抗体纯化方法介绍制备出效价高，特异性强，稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础，抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败，不同的免疫学实验方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE, WB等）对抗体的效价，浓度和纯度有不同的要求。我们知道，一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体，血清蛋白以及其他各种杂蛋白等，在制备特异性抗体过程中当抗体的效价达到实验预期之后，我们所制备的抗体的纯度关键取决于所选择的纯化方法。下面就一一介绍常用抗体纯化方法及其相关原理。 1.盐析法（饱和硫酸铵沉淀法）该纯化方法是基于在待纯化免疫血清中加入饱和硫酸铵溶液，由于抗体也是一种蛋白质，其在水溶液中的溶解度是由其本身携带的亲水基团数和电荷数决定的，当我们向抗血清中加入饱和硫酸铵溶液后，硫酸根离子和铵根离子与抗体竞争溶液中的水分子，因为硫酸根离子和铵根离子与抗体分子相比，具有更强的亲水性，因此抗体分子表面的水化膜被破坏，同时其暴露出来的带电基团被溶液中的盐离子所中和进而导致其溶解度大大降低，依据此原理从而将其从抗血清中分离。 具体实验步骤如下： 将5ml抗血清与0.01M PBS在离心管内等体积混合，向其中加入10ml饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置过夜。 将步骤a中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。 将步骤b中离心后的沉淀用2ml 0.01M PBS 溶解，然后缓慢加入3ml 饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置2小时。 将步骤c中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。 将步骤d中离心后的沉淀用1.65ml 0.01M PBS 溶解，然后缓慢加入3.35ml 饱和硫酸铵溶液，边滴加边摇匀，然后置于2到8摄氏度静置2小时。 将步骤e中的待分离物于离心机内离心，8000r/min离心15到20分钟，除上清。 将步骤f中离心后的沉淀用1ml 0.01M PBS 溶解, 转移到MD 14000透析袋内，用0.01 M PBS进行透析，透析4次以上，每次至少1小时以上。 2.正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法该纯化方法原理是：正辛酸在偏酸条件下，能与抗血清中或者小鼠腹水中的杂蛋白结合，在等电点附近将其沉淀，IgG类抗体则存在于上清液中，再利用饱和硫酸铵沉淀法即可进一步提纯。 具体实验步骤如下： 将抗血清或者小鼠腹水于离心机中离心15到20分钟，8000r/min，以去除其中的细胞碎片或者其他沉淀物等杂质。 将1体积的抗血清或者腹水与2体积的0.06M PH 4.8的醋酸盐缓冲液进行混合，室温下，边搅拌边缓慢加入正辛酸，加入正辛酸的量为33ul/ml抗血清或者腹水。 室温混合15到30min 2到8摄氏度静置过夜，使其充分沉淀。  8000r/min离心15到20分钟，弃去沉淀取上清。 将上清转移到MD 14000透析袋内，用0.01 M PBS进行透析，透析4次以上，每次至少1小时以上。 利用盐析法（饱和硫酸铵沉淀法）对步骤f中透析后的上清进行纯化，具体实验见上，此处不再赘述。 3.Protein A和protein G纯化法基本原理：protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A和protein G 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上，当抗血清从中流过时，特异性的IgG就与配基结合，其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同，我们需要具体情况具体对待，分别选择protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G组合。一般推荐小鼠单抗IgG2a,IgG2b,IgG3，兔，人，猪的多克隆抗体用protein A纯化，而小鼠单抗IgG1, 大鼠单抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗体则选择用protein G纯化。 具体实验步骤如下： 称取经CNBr活化了的sepharose 4B 0.5g, 溶于2mM的HCL溶液中，4摄氏度过夜，使其充分溶胀。 将溶胀好了的sepharose 4B预装于层析柱中，用10倍体积的2mM HCL溶液洗涤三次后用0.1 M NaHCO3 溶液对柱子进行平衡 将5mg protein A/G 溶于0.1 M NaHCO3溶液中，加入步骤b中已平衡好的柱子，置于摇床上轻轻混合2到8摄氏度过夜或者室温2到4小时 用0.1 M NaHCO3 溶液洗涤c中已经结合了蛋白的柱子三次。事先留取已经结合过了的上清，用紫外可见分光光度计测定结合后上清中蛋白的浓度，以确定结合率。 用0.01M tris base 平衡柱子三次，加入0.5% BSA封闭sepharose 4B上未结合的位点，置于摇床上在室温反应2到4小时。 用0.01M tris base 平衡柱子3次。 加入要纯化的经预处理了的抗血清5ml，置于摇床上在室温反应2到4小时. 用0.01M tris base 洗涤柱子三次以上，洗掉未结合的杂蛋白 用9ml 0.1 M PH 2.5甘氨酸洗脱结合在柱子上的抗体 将1ml 1M NaHCO3溶液加入EP管中中和步骤i中洗脱的抗体 将步骤j中的抗体溶液装入透析袋经PEG20000或者蔗糖浓缩至2ml后于0.01M PBS中透析4次以上，每次换液间隔时间为1小时以上。 将透析好了的抗体用紫外可见分光光度计测定其在波长280nm处的吸光值，用吸光值除以1.35即为所测抗体的浓度 将所纯化的抗体加入30%-50%的甘油置于-20摄氏度或者-80摄氏度即可长期保存。  4.免疫亲和纯化法基本原理：将抗原作为一种配基偶联在sepharose 4B上，血清等生物液体中的特异性抗体与sepharose 4B上的抗原进行特异性结合，其他杂蛋白和杂抗体则不被结合，通过洗涤和洗脱等一系列实验步骤即可得到高纯度的目标抗体。本方法虽然和Protein A/G均被称为亲和纯化方法，但是纯化得到的最终的抗体还是有很大区别的，Protein A/G纯化得到的主要是非特异性的IgG类抗体，而本方法纯化得到的主要是特异性的IgG类抗体，与其他纯化方法相比，本方法纯化得到的抗体其特异性最强，纯度最高。本纯化方法的实验步骤与protein A/G纯化方法基本一致，将实验方法三的配基protein A/G换成相应的目标抗原即可。  随着生物下游加工技术的不断发展，各种生物大分子特别是抗体大分子的分离纯化方法也越来越多，比如分子筛层析(凝胶层析或凝胶过滤)，离子交换层析等等也在实验中被用到。以上介绍的只是一般IgG类抗体的纯化方法，其他IgM,IgA，IgD,IgE等抗体的纯化方法要依据各自性质的不同选择符合其自身特点的纯化方法。

