ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在操作过程中总是会出现或大或小的问题,比如说花板、假阳性、全显色、信号值比空白还低等等。下面就由我抛砖引玉地来说一下,做的经验总结:
1、有的包被原可能不是蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被,我把方法扼要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA 试剂盒素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法平均、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保留抗原很重要,我做重组蛋白时,师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。③脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱过夜或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质天然干固在固相表面。
2、应留意以下原理:因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附长短特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA 试剂盒基团,故更易吸附到固相载体表面。包被液的选择,一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。详细的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下终极可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
3、但终极选用什么,要依据试验详细来实践。常用封锁剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲,从而排斥ELISA试剂盒后的步骤中干扰物质的再吸附。封锁:继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。
4、 在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有前提的用洗板机除外),洗的不彻底或串了孔,对如斯敏捷的ELISA系统可是不小的影响。由于聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA 试剂盒性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。洗涤板:可以说在ELISA操纵中,洗涤是最主要的枢纽技术。
5、加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释,也可用封闭液去稀释。如需加二抗,还要注意二抗的工作浓度,太高浪费,太低则着色浅。
6、显色:显色系统又很多,我们一开始做的时候,要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠。
7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好,小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA 试剂盒如出现问题也好分析。
大鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒 Rat anti-cardiolipin antibody IgG,ACA-IgG ELISA试剂盒
大鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒 rat anti-cardiolipin antibody IgM,ACA-IgM ELISA试剂盒
大鼠抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISA试剂盒 Rat anti-cardiolipin antibody IgA,ACA-IgA ELISA试剂盒
大鼠apelin 12(AP12)ELISA试剂盒 Rat apelin 12,AP12 ELISA试剂盒
大鼠α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒 Rat Interferon α,IFN-α ELISA试剂盒
大鼠的牛血清白蛋白残留检测ELISA试剂盒 Rat rudimental bovine serum albumin check-up ELISA试剂盒
大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA试剂盒 Rat coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA试剂盒
大鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒 Rat endotoxin,ET ELISA试剂盒
大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)ELISA试剂盒 Rat Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISA试剂盒
大鼠环孢素A(CsA)ELISA试剂盒 Rat Cyclosporine A,CsA ELISA试剂盒
大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒 Rat high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA试剂盒
大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA试剂盒 Rat β2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M,β2-GP1 IgA/G/M ELISA试剂盒
大鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)ELISA试剂盒 Rat Endometrium Antibody,EMAb ELISA试剂盒
大鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)ELISA试剂盒 Rat LDL-IC ELISA试剂盒
大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒 Rat 15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA试剂盒
大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒 Rat Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ ELISA试剂盒
大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒 Rat Serum amyloid A,SAA ELISA试剂盒
大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒 Rat Haptoglobin,Hpt/HP ELISA试剂盒
大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒 Rat α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA试剂盒
大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒 Rat Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISA试剂盒
大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA试剂盒 Rat cholest erolester transfer protein,CETP ELISA试剂盒
大鼠血管紧张素原(aGT)ELISA试剂盒 Rat cholest erolester transfer protein,CETP ELISA试剂盒
大鼠热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒 Rat heat shock protein 60,hSP-60 ELISA试剂盒
大鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒 Rat malondialchehyche,MDA ELISA试剂盒
大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒 Rat Super Oxidase Dimutase,SOD ELISA试剂盒
大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA试剂盒 Rat Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISA试剂盒
大鼠血清总补体(CH50)ELISA试剂盒 Rat 50% complement hemolysis,CH50 ELISA试剂盒
大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒 Rat soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA试剂盒
大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒 Rat hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA试剂盒
大鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒 Rat Amylin ELISA试剂盒
大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒 Rat Leukotriene C4,LT-C4 ELISA试剂盒
大鼠细胞色素C(Cyt-C)ELISA试剂盒 Rat Cytochrome-C,Cyt-C ELISA试剂盒
大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA试剂盒 Rat angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISA试剂盒
大鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)ELISA试剂盒 Rat melanocyte antibody,MC Ab ELISA试剂盒
大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒 Rat dipeptidyl peptldase Ⅳ,DPPⅣ ELISA试剂盒
大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)ELISA试剂盒 Rat Complement fragment 4a,C4a ELISA试剂盒
大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)ELISA试剂盒 t Complement fragment 4a,C4a ELISA试剂盒
大鼠补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒 Rat Complement fragment 5a,C5a ELISA试剂盒
大鼠补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒 Rat Complement fragment 3a,C3a ELISA试剂盒
大鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒 Rat Follistatin,FS ELISA试剂盒
大鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒 Rat Histone Deacetylase,HD ELISA试剂盒
大鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒 Rat E-Selectin ELISA试剂盒
大鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒 Rat Methylase ELISA试剂盒
大鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒 Rat proliferating cell nuclear antigen antibody,PCNA ELISA试剂盒
大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒 Rat lipoprotein lipase,LPL ELISA试剂盒
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒 Rat tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP-5b ELISA试剂盒
大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒 Rat Glucose-dependent insulin-releasing polypeptide,GIP ELISA试剂盒
大鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA试剂盒 Rat Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA试剂盒
大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA试剂盒 Rat Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA试剂盒
大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA试剂盒 Rat Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA试剂盒
大鼠甲状腺素抗体(TAb)ELISA试剂盒 Rat Thyroxine antibody,TAb ELISA试剂盒
大鼠抗促甲状腺素受体抗体(TRAb)ELISA试剂盒 Rat thyroid stimulating hormone receptor antidoby,TRAb ELISA试剂盒
大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒 Rat catecholamine,CA ELISA试剂盒
大鼠白介素27(IL-27)ELISA试剂盒 Rat Interleukin 27,IL-27 ELISA试剂盒
大鼠白介素23(IL-23)ELISA试剂盒 Rat Interleukin 23,IL-23 ELISA试剂盒
大鼠心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒 Rat cardiotrophln 1,CT-1 ELISA试剂盒
大鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)ELISA试剂盒 Rat anti-alpha-Fodrin IgG/IgA,α-Fodrin IgG/IgA ELISA试剂盒
大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒 Rat lipoprotein α,Lp-α ELISA试剂盒
大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA试剂盒 Rat coagulation factor Ⅷ related antigen,FⅧ-Ag ELISA试剂盒
大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒 Rat Fcoagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISA试剂盒Rat Fcoagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISA试剂盒
大鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA试剂盒 Rat coagulation factor Ⅹ,FⅩ ELISA试剂盒
大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA试剂盒 Rat von Willebrand Factor,vWF ELISA试剂盒
大鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒 Rat plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA试剂盒
大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒 Rat thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA试剂盒
大鼠抗凝血酶受体(ATR)ELISA试剂盒 Rat anti-thrombin receptor,ATR ELISA试剂盒
大鼠凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒 Rat thrombin receptor,TR ELISA试剂盒
大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒 Rat cardiac troponin Ⅰ,cTn-Ⅰ ELISA试剂盒
大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒 Rat Phosphotylinosital 3 kinase,PI3K ELISA试剂盒
大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒 Rat protein kinase B,PKB ELISA试剂盒
大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒 Rat secretory immunoglobulin A,sIgA ELISA试剂盒
大鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA试剂盒 Rat heme oxygenase 2,HO-2 ELISA试剂盒
大鼠骨胶原交联(Cr)ELISA试剂盒 Rat Crosslaps,Cr ELISA试剂盒
大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒 Rat cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen,CⅠCP ELISA试剂盒
大鼠脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒 Rat deoxypyridinoline,DPD ELISA试剂盒
大鼠吡啶交联物(PY)ELISA试剂盒 Rat pyridinium crosslink/PyriLinks,PY ELISA试剂盒
大鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒 Rat Osteopontin,OPN ELISA试剂盒
大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA试剂盒 Rat Bone-specific Alkphase B,ALP-B ELISA试剂盒
大鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISA试剂盒 Rat transferrin receptor,TFR ELISA试剂盒
大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒 Rat Cystatin C,Cys-C ELISA试剂盒
大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒 Rat Factor Ⅷ-related Antigen,FⅧAg ELISA试剂盒
大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒 Rat Pyruvate Kinase,M2-PK ELISA试剂盒
大鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA试剂盒 Rat acetylcholine receptor antibody,AChRab ELISA试剂盒
hz-E10957人非神经元性烯醇化酶(NNE)ELISA试剂盒Human non-neuronal enolase,NNE ELISAkit
hz-E10958人多巴胺-β羟化酶(DBH)ELISA试剂盒Human dopamine-β-hydroxylase,DBH ELISAkit
hz-E10959人胆碱乙酰化酶(CHAc)ELISA试剂盒Human choline acetylase,CHAc ELISAkit
hz-E10960人异柠檬酸脱氢酶(ICD)ELISA试剂盒Human isocitrate dehydrogenase,ICD ELISAkit
hz-E10961人胰蛋白酶原Ⅱ(Try-Ⅱ)ELISA试剂盒Human Trypsinogen-2,Try-ⅡELISAkit
hz-E10962人腺苷脱氨酶(ADA)ELISA试剂盒Human adenosine deaminase,ADA ELISAkit
hz-E10963人透明质酸酶(HAase)ELISA试剂盒Human Hyaluronidase,HAase ELISAkit
hz-E10964人天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒Human Aspartate aminotransferase,AST ELISAkit
hz-E10965人酸性磷酸酶(ACP)ELISA试剂盒Human Acid Phosphatase,ACP ELISAkit
hz-E10966人葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)ELISA试剂盒Human glucose-6-phosphate isomerase,GPI ELISAkit
hz-E10967人磷酸葡萄糖变位酶(PGM)ELISA试剂盒Human Phosphoglucomutase,PGM ELISAkit
hz-E10968人亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA试剂盒Human Leucine aminopepridase,LAP ELISAkit
hz-E10969人链激酶(SK)ELISA试剂盒Human Streptokinase,SK ELISAkit
hz-E10970人核糖核酸酶(RNASE)ELISA试剂盒Human Ribonuclease,RNASE ELISAkit
hz-E10971人过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒Human lipid peroxlde,LPO ELISAkit
hz-E10972人芳基硫酸酯酶A(ASA)ELISA试剂盒Human aryl sulfatase A,ASA ELISAkit
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hz-E10976人艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA试剂盒Human iduronate sulfatase,IDS ELISAkit
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