ELISA试剂盒选购时不能说的秘密
1. ELISA试剂盒最新检测方法
酶可以结合在一抗上,也可以结合在二抗上,还可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。
此外ELISA的结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。
如今检测ELISA有许多途径,我们可以根据自己的偏好进行选择。
一般ELISA检测的是酶促反应的可溶性产物,抗体上结合有相应的酶(例如通常使用的辣根过氧化物酶HRP),而反应体系中添加有相应的底物(如3,3-二氨基联苯胺DAB)。
这种酶促反应生成具有特征性的颜色,可以通过分光光度计进行检测,碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。
2. 分析抗体最新类型
单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA试剂盒,实际上有时候二者结合效果更好。例如,对于双抗夹心法而言,用多抗进行捕获而单抗进行检测有时更有帮助。
多抗能够确保捕获所有抗原,随后单抗再特异性检测拥有特定抗原表位的抗原。
3. 交叉产生的反应
如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。
尽管现在购买源自指定动物的抗体越来越容易,我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。ELISA试剂盒在用双抗夹心法进行ELISA检测时,检测用的二抗必须特异性针对检测一抗,而不能与捕获抗体起反应。
如果检测用二抗与捕获抗体结合,实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗,来避免上述问题。
4、试剂盒的实验类型
ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot,先在带膜的微孔板中培养细胞,然后在膜上检测细胞分泌的抗原形成斑点。此外,我们还需要根据自身需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA实验。
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