常用 ELISA 实验原理简介ELISA，即酶联免疫吸附实验，其基本原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。ELISA技术作为免疫标记技术（包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术）中的一种，已广泛应用于科研和临床实验中，具有快速，定性或者定量甚至定位的特点。 在ELISA实验方法中，比较常见的方法有双抗体夹心法，竞争法，间接法，双抗原夹心法，捕获法，下面对此一一详述。 1.双抗体夹心法双抗体夹心法，其基本原理是将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，然后加入待检标本，通过加入检测抗体，酶标记第二抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。 该方法的适用条件是：含有多个抗原表位的大分子物质。因为这种检测方法需要两种抗体，所以就涉及抗体配对的问题。一般而言，常用的抗体配对方法有一下几种：包被抗体为单抗，检测抗体为多抗；包被抗体为单抗，检测抗体为单抗，但这两种单抗针对的抗原表位不同；包被抗体为多抗，检测抗体为多抗，这两种多抗一般是来源于不同的宿主。 这种检测方法在应用酶标第二抗体时，应该注意的一个原则是：第二抗体必须只能针对检测抗体，而不能针对包被抗体。鉴于酶标二抗的局限性，现在一般厂家都引入生物素亲和素放大系统，这种系统在提高反应灵敏度的同时，应用起来也更加方便，我们只需要对检测抗体进行生物素标记，不需要对每一种不同来源的二抗进行酶标记，只需对亲和素做HRP标记就可以省去很多繁琐的工作。  2.竞争法竞争法一般分为直接竞争法和间接竞争法，这里我们以直接竞争法为例进行原理讲解。直接竞争法，其基本原理是：将合适浓度的包被抗体包被于微孔板中，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，加入标准品（样本）和生物素标记的抗原物质进行竞争结合，经合适的温度和一定时间的孵育，洗涤后，加入HRP标记的链霉亲和素进行反应，TMB显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈负相关。 该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质，当然，这种方法也可以用来检测大分子抗原物质甚至是抗体。检测大分子抗原物质时，由于空间位阻的影响，使得该检测方法没有双抗体夹心法检测大分子抗原物质灵敏度高。这种方法在检测抗体时，可能由于两种竞争的抗体来源不一，导致两种抗体趋同性不高，就使得检测结果的可靠性不高。 3.间接法间接法一般用来检测抗体。其基本原理是：将一定量的抗原物包被于聚苯乙烯微孔板，加入无关蛋白载体封闭未结合位点后，加入待测样本，然后加入酶标二抗，经孵育和洗涤后，加底物显色。一般而言，在间接法检测抗体实验中，由于酶标二抗的局限性，一般检测的抗体为总的IgG。 4.双抗原夹心法双抗原夹心法，与双抗体夹心法类似，基本原理是将已知浓度的抗原固定于聚苯乙烯微孔板表面，对未结合位点用无关蛋白载体进行封闭后，加入待检样本，然后加入生物素标记的抗原和HRP标记的链霉亲和素，经TMB显色和终止反应，酶标仪读数之后即可计算待测物浓度。双抗原夹心法与间接法都可以对抗体进行检测，但是前者检测的是针对该抗原的所有种类的抗体，包含IgG, IgM, IgA，IgD, IgE，这是间接法做不到的。 5.捕获法捕获法一般用来测定IgM类抗体。其基本原理是：将抗IgM 抗体包被于固相微孔板，用无关蛋白载体对未结合位点进行封闭后，加入待测样本，接着加入抗原物质，然后加入针对该抗原的经生物素标记的特异性抗体和HRP标记的链霉亲和素，经TMB底物显色和终止反应后即可计算浓度。由于我们检测样本中的IgM含量时，其中同时含有较高浓度的IgG类抗体，在用一般的间接法检测时，IgG类抗体和IgM类抗体会和固相抗原进行竞争性结合，由于IgG占据绝对优势，势必导致IgM类抗体能够结合上去的量相当有限，最终导致的结果是假阴性。

2017清明节放假通知　　尊敬的合作伙伴、用户朋友们：　　您们好!首先预祝各位清明节快乐!　　根据国务院办公厅关于2017年节假日安排的通知，并结合我司实际情况，现将我司2017年清明节放假安排公布如下：　　2017年4月2日至4月4日放假，共3天;2017年4月5日(星期三)正常上班。　　温馨提示：放假期间，我公司不提供接收订单及发货服务，由此给您带来的不便，敬请谅解!　　                                                    上海沪震实业有限公司　　                                                       2017年4月1日

抗体迎黄金期：新优势 新方案 近期，根据ELISA试剂盒课题组对抗体做出最新报导：跟着人员老龄化、环境恶化和生活习惯的改动，肿瘤现已变成一种发病率越来越高的恶性疾病，肿瘤患病率和死亡率的不断上升也促使肿瘤用药商场的不断添加。商场选用的双特异性抗体（bispecific antibody， BsAb）是指富含两种特异性抗原联系位点的人工抗体，能够一起与靶细胞和功用细胞进行相互作用，介导一系列免疫反响。依据双特异性抗体的构造能够将其分为IgG类亚型和非IgG类亚型两种，各类别下都具有多种不一样的方式。其间又以IgG类亚型的三功用抗体（Triomab）和非IgG类亚型的双特异性T细胞联接器（Bispeific T cell Engager，BiTE）技能最为老练，在医治作用、成药稳定性等方面体现优良，现在在临床开展中最为靠前。据恒远了解：抗体界新贵迎黄金期：国外巨子广泛规划，国内玩家少商场大！与一般抗体比较，双特异性抗体添加了一个特异性抗原联系位点，在医治方面有以下优势：(1)一般两个抗原联系位点别离能够联系肿瘤细胞和免疫细胞，将特定的免疫细胞经过重定向征集至肿瘤细胞周围以增强对肿瘤的杀伤力；(2)能够一起阻断两种不一样介质通路而发挥共同或堆叠的功用，介导多种免疫信号通路然后增强细胞杀伤毒性；(3)两种不一样的细胞表面抗原联系后，ELISA试剂盒相对而言也许潜在地添加联系特异性，下降脱靶等副作用。因此，双特异性抗体在肿瘤免疫医治和炎症医治中展示了广阔的运用远景。在临床运用上，双特异性抗体展示了本钱低、医治作用好等明显优势。以代表双特异性抗体zui先进技能的BiTE为例，与传统抗体比较在组织渗透率、杀伤肿瘤细胞效率、脱靶率和临床适应症等目标方面具有较强的竞赛力，临床运用优势明显。特别在运用剂量方面，因为其医治作用能够到达一般抗体的100～1000倍，运用剂量能够下降为本来的1/100，明显下降药物医治本钱，拓宽了商场空间。技能改进推进上市零突破，将来临床运用具有无限也许。双特异性抗体是一种新式的抗体制备技能，制备办法大致阅历了以下三个阶段：化学偶联法、杂交瘤法和基因工程法。以双特异性T细胞联接器（Bispeific T cell Engager，BiTE）技能为代表的新一代双特异性抗体在医治作用、成药稳定性、制备技能等方面体现极为优良，完成了双特异性抗体在FDA批件零的突破。Amgen公司的Blinatumomab在2014年年末现已正式上市，关于费城染色体阴性的前B细胞急性淋巴细胞白血病的医治，并且正在扩展适应症范围，现在关于卵巢癌、胃癌和上皮组织癌的临床实验现已开展到临床Ⅱ期。此外，仍有10余个双特异性抗体商品正在展开临床实验。能够预见，将来10年将是双特异性抗体开展的黄金期间，ELISA试剂盒不断上市的商品和继续证明的临床作用将不断招引产业界和出资界的重视。作为抗体代理商，具有完善的售后服务体系，近期更推出新品牌BIM，国内独立代理商，详情可来电咨询哦。

