见配液2），振荡1min充分混合；┅┅3000g以上，15℃离心10min，移取上层液；┅┅用复溶工作液（见配液6）以等体积稀释上层液（1份上层液+1份复溶工作液）；┅┅取50ul用于分析。注：如果离心后仍然浑浊，再重复脱脂过程。   （b）牛奶前处理方法┅┅取牛奶样本,3000g以上,10℃离心10min,吸除上层脂肪；┅┅取5ml去除脂肪牛奶样本至10ml聚苯乙烯离心管中，加入250ulC液（见配液1）和250ulD液（见配液2）充分混合，3000g以上，4～12℃离心10min。（如没有冷冻离心机，请预先将样本冷却到8℃再进行离心）；┅┅移取2.2ml上层液（相当于2ml奶样）至另一个10ml聚苯乙烯离心管中，加入4ml乙酸乙酯上下振荡10min；┅┅3000g以上，室温（20-25℃）离心10min ；┅┅移取2ml乙酸乙酯上层有机相（相当于1ml奶样），至10ml干净的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干；┅┅加入0.5ml复溶工作液（见配液6），涡动2min溶解干燥的残留物；┅┅取50ul用于分析。

使用方法：1、称取本品23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。2、样品的稀释及处理，略。3、根据商检的标准要求或对标本污染情况的估计，选择2—3个稀释度，分别在10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。4、稀释液移入平皿后，应及时将凉至45℃的琼脂培养基（可放置于45℃水浴箱保温）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。5、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。6、观察结果并进行计数。25-250个菌落为合适范围。兔血清保存注意事项：1、需要长期保存的兔血清必须储存于-20℃ - -70℃ 低温冰箱中，4℃冰箱中保存时间切勿超过1月，由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱，必须预留定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。2、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天，然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。猪转铁蛋白受体(TFR)ELISA Kit Pig transferrin receptor,TFR ELISA Kit小鼠链球菌(SK)抗体(IgG)ELISA Kit Mouse streptococcal(SK)antibody(IgG)ELISA kit小鼠酪氨酸羟化酶(TH)ELISA Kit Mouse tyrosine hydroxylase,TH ELISA Kit小鼠跨膜蛋白97(TMEM97/MAC30)ELISA Kit Mouse Transmembrane protein 97,TMEM97/MAC30 ELISA Kit小鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA Kit Mouse soluble tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL ELISA KIT小鼠可溶性血栓调节蛋白(sTM)ELISA Kit Mouse Soluable Thrombomodulin,sTM ELISA Kit小鼠可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)ELISA Kit Mouse sTREM-1 ELISA Kit小鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA Kit Mouse Leptin Soluble Receptor,sLR ELISA Kit小鼠可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)ELISA Kit Mouse soluble Lectin-like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor-1(sLOX-1)ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ELISA Kit Mouse soluble myosin heavy chain 2,sMHC-2 ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)ELISA Kit Mouse soluble myosin heavy chain 1,sMHC-1 ELISA Kit小鼠可溶性补体激活产物SC5b9 ELISA Kit Mouse soluble terminal complement complex SC5b9 ELISA Kit小鼠可溶性Toll样受体9(sTLR9/sCD289)ELISA Kit Mouse Soluble Toll-like Receptor 9,sTLR9/sCD289 ELISA Kit小鼠可溶性Toll样受体4(sTLR4)ELISA Kit Mouse Soluble Toll-like Receptor 4,sTLR4 ELISA Kit小鼠可溶性Toll样受体2(sTLR2)ELISA Kit Mouse Soluble Toll-like Receptor 2,sTLR2 ELISA Kit