BCA蛋白浓度测定试剂盒(500T)

PC0020-500 BCA蛋白浓度测定试剂盒(500T) BCA蛋白浓度测定试剂盒(500T) 国产 500微孔 盒

BCA蛋白浓度测定试剂盒

规格：500微孔(50T)

保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。

产品内容：

包装（500微孔) 保存

BCA试剂 100ml 室温

Cu试剂 3ml 室温

PBS稀释液 30ml 室温

BSA蛋白标准 (5mg/ml BSA) 1ml -20℃

产品简介：

BCA蛋白浓度测定试剂盒(500T)碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明：

一 . 微孔酶标仪法

1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2. 稀释标准品：取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足到20微升。

3. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

二 . 分光光度计法

BCA蛋白浓度测定试剂盒(500T)如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

步骤如下：

1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。

2. 稀释标准品：取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。

3. 取八支（或者更多）5ml离心管，标上号，按下表加入试剂。

离心管号 1 2 3 4 5 6 7（样品管1） 8（样品管2） 9（样品管3）

标准蛋白BSA 0 40ul 80ul 120ul 160ul 200ul 200ul适当稀释的样品1 200ul适当稀释的样品2 ……

PBS 200ul 160ul 120ul 80ul 40ul 0 0 0 0

BCA工作液 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml

4. 37℃放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

注意事项：

1.长期不用时，Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。

2.BCA蛋白浓度测定试剂盒(500T)样品中若含有较多干扰物质时，请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒

3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。