 细胞冷冻保存的具体操作步骤 细胞冷冻保留的具体操作过程依据技术部给出的最新细胞冷冻保留办法，现公布于下：1. 注意事项：1.1. 欲冷冻保留之细胞应在成长杰出(log phase) 且存活率高之状况，约为80 – 90 %致密度。1.2. 冷冻前检查细胞是不是仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保留前一至二日测验是不是有抗体之发生。1.3. 留意冷冻保护剂之质量。dmso 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micronfglp telflon 过滤或是直接购买无菌商品，如sigma d-2650)，以5~10 ml 小体积分装，4℃避光保留，勿作多次冻结。glycerol 亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保留。在敞开后一年内运用，因长时间贮存后对细胞会有毒性。 1.4. 冷冻保留之细胞浓度：1.4.1. normal human fibroblast: 1~3 x 106 cells/ml 1.4.2. hybridoma: 1~3 x 106cells/ml，细胞浓度不要太高，某些hybridoma 会因冷冻浓度太高而在冻结24 小时后死去。 1.4.3. adherent tumor lines: 5~7 x 106，依细胞品种而异。adenocarcinoma 冻结后须较高之浓度，而hela 只需1-3 x 106cells/ml。 1.4.4. other suspensions: 5~10 x 106cells/ml, human lymphocyte 须最少5 x 106cells/ml。1.5. 冷冻保护剂浓度为5 或10 % dmso，如果不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保留之一起，亦应作一个backup culture，以避免冷冻失利。1.6. 冷冻办法： 1.6.1. 传统办法: 4℃ 10 分钟---> -20℃ 30 分钟---> -80℃ 16 - 18 小时(或过夜) ---> 液氮槽vapor phase 长时间贮存。 1.6.2. 程序降温：运用等速降温机以–1 ～ -3℃/分钟之速度由室温降至–120℃，放在液氮槽vapor phase 长时间贮存。适用于悬浮型细胞与hybridoma 之保留。细胞冷冻保留 2. 资料： 2.1. 成长杰出之培育细胞 2.2. 新鲜培育基 2.3. dmso (sigma d-2650) 2.4. 无菌塑料冷冻保留管(nalgene 5000-0020) 2.5. 0.4 % w  trypan blue (gibcobrl 15250-061) 2.6. 血球计数盘与盖玻片 2.7. 等速降温机(kryo 10 series ii)3. 过程： 3.1. 冷冻前一日前替换半量或全量培育基，调查细胞成长景象。 3.2. 制造冷冻保留溶液(运用前制造)：将dmso 参加新鲜培育基中，最终浓度为5-10%，混合均匀，置于室温下待用。 3.3. 依细胞继代培育之操作，搜集培育之细胞，取少数细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。3.4. 离心，去掉上清液，参加适量冷冻保留溶液，使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml，混合均匀，分装于已标明彻底之冷冻保留管中，1 ml ial，并取少数细胞悬浮液作污染检查。 3.5. 冷冻保留办法1: 冷冻管置于4℃ 10 分钟→ -20℃ 30 分钟→ -80℃ 16～18 小时(或过夜) → 液氮槽vapor phase 长时间贮存。 3.6. 冷冻保留办法2: 冷冻管置于已设定程序之等速降温机中，再放入液氮槽中。 

应用亲和素和生物素的ELISA亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉和素（strepavidin）。生物素（biotin）又称维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELIS偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。　　亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。桥联法ABC-ELISA（avidinbiotincomplex-ELISA）夹心法测抗原的过程见。

ELISA竞争法竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：　　（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。　　（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。　　（3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。

ELISA试剂盒实验边缘效应疑问咱们在运用ELISA试剂盒96孔板的试验测定的时分，常发现有“边缘效应"，也就是外周孔显色较基地孔深。经研究证真实温育中的热力学梯度也许是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在试验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃摆布）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与基地孔之间也许存在一热力学梯度。因而运用水浴或在将反响溶液参加至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地扫除“边缘效应"，而且可进步测定的重复性。 ELISA试剂盒还有就是在试验中，必定有运用微量加样器参加样本的步骤。提示留意：加样不行太快，要防止加在孔壁上部，不行溅出和发生气泡。ELISA试剂盒太快的话无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易致使非特异吸附。溅出会对附近孔发生污染。出现气泡则反响液界面有区别。所以，有时分一份标本用一样的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，通常就是上述加样及试剂的过错所造成的。ELISA试剂盒运用时必定要根据自个的试验需求采购专用获取试剂盒，如果不是专用试剂盒，或许能提出RNA，但不能保证其质量以及完整性。

