小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原）

小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原）操作前打开紫外灯30-60分钟，这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果，但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置，可以与紫外灯一起打开，小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原）此时不需要抽滤开的过大就可以。（所谓的抽滤装置就是就是那个风机，就是吹风超净工作台，不是过滤培养液的）!

细胞传代培养（消化法）具体操作：

一：传代前准备；

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。

6.取出预热好的培养用液：小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原）取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2. 小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原） 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

三：吹打分散细胞；

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

四：分装稀释细胞；

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

五：继续培养；

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。小鼠胰岛素瘤β细胞（NOD/Lt转基因小鼠，SV40巨T抗原）传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。  

XY1469 肝癌亚力山大细胞,PLC/PRF/5细胞

XY1470 肝癌细胞,SMMC-7721细胞

XY1471 肝癌细胞,RH-35细胞

XY1472 肝癌细胞,QGY-7703细胞

XY1473 肝癌细胞,QGY-7701细胞

XY1474 肝癌细胞,Hepa 1-6细胞

XY1475 肝癌细胞,Hep G2细胞

XY1476 肝癌细胞,Hep 3B2.1-7细胞

XY1477 肝癌细胞,HCCLM3细胞

XY1478 肝癌细胞,CBRH-7919细胞

XY1479 肝癌细胞,BEL-7405细胞

XY1480 肝癌细胞,BEL-7404细胞

XY1481 肝癌细胞,BEL-7402细胞

XY1482 干酪乳杆菌干酪亚种

XY1483 干酷乳杆菌

XY1484 腹水瘤细胞,SAC-IIC3细胞

XY1485 腹水瘤细胞,SAC-IIB2细胞

XY1486 腹水瘤细胞,S-180细胞

XY1487 副溶血性弧菌

XY1488 负鼠肾细胞,OK细胞,

XY1489 负鼠肾细胞,

XY1490 负鼠(opossum)肾细胞

XY1491 腐败希瓦氏菌

XY1492 福氏志贺氏菌

XY1493 浮游球衣菌

XY1494 弗氏柠檬酸杆菌

XY1495 弗氏链霉菌

XY1496 粪肠球菌(高耐)

XY1497 粪肠球菌

XY1498 粪产碱菌

XY1499 粪产碱杆菌

XY1500 粉状毕赤酵母

XY1501 费氏志贺氏菌

XY1502 肺炎链球菌

XY1503 肺炎克雷伯氏菌