ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在操作过程中总是会出现或大或小的问题,比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。下面就由我抛砖引玉地来说一下,做的经验总结:
1、有的包被原可能不是蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被,我把方法扼要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被小鼠CD3分子(CD3)ELISA 试剂盒载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法平均、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保留抗原很重要,我做重组蛋白时,师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。③脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质天然干固在固相表面。
2、应留意以下原理:因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间小鼠CD3分子(CD3)ELISA 试剂盒的作用,这种物理吸附长短特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。包被液的选择,一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
3、但终极选用什么,要依据试验详细来实践。常用封锁剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲,从而排斥ELISA试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封锁:继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
4、 在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有前提的用洗板机除外),洗的不彻底或串了孔,对如斯敏捷的ELISA系统可是不小的影响。由于聚苯小鼠CD3分子(CD3)ELISA 试剂盒乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板:可以说在ELISA操纵中,洗涤是最主要的枢纽技术。
5、加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释,也可用封闭液去稀释。如需加二抗,还要注意二抗的工作浓度,太高浪费,太低则着色浅。
6、显色:显色系统又很多,我们一开始做的时候,要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠。
7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好,小鼠CD3分子(CD3)ELISA 试剂盒如出现问题也好分析。
大鼠γ氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒 Rat Gamma-aminobutyric acid,GABA ELISA试剂盒
大鼠5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒 Rat 5-Hydroxytryptamine,5HT ELISA试剂盒
大鼠P物质受体(SP-R)ELISA试剂盒 Rat substance P receptor,SP-R ELISA试剂盒
大鼠P物质(SP)ELISA试剂盒 Rat Substance P,SP ELISA试剂盒
大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA试剂盒 Rat alpha-L-fucosidase,AFU ELISA试剂盒
大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO)ELISA试剂盒 Rat Thyroid-Peroxidase,TPO ELISA试剂盒
大鼠胰岛素原(PI)ELISA试剂盒 Rat Proinsulin,PI ELISA试剂盒
大鼠抗IgE受体抗体ELISA试剂盒 Rat anti-IgE receptor antibody ELISA试剂盒
大鼠抗IVIgG抗体ELISA试剂盒 Rat anti-IVIgG antibody ELISA试剂盒
大鼠P53(P53)ELISA试剂盒 Rat p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA试剂盒
大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒 Rat Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA试剂盒
大鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA试剂盒 Rat nitric oxide synthase,NOS ELISA试剂盒
大鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 Rat inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISA试剂盒
大鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA试剂盒 Rat Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA试剂盒
大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒 Rat lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA试剂盒
大鼠热休克蛋白90(HSP-90)ELISA试剂盒 Rat heat shock protein 90,hSP-90 ELISA试剂盒
大鼠热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒 Rat heat shock protein 70,hSP-70 ELISA试剂盒
大鼠热休克蛋白40(HSP-40)ELISA试剂盒 Rat heat shock protein 40,hSP-40 ELISA试剂盒
大鼠热休克蛋白20(HSP-20)ELISA试剂盒 Rat heat shock protein 20,hSP-20 ELISA试剂盒
大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA试剂盒 Rat amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA试剂盒
大鼠细胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA试剂盒 Rat Cyclin-D3 ELISA试剂盒
大鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA试剂盒 Rat Cyclin-D2 ELISA试剂盒
大鼠细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA试剂盒 Rat Cyclin-D1 ELISA试剂盒