ELISA试剂盒的制备有必要标准化在ELISA试剂盒实验条件（包含试剂）较难确保稳定的情况下，这种判别法较为适宜。在得出标本（S）和阴性对照（N）的A值后，核算S/N值。也有写作P/N的，这里的P不代表阳性（positive），而是病（patient）的缩写，不该误解。为防止混杂，更宜用S/N表示。在前期的间接法ELISA试剂盒中，有些作者定出S/N为阳性规范，现多为各种测定所沿袭。ELISA试剂盒实际上每一测定体系应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应注意的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，致使反响后发生的本底可能较正常人血清的本底低得多。阳性断定值（cut-off value）通常为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为判别成果阳性或阴性的规范。ELISA试剂盒用此法判别成果请求实验条件非常稳定，阳性和阴性的对照品应契合必定的规格，须配用精细的仪器，并严厉按规定操作。阳性断定值公式中的常数是在这特定的体系中经过对很多标本的实验检查而得到的。现举某种检查HBsAg的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品HBsAg的含量标明为P=9±2ng/ml。每次实验设2个阳性对照和3个阴性对照。测得A值后，先核算阴性对照A值的平均数（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（P-N）必须大于一个特定的数值（例0.400），实验才有用。3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此规模，则弃去，罢了另两个阴性对照重新核算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上规模，则该次实验无效。阳性断定值按下式核算： ELISA试剂盒阳性断定值=NCX+0.05 标本A值＞阳性断定值的为阳性，小于阳性断定值的为阴性。应注意的是，式中0.05为该试剂盒的常数，只适合于该特定条件下，ELISA试剂盒而不是对各种试剂均可通用。

ELISA试剂盒阳性判定值的计算方法ELISA试剂盒阳性判定值按下式计算： 阳性判定值=NCX+0.05 标本A值＞阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。应留神的是，式中0.05为该试剂盒的常数，只适宜于该特定条件下，ELISA试剂盒而不是对各种试剂均可通用。也有写作P/N的，这儿的P不代表阳性（positive），而是病（patient）的缩写，不应误解。为防止稠浊，更宜用S/N标明。在前期的间接法ELISA试剂盒中，有些作者定出S/N为阳性规范，现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应留神的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，致使反应后发作的本底或许较正常人血清的本底低得多。ELISA试剂盒在得出标本（S）和阴性对照（N）的A值后，计算S/N值。3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此方案，则弃去，算了另两个阴性对照从头计算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上方案，则该次实验无效。阳性判定值（cut-off value）通常为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为差异效果阳性或阴性的规范。阳性判定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对许多标本的实验查看而得到的。现举某种查看HBsAg的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品HBsAg的含量标明为P=9±2ng/ml。每次实验设2个阳性对照和3个阴性对照。测得A值后，先计算阴性对照A值的平均数（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（P-N）有必要大于一个特定的数值（例0.400），实验才有用。ELISA试剂盒用此法差异效果恳求实验条件非常安稳，阳性和阴性的对照品应契合一定的规范，须配用精细的仪器，并严峻按规则操作。

ELISA试剂盒实验中转录因子的使用ELISA试剂盒诱导多功能干细胞缺点也非常显著：不易获得、转化时间较长、具有引发癌症的风险。研究人员发现胞外存在大量磷酸化蛋白，但通过分泌途径发挥激酶活性的磷酸激酶直到最近才被发现，目前对此类磷酸激酶调控作用的相关研究仍较少。Fam20C是位于高尔基体上的一种酪蛋白激酶，能够对多种分泌蛋白进行磷酸化并且对适当的生物矿化作用至关重要。2016年，斯坦福大学医学院的研究人员绕过了诱导多功能干细胞这一步骤，首次直接将实验鼠皮肤细胞转化为神经细胞。Fam20A是一种假激酶，能够与Fam20C形成功能性复合物，这种复合物会通过分泌途径增强胞外蛋白磷酸化。ELISA试剂盒研究人员发现Fam20A能够增强Fam20C的激酶活性，促进釉基质蛋白的磷酸化。Fam20A是Fam20C的一种类似物，在釉质形成过程中发挥重要作用，但Fam20A的生化功能仍不清楚。2012科学界在这一领域取得突破——美国和日本科学家分别将普通皮肤细胞转化为诱导多功能干细胞。转化出的神经细胞与正常神经细胞无异，在植入实验鼠中枢神经系统后可发送和接收信号。胚胎干细胞将在再生医学领域扮演重要角色。不过，由于提取胚胎干细胞涉及伦理问题，科学家们开始寻找替代方法。胚胎干细胞类似的功能，却绕开了胚胎干细胞研究带来的伦理障碍，诱导多功能干细胞由此也成为近年来干细胞研究的热点领域之一。ELISA试剂盒使用了不同转录因子组合，并添加了神经细胞支持因子，最终直接将人类皮肤干细胞转化为前脑神经细胞。

研究发现大豆驯化过程中锌指蛋白的选择有助于提高大豆油脂含量大豆作为重要的油料作物，是植物油的主要来源。种子中的油脂含量在驯化中受到人工选择而不断提高，成为大豆的重要农艺性状。目前大豆油脂代谢的生化途径已比较清楚，但其调控机理尚不明确。中国科学院遗传与发育生物学研究所张劲松研究组和陈受宜研究组通过分析大豆种子发育不同阶段以及根、茎、叶等转录组数据中的表达差异基因，以及栽培大豆特异的调控籽粒油分的基因共表达网络，鉴定出油脂快速合成时期的种子偏好表达转录因子基因GmZF351。通过比较ZF351在栽培大豆和野生大豆中的表达量和群体遗传分析，发现GmZF351在驯化中受到人工选择。进一步功能分析表明，GmZF351编码串联CCCH锌指蛋白，蛋白定位于细胞核并具有转录激活活性。过表达GmZF351显着提高了转基因拟南芥种子油脂含量。ChIP-Seq和ChIP-qPCR、qRT-PCR和烟草瞬时转化分析发现GmZF351可直接激活油脂合成和贮存基因BCCP2、KASIII、TAG1和OLEO2。GmZF351还结合WRI1的启动子正调控其表达，并通过WRI1下游基因Pkpα和Pkpβ1进一步提高转基因拟南芥的质体丙酮酸激酶活性，为脂肪酸合成提供更多乙酰-CoA从而促进油脂在种子中的积累。在大豆中过表达GmZF351同样增强了转基因大豆种子中的油脂积累，qRT-PCR和烟草瞬时转化分析发现GmZF351能够诱导WRI1同源基因Glyma15g34770和Glyma08g24420、BCCP2同源基因Glyma19g03530、KASIII同源基因Glyma15g00550、TAG1同源基因Glyma13g16560和Glyma17g06120以及OLEO2同源基因Glyma19g13060和Glyma16g07800的表达。对ZF351进行单倍体型和进化树分析发现，GmZF351单倍体型来自于野生大豆III型，并与高基因表达量、启动子活性和油脂含量相关联。此项研究展示了大豆中新的油脂积累调控机制，并为驯化过程中油脂含量的增加提供了理论支持(图1)。GmZF351具备很大的应用潜力，可以用于现有大豆品种油脂性状的改良，对提高大豆品质和价值具有重要意义。

DA1调控植物种子和器官大小机制的研究取得重要进展植物种子和器官大小是重要的农艺性状，种子和器官大小的调控也是重要的发育生物学问题。李云海研究组的前期工作表明，泛素受体蛋白DA1与两个E3泛素连接酶DA2和EOD1/BB直接互作，协同调控种子和器官大小 （Li et al.， Genes & Development 2008； Xia et al.， Plant Cell 2013）。此外，DA1通过介导去泛素化酶UBP15/SOD2以及转录因子TCPs蛋白的降解调控种子和器官大小（Du et al.， Plant Cell 2014； Peng et al.， Plant Cell 2015）。但是，DA1与两个E3蛋白协同作用的机制以及DA1介导底物降解的机制仍不清楚。中国科学院遗传与发育生物学研究所李云海研究组与英国John Innes Centre， 比利时根特大学以及德国Leibniz Institute of Plant Biochemistry合作，发现了泛素受体DA1具有蛋白酶活性，E3泛素连接酶能够激活DA1蛋白酶活性，并通过切割下游底物调控种子和器官大小的重要机制。DA1含有两个保守的泛素结合区、一个LIM结构域和一个C端蛋白酶结构域。E3泛素连接酶DA2和EOD1通过泛素化DA1，激活了DA1的蛋白酶活性。活化的DA1可以切割UBP15，TCP15，TCP22等下游底物。因此，该研究揭示了DA1的蛋白酶活性通过协同调控下游底物的稳定性调控种子和器官大小的重要机制。该研究结果于2017年2月6日在线发表于Genes & Development上（doi：10.1101/gad.292235.116）。董慧、Jack Dumenil、Fuhao Lu、李娜等为共同第一作者，Michael Bevan教授和李云海研究员为共同通讯作者。该研究得到了科技部、国家自然科学基金委和农业部的资助。

分析基因拷贝数为卵巢癌治疗提供新可能来自美国加州大学圣地亚哥分校医学院和穆尔斯癌症中心的研究人员开发了一种用于分析基因拷贝数变化的新工具，基因拷贝数改变是肿瘤遗传学中容易被忽视的一个方面。这种变化叫做体细胞基因拷贝数改变（somatic copy-number alterations），该研究认为这种改变可能是疾病进展的关键，或可为卵巢癌及其他恶性肿瘤的治疗提供新的治疗思路。“大多数人接触到肿瘤遗传学都会想到促进肿瘤形成的单个关键突变——比如BRCA基因。这些突变经常被当做肿瘤的驱动因素，但是单个点突变并不是影响肿瘤生长的唯一因素。我们对其他可能性进行了探究。”文章作者Joe R. Delaney这样说道。癌细胞中超过90%的遗传变化都是缺失或获得一个基因的拷贝而非突变。一个肿瘤细胞可能有一个拷贝或三个拷贝而非正常的两个拷贝。该研究领域还没有得到非常深入的研究，关于其他疾病的研究经历让科学家们了解到缺失一个基因拷贝可能不会导致疾病症状，因为另外一个拷贝可以起到一定的弥补作用。研究人员怀疑如果协同执行相同细胞功能的几个基因都缺失单个拷贝是否会导致疾病症状的出现以及在不同癌症中存在什么样的缺失模式。他们设计了一种叫做HAPTRIG的计算工具来发现因基因拷贝缺失或增加而被显著破坏的信号途径。卵巢癌细胞中存在许多基因拷贝变化，超过60%的基因都受到影响。研究人员利用HAPTRIG技术进行了分析，结果发现细胞自噬途径受到了显著影响。卵巢癌细胞虽然一直在利用细胞自噬，但是也会缺失一些自噬相关基因的拷贝导致自噬能力受到影响。随后研究人员利用已经得到美国FDA批准的一些药物进行组合来靶向自噬，在几种不同的小鼠癌症模型中发现卵巢癌细胞对这些药物高度敏感——即使癌细胞已经对标准化疗药物产生了抵抗。这些药物组合的毒性弱与标准化疗药物，并且相对便宜，研究人员认为应当对这些药物进行临床评估。研究人员表示，在进一步的工作中，该研究的发现将会促进新治疗方法的开发用于治疗对化疗产生抵抗的卵巢癌，也会增强对其他癌症的治疗。

想要取悦你的朋友？讲一些他们也知道的故事吧我们喜欢跟家人和朋友们分享我们经历过但是他们没经历过的新鲜事儿，但是最新的研究表明我们讲述的故事并不会让朋友们像我们想象的那样感到刺激。发表在国际学术期刊Psychological Science上的一系列研究表明虽然讲述者和倾听者都认为新鲜的故事能够让大家都喜欢，但是倾听者最后总会更喜欢一些他们熟悉的故事。“交谈是人类社交活动中最常见的一种形式，想要进行一次好的对话就需要了解我们的交谈对象到底想听到什么。讲述者认为倾听者们应该对他们从未经历过的事情最感兴趣，但是我们的研究发现讲述者们的想法是错误的。”哈佛大学的Daniel T. Gilbert这样说道。这项研究来自于文章作者真实生活中的一些观察。研究人员决定通过四个实验来探索这个问题。在他们的第一个实验中，他们安排参与者分为三人一组，其中一人当讲述者另外两人当倾听者。讲述者先观看一段视频然后再把视频内容描述给倾听者们。一些倾听者曾经看过讲述者介绍的视频，而另外一些倾听者并没有看过。在讲述者开始介绍之前，他们会对倾听者们对他们介绍内容的感兴趣程度等问题进行预测。当讲述者完成他们的发言，倾听者们再对这些方面进行评分。结果显示讲述者们的预测与实际结果完全相反。讲述者们认为如果倾听者们从没看过视频，那么他们会对讲述者们介绍的故事给出积极反应，但实际上看过视频的倾听者们会给出更积极的反应。第二个实验结果表明，当要求倾听者们在听到故事之前预测自己的反应，倾听者们会做出跟讲述者一样的错误预测。为什么熟悉的故事会让人更喜欢呢？是讲述者更擅长讲熟悉的故事还是倾听者的个人经历能让他们更容易地理解熟悉的故事呢？在研究人员的第三和第四个实验中，他们发现第二种解释似乎比较正确。当倾听者们看过讲述者介绍的视频，他们能够填补讲述者故事中的漏洞，让故事听起来更有趣。“人们一般都不太擅长讲故事，总会落下一些重要信息。如果我们能够把我们看到的画或者读过的书描述得很好，朋友们可能就喜欢听我们讲述了。但是大多数人都无法做到这一点。结果就是当我们讲述一些朋友们熟悉的故事他们会更感兴趣，因为至少他们知道我们在说什么。”Gilbert这样说道。