大鼠髓磷脂碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒 Rat myelin basic protein,MBP ELISA试剂盒
大鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒 Rat Alpha-fetoprotein,AFP ELISA试剂盒
大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA试剂盒 Rat Prostatic Acid Phosphatase,PAP ELISA试剂盒
大鼠游离前列腺特异性抗原(fPSA)ELISA试剂盒 Rat Free Prostate Specific Antigen,fPSA ELISA试剂盒
大鼠前列腺特异性抗原(PSA)ELISA试剂盒 Rat prostate specific antigen,PSA ELISA试剂盒
大鼠卵巢癌标志物CA125ELISA试剂盒 Rat ovarian cancer marker-CA125 ELISA试剂盒
大鼠乳腺癌标志物-CA153ELISA试剂盒 Rat mammary carcinoma Marker-CA153 ELISA试剂盒
大鼠胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒 Rat Gastrointestinalcancer Marker-CA199 ELISA试剂盒
大鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒 Rat heme oxygenase 1,HO-1 ELISA试剂盒
大鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA试剂盒 Rat Phospholipidase A2,PL-A2 ELISA试剂盒
大鼠组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA试剂盒 Rat Tissue factor pathway inhibitor,TFPI ELISA试剂盒
大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA试剂盒 Rat Aquaporin 5,AQP-5 ELISA试剂盒
大鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA试剂盒 Rat Aquaporin 4,AQP-4 ELISA试剂盒
大鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA试剂盒 Rat Aquaporin 3,AQP-3 ELISA试剂盒
大鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA试剂盒 Rat Aquaporin 1,AQP-1 ELISA试剂盒
大鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA试剂盒 Rat Aquaporin 0,AQP-0 ELISA试剂盒
大鼠水通道蛋白2(AQP-2) ELISA试剂盒 Rat Aquaporin 2,AQP-2 ELISA试剂盒
大鼠甲状腺球蛋白(TG)ELISA试剂盒 Rat Thyroglobulin,TG ELISA试剂盒
大鼠抑制素A(INH-A)ELISA试剂盒 Rat Inhibin,INH-A ELISA试剂盒
大鼠绒毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA试剂盒 Rat Chorionic Gonadotrophin β,β-CG ELISA试剂盒
大鼠性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒 Rat sex hormone-binding globulin,SHBG ELISA试剂盒
大鼠脱氢表雄酮S7(DHEA-S7)ELISA试剂盒 Rat Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7 ELISA试剂盒
大鼠脱氢表雄酮(DHEA)ELISA试剂盒 Rat Dehydroepiandrosterone,DHEA ELISA试剂盒
大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒 Rat High mobility group protein B1,HMGB-1 ELISA试剂盒
大鼠妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)ELISA试剂盒 Rat pregnancy associated plasma protein A,PAPP-A ELISA试剂盒
大鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒 Rat Endothelial lipase,EL ELISA试剂盒
大鼠碳酸酐酶(CA)ELISA试剂盒 Rat carbonic anhydrase,CA ELISA试剂盒
大鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒 Rat calcitonin gene related peptide,CGRP ELISA试剂盒
大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒 Rat Motilin,MTL ELISA试剂盒
大鼠β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒 Rat Beta-Endorphin,β-EP ELISA试剂盒
大鼠生长抑素(SS)ELISA试剂盒 Rat Somatostatin,SS ELISA试剂盒
大鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒 Rat Fibrinogen,Fbg ELISA试剂盒
大鼠横纹肌辅肌动蛋白α (sm Actinin-α )ELISA试剂盒 Rat skeletal muscle Actinin-α,sm Actinin-α ELISA试剂盒
大鼠肌球蛋白(MYS)ELISA试剂盒 Rat Myosin,MYS ELISA试剂盒
大鼠结蛋白(Des)ELISA试剂盒 Rat Desmin,Des ELISA试剂盒
大鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)ELISA试剂盒 Rat major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ ELISA试剂盒
大鼠GATA结合蛋白4(GATA4)ELISA试剂盒 Rat GATA binding protein 4,GATA4 ELISA试剂盒
大鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒 Rat interferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA试剂盒
大鼠上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA试剂盒 Rat Epithelial neutrophil activating peptide 78,ENA-78 ELISA试剂盒
大鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)ELISA试剂盒 Rat Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA试剂盒
大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒 Rat neuropeptide Y,NP-Y ELISA试剂盒
大鼠生长激素释放多肽(GHRP)ELISA试剂盒 Rat Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA试剂盒
大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)ELISA试剂盒 Rat Gelsolin ELISA试剂盒
大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒 Rat receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL ELISA试剂盒
大鼠血栓前体蛋白(TpP)ELISA试剂盒 Rat thrombus precursor protein,TpP ELISA试剂盒
大鼠抑制素B(INH-B)ELISA试剂盒 Rat inhibin B,INH-B ELISA试剂盒
大鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒 Rat Insulin Receptor β,ISR-β ELISA试剂盒
大鼠糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)ELISA试剂盒 Rat Glycated hemoglobin A1c,GHbA1c ELISA试剂盒
大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒 Rat lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA试剂盒
大鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA试剂盒 Rat soluble platelet endothelial cell adhesion molecule 1,sPECAM-1 ELISA试剂盒
大鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ)ELISA试剂盒 Rat major histocompatibility complexⅢ,MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ ELISA试剂盒
hz-E10870人乙醛脱氢酶(ALDH)ELISA试剂盒Human aldehyde dehydrogenase,ALDH ELISAkit
hz-E10871人Rho家族GTP酶1(RND1)ELISA试剂盒human Rho family GTPase 1,RND1 ELISAkit
hz-E10872人受体TNFRSF结合丝氨酸苏氨酸激酶2(RIPK2)ELISA试剂盒human receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2,RIPK2 ELISAkit
hz-E10873人磷脂爬行酶1(PLSCR1)ELISA试剂盒human phospholipid scramblase 1,PLSCR1 ELISAkit
hz-E10874人3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶1(HMGCS1)ELISA试剂盒human 3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A synthase 1,HMGCS1 ELISAkit
hz-E10875人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员12(EAR12)ELISA试剂盒human eosinophil-associated ribonuclease A family member 12,EAR12 ELISAkit
hz-E10876人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员3(EAR3)ELISA试剂盒human eosinophil-associated ribonuclease A family member 3,EAR3 ELISAkit
hz-E10877人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员2(EAR2)ELISA试剂盒human eosinophil-associated ribonuclease A family member 2 ELISAkit
hz-E10878人二氢嘧啶酶样3(DPYSL3)ELISA试剂盒human dihydropyrimidinase-like 3,DPYSL3 ELISAkit
hz-E10879人色氨酰tRNA合成酶(WARS)ELISA试剂盒human tryptophanyl-tRNA synthetase,WARS ELISAkit
hz-E10880人己糖激酶3(HK3)ELISA试剂盒human hexokinase 3,HK3 ELISAkit
hz-E10881人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒human phosphofructokinase-platelet,PFKP ELISAkit
hz-E10882人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA试剂盒human UDP-glucose ceramide glucosyltransferase ELISAkit
hz-E10883人凋亡相关半胱氨酸肽酶4(Casp4)ELISA试剂盒human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase,Casp4 ELISAkit
hz-E10884人吡哆醛/吡哆醇维生素B6激酶(PDXK)ELISA试剂盒human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase,Casp4 ELISAkit
hz-E10885人二氢嘧啶酶样2(DPYSL2)ELISA试剂盒human dihydropyrimidinase-like 2,DPYSL2 ELISAkit
hz-E10886人血清/糖皮质激素调节激酶2(GSK2)ELISA试剂盒human serum/glucocorticoid regulated kinase 2,GSK2 ISA KIT
hz-E10887人丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)ELISA试剂盒human mitogen activated protein kinase kinase 6,MKK6 ELISAkit
hz-E10888人吡哆醛/吡哆醇维生素B6磷酸酶(PDXP)ELISA试剂盒human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-phosphatase,PDXP ELISAkit
hz-E10889人T细胞特异性鸟苷三磷酸酶(Tgtp)ELISA试剂盒Human T-cell specific GTPase,Tgtp ELISAkit
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