新研究找到HIV急性感染过程中早期T细胞应答的线索HIV特异性CD8+T细胞能够杀死产生HIV的细胞并抑制HIV储蓄池的形成，但是最近一项研究发现这群细胞只能在急性HIV感染的峰值期被检测到。相关研究结果发表在国际学术期刊Science Translational Medicine上。HIV特异性的CD8+T细胞是能够杀死HIV感染细胞的一群白细胞。这群细胞在控制HIV病毒血症方面起到关键作用，对于降低HIV感染细胞的数目非常重要。研究人员在RV254急性感染研究的样本中分析了HIV特异性CD8+T细胞。RV254急性感染研究招募了处于急性HIV感染最早期阶段的被感染者，他们一般在感染几周内被招募入组，并立即接受ART治疗。在这项新研究中，研究人员在三个不同的急性HIV感染阶段追踪了免疫应答情况，他们发现在急性HIV感染的第一阶段和第二阶段早于峰值期产生的HIV特异性CD8+T细胞会出现细胞扩增和杀伤功能执行方面的拖延，这就意味着这群细胞控制HIV扩增的能力存在不足。相比之下，在病毒血症峰值期或急性HIV感染第三阶段发现的完全分化的HIV特异性CD8+T细胞与开始ART治疗后病毒载量的下降有关。重要的是，这些完全分化的细胞能够在开始ART治疗后继续存在，与HIV储蓄池形成能力下降有关。“完全分化的HIV特异性CD8+T细胞在开始ART治疗后两周仍然存在，但是它们的数量出现了大幅减少。延长它们存活时间的干预措施可能对HIV储蓄池规模有深远影响。接下来几年的挑战在于如何通过免疫干预措施诱导和维持这些强力HIV特异性CD8+T细胞。”文章作者Dr. Lydie Trautmann这样说道。病毒储蓄池是治愈HIV感染的一个关键挑战，HIV病毒可以在组成储蓄池的细胞中潜伏很多年，从而避免被抗逆转录病毒治疗所清除。

利用细菌治疗癌症取得新的突破根据一项新的研究，作为一种导致胃肠炎的细菌，鼠伤寒沙门氏菌经基因改造后能够强效地摧毁小鼠肿瘤。在此之前，已有越来越多的研究探究细菌性癌症疗法。这项新的研究是这类研究的最新一起。它揭示出一种导致由细菌触发的癌症杀伤活性的免疫机制。相关研究结果发表在2017年2月8日的Science Translational Medicine期刊上，论文标题为“Two-step enhanced cancer immunotherapy with engineered Salmonella typhimurium secreting heterologous flagellin”。美国麻省理工学院的Susan Erdman（未参与这项研究）在一封发给《科学家》杂志的电子邮件中写道，“我对利用菌群消除癌症非常感兴趣。这项研究利用细菌或它们的产物激活有益的宿主免疫反应来抑制和阻止癌症发展和生长，是一个有前景的科学前沿部分。”在肿瘤内，缺氧的坏死核心是对沙门氏菌、梭菌和李斯特菌等厌氧菌有吸引力的环境。这些细菌的感染能够让它们在肿瘤中定植。当大量增殖时，它们能够直接地杀死癌细胞，但是也会吸引机体免疫系统（通常在肿瘤内遭受抑制）的关注，从而进一步导致肿瘤破坏。尽管这是大多数细菌性癌症疗法背后的原因，但是利用这种方法治疗病人并非如此简单。位于美国旧金山市的生物技术公司Delinia首席执行官Saurabh Saha（未参与这项研究）解释道，这种疗法存在安全问题。比如，Saha讲述了近期开展的一种实验性梭菌疗法（Science Translational Medicine, doi:10.1126/scitranslmed.3008982）：尽管一名病人的肿瘤经单剂细菌治疗后显著缩小，但是这种疗效“是如此强大以至于这名病人需要补充水分，需要抗生素，这是因为我们需要抗生素来抑制这种反应”。另一方面，在近期的一项临床试验（Journal of Clinical Oncology, doi:10.1200/JCO.2002.20.1.142）中，研究人员将减毒沙门氏菌注射到病人体内，结果表明这种细菌是安全的，但是它们并不能有效地产生强大的免疫反应，因此要找到一种折衷方法还有很长的路要走。为了增加开发一种成功的细菌性癌症疗法的机会，来自韩国全南国立大学的Jung-Joon Min及其团队首次尝试着在小鼠体内优化这种方法。Min团队之前已证实一种减毒的沙门氏菌菌株能够在肿瘤中定植，并且激活小鼠的免疫反应，但是它并不能完美地杀死癌症，这是因为有70～80%的癌症会复发。为了提高这种沙门氏菌的效力，Min团队对这种细菌进行基因改造，让它们过量表达一种经证实会诱导强大的免疫反应的蛋白---鞭毛蛋白B。一些细菌具有能够游动的鞭毛，即一种类似尾巴的附属物。鞭毛蛋白B是这种鞭毛中的一种组分。Min团队报道，静脉注射这些表达鞭毛蛋白B的沙门氏菌会破坏55%的小鼠体内的实验性肿瘤，而且这些小鼠在四个月的观察期结束时仍然保持健康。若不能过量表达鞭毛蛋白B，这种沙门氏菌初始时会导致这些小鼠的肿瘤萎缩，但是它们体内的肿瘤随后往往会复发。Min团队观察到，在这种沙门氏菌在这些小鼠的肿瘤中定植后，局部的巨噬细胞从一种免疫抑制性表型切换到一种促炎性表型。再者，基因敲除实验揭示出Toll样受体4（Toll-like receptor 4, TLR4）是这种沙门氏菌诱导的抗癌活性所必不可少的。TLR4是一种激活先天性免疫反应的宿主蛋白。Saha说，开发细菌性癌症疗法存在的问题之一是“这些细菌几乎是未知的”。它们促进癌症破坏，但是没有人确切地知道它们是如何实现的。他说，当前的这项研究“在分子水平上拓展了我们对细菌性癌症疗法的理解”。位于美国圣地亚哥市的临床前合同研究机构Anticancer首席执行官Robert Hoffman说，尽管有大量的研究探究利用细菌作为抗癌试剂，但是它们事实上是人们开展的第二轮这样的研究。在1800年代末，骨外科医生William Coley在发现一名遭受细菌感染的癌症病人的存活期比期待中更长之后，开创性地将细菌用于癌症治疗。Hoffman说，在当时，放疗和化疗尚不流行，细菌注射是“首选治疗方法”。他补充道，如今，让人们重新燃起兴趣的细菌性癌症疗法是“非常非常有前景的”。

一种男性注射避孕药能有效阻止怀孕为了进行更好的生育控制和吸引美国硅谷数百万美元的投资，科学家一直在开发一种男性避孕药。如今，在一项新的研究中，来自美国加州大学戴维斯分校的研究人员证实Vasalgel水凝胶能够注射到雄性恒河猴输精管中阻断精子，似乎会阻止雌性恒河猴怀孕，而且比输精管切除术具有更少的副作用。相关研究结果于2017年2月7日发表在Basic and Clinical Andrology期刊上，论文标题为“The contraceptive efficacy of intravas injection of Vasalgel™ for adult male rhesus monkeys”。论文第一作者、加州大学戴维斯分校加州国家灵长类研究中心兽医Angela Colagross-Schouten在一项声明中说道，“输精管切除术是非人灵长类动物兽医采用的一种常规的手术，因此为了获得类似的或者甚至稍微更好的结果，尝试一种全新的方法是非常鼓舞人心的。有希望的是，注射Vasalgel能够是其他的圈养栖息地（包括动物园）的一种选择方法，这是因为人们想要控制动物的繁殖率，以便确保这些动物有容身之所。”Vasalgel是一种聚合物，当注射到输精管中，能够形成一种海绵状的高分子量水凝胶。这种水凝胶允许重要的体液（包括精液）穿过，但不会允许精子穿过。在之前的一项涉及兔子的研究（Basic and Clinical Andrology, Published: 30 March 2016, doi:10.1186/s12610-016-0033-8）中，Colagross-Schouten说，她和她的同事们证实利用一种碳酸氢钠溶液将这种水凝胶从输精管冲刷出去能够逆转Vasalgel的效果。在当前的这项新的研究中，为了测试Vasalgel在非人灵长类动物中的效果，这些研究人员将这种聚合物注射到16只雄性恒河猴的输精管中，随后让这些经过处理的动物返回到户外的群居场所，在那里，它们在整个繁殖季节与雌性恒河猴共同生活。尽管参与这项研究的这些雄性猴子和雌性猴子在过去成功地发生交配，但是在研究期间，没有一只雌性猴子怀孕。在将Vasalgel用于人体中进行测试之前，这些研究人员必须确定在其他的哺乳动物体内，这种水凝胶的效果是否是可逆的。

我国科学家发现病原菌全新致病机制南京农业大学教授王源超领导的科研团队日前取得一项关于作物疫病发生机制的突破性成果，揭示了病原菌攻击宿主的全新致病机制——“诱饵模式”。这是人类首次在更精准的层面认识这类严重危害植物的病原菌分子机理，为改良农作物的持久抗病性提供了新方向。13日，国际知名学术杂志《科学》（《Science》）在线发表了这项成果。病原菌是一类能够入侵宿主引起感染的微生物，包括细菌、真菌和病毒等。目前已发现的病原菌有160多种，是全球粮食、食品和生态安全的重要威胁。由于这类病害发病快、变异快、流行快，防控一直较难。通过对一种重要的病原菌——疫霉菌的研究，科学家发现，在入侵植物的早期，疫霉菌向细胞外分泌糖基水解酶XEG1攻击植物细胞壁，而植物则利用水解酶抑制子GIP1抑制其活性。在进化过程中，疫霉菌又获得了XEG1的失活突变体XLP1，以诱饵“DECOY”的方式干扰抑制子GIP1，与糖基水解酶XEG1协同攻击植物的抗病性。历史上，疫霉菌引起的农作物疫病曾被称为“植物瘟疫”，19世纪中期引起欧洲的马铃薯晚疫病大流行，导致150万人饿死，数百万人逃亡美洲和澳洲。该成果第一作者马振川博士打了个比方：糖基水解酶XEG1相当于疫霉菌攻击植物的“常规导弹”。导弹来了植物会启用自身的防御系统水解酶抑制子GIP1抵御攻击。但是，疫霉菌又会进化出“假弹头”糖基水解酶XEG1的失活突变体XLP1。“假弹头”虽然没有攻击性，但它和植物抑制子GIP1的结合能力高出XEG1约 5倍，因此可以充当“诱饵”把作物防御系统的主要“兵力”吸引过去，从而保护“真弹头”XEG1乘虚而入。“病原菌在侵入宿主的过程中，上演着极其复杂和精确的‘攻击、防御，再攻击、再防御’的‘军备竞赛’。”王源超说，“由于糖基水解酶XEG1在卵菌、真菌和细菌中都广泛存在，因此这一发现为开发能诱导植物广谱抗病性的生物农药提供了重要的理论基础。

沙门氏菌可以抗击脑癌？这种经过遗传改造的沙门氏菌不再寄生于人体肠道部位进行破坏，反而能够对脑部的肿瘤进行杀伤。来自杜克大学的研究者们利用该技术在大鼠的脑胶质瘤模型中进行验证。结果显示，这种疗法能够显著提高大鼠的寿命：相比对照组，实验组小鼠存活期超过一百天的个体有了20%的上升。这相当于人类患者10年的寿命。 “由于胶质瘤十分危险且难以治愈，任何存活期方面的改变都是十分有意义的。”研究者之一Johnathan Lyon说道。存活率的升高是该研究的一大亮点，毕竟患胶质瘤的患者存活时间都有限。目前患这种类型癌症的患者仅有30%存活时间超过两年。脑胶质瘤难以治愈的问题之一是这一肿瘤组织隐藏在血脑屏障之后，因此会将血液循环系统屏蔽在外。常规的药物难以穿透这层膜，因此需要新的技术组织胶质瘤的恶化。因此，研究者们通过遗传改造的方式构建了一类无毒性的沙门氏菌，这种沙门氏菌不能分泌一类重要的酶—purine。胶质瘤是这种酶的主要来源，因此沙门氏菌为了获取这一原料将不停地向肿瘤组织深入浸润。而当细菌进入肿瘤间隙中时，另外两项遗传修饰就开始发挥作用了。由于癌细胞增殖速度很快，肿瘤组织内部的氧气十分缺乏。基于这一点，研究者们向沙门氏菌中导入了两个分别产生Azurin与p53的基因，这两个基因在氧气环境较低的情况下才会诱导表达。而表达产生的这些化合物能够有效促进癌细胞的自我毁灭。研究者们认为这一技术相比手术要更为精准。另外，由于已经经过遗传改造，这一类细菌不再具有毒性，因此临床上的副作用也会大大降低。当然，目前该实验结果仅仅在动物水平得到了验证，不能完全保证能够成功应用于人体治疗，但作者们对此充满信心。

沪震实业2017年春节放假通知 尊敬的新老客户及全体员工：　　新春佳节渐近，为欢度中华民族的传统佳节，使全体人员能够开开心心地过上一个欢乐、祥和的2017年春节，尽可能的与家人一起享受节日的欢乐和喜悦;结合公司情况，经公司研究决定：公司定于2017年春节放假安排为：1月22日至2月4日（初八）放假，2月4日（初八）正式上班。由于放假给大家带来的不便，敬请谅解! .再次感谢大家一直以来对我司的关注及支持! 衷心祝愿大家度过一个欢乐、祥和的春节!又是一年新来到!惜别2016，我们迎来了充满希望、机遇和挑战的2017年! 在此，感谢大家在过去一年里对沪震实业的支持与信任。同时也希望在新的一年里，沪震实业能继续得到大家的关注及支持，并且沪震实业也会一如既往地为大家提供更优质的服务! 正值中国的传统节日"春节"来临，在此向各位新老客户和广大朋友们拜个早年!预祝大家新春愉快!财源广进!全家欢乐! 　　                              上海沪震实业有限公司 　　                                  2017年1月17

科学家开发自动化技术可在早期阶段检测黑色素瘤即使是最牛的专家也有可能被黑色素瘤愚弄。患上这种皮肤癌的病人经常会在皮肤上长出一些看起来像痣的东西但是形状和颜色可能不规则，很难与良性的痣进行区分，因此黑色素瘤的诊断非常困难。现在来自美国洛克菲勒大学的研究人员开发出一种自动化技术，结合影像检查与数字分析以及机器学习帮助医生在早期阶段检测病人的黑色素瘤。“在关于如何评估黑色素瘤的皮肤病领域亟待建立标准化规范。通过筛查进行黑色素瘤的检测能够拯救许多病人但是也存在很大挑战，即使是对可疑病变进行提取和活检，能够确定为黑色素瘤的病例也只有大约10%。”James Krueger教授这样说道。在这个新方法中，病变的图片会经过一系列计算机程序的处理，从中提取颜色数目以及其他可定量数据。这种分析方法会产生一个整体的风险指数，叫做Q指数，代表着发生癌变的可能性。最近发表在Experimental Dermatology上的一项研究对这种方法的可用性进行了评估，研究表明Q指数在发现早期黑色素瘤方面的正确率很高。对正常痣的正确检测率为36%，接近皮肤病专家在显微镜下对可疑痣的直观检测。研究人员在开发该工具的过程中使用了60张黑色素瘤的图片和等量的良性生长物图片，用图像处理程序进行分析。他们开发了图像标记物来准确定量生长物的视觉特征，再利用计算机软件产生一系列可定量指标来区分两组图片。通过将数据与每一种标志物进行结合，他们为每张图片计算出一个Q指数，介于0和1之间，数字越大代表癌变的可能性越大。之前曾有研究发现，病变的颜色数目是确定癌变的最显著标记物。如果只看某些特定颜色通道，另外一些标记物也会比较显著，根据这一发现或可开发更多标记物来提高诊断的准确性。研究人员表示，他们下一步计划在更大的研究中对这种方法进行评估，进一步研究如何利用特定的颜色来揭示病变的更多细节，这可能对于未来进行黑色素瘤的诊断非常有用。

新方法对核酸扩增反应进行高灵敏度检测聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。数字PCR即Digital PCR（dPCR)，它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。20 世纪末，Vogelstein 等提出数字PCR( digitalPCR，dPCR) 的概念，通过将一个样本分成几十到几万份，分配到不同的反应单元，每个单元至多包含一个拷贝的目标分子( DNA 模板) ，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR 扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。数字PCR是一种核酸分子绝对定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法，光度法基于核酸分子的吸光度来定量；实时荧光定量PCR（Real Time PCR）基于Ct值，Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数；数字PCR是最新的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种绝对定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。数字PCR技术不断发展，Bio-Rad、LIFE Technologies及RainDance等厂家相继推出技术较为成熟的数字PCR产品。利用与核苷酸加入相关的pH变化对核酸扩增反应进行电学检测能够使得测试装置小型化和具有更大的可移植性，并且降低成本。然而，当前的检测核酸扩增反应的离子敏感场效应晶体管（ion-sensitive field effect transistor, ISFET）方法依赖于在一种体积庞大的难以精密加工的参考电极上建立流体门控电势，然而因其难以精密加工也就限制了进行大规模平行反应检测的潜力。在一项新的研究中，来自美国伊利诺伊大学厄巴纳-香槟分校的研究人员展示了利用一种将pH不敏感性参考场效应晶体管（reference field effect transistor, REFET）与微加工固态准参考电极（quasi-reference electrode, QRE）相配套使用的方法能够检测实时的pH变化。最终的结果是研究人员开发出一种0.18μm的绝缘体硅片铸造的传感器，这种传感器利用铂QRE建立一种pH敏感的流体门控电势，并且利用一种聚氯乙烯（PVC）膜REFET能够基于pH变化对环介导等温扩增（LAMP）进行检测。这种技术非常适合进行商业化扩大生产，降低对ISFET pH检测的包装和制造需求，而且能够大规模地进行平行液滴测量，如监测数字PCR中的反应进程。研究人员详细了阐明了一种实现这种目标的方法所需的所有步骤。鉴于固态电极的pH敏感性，REFET设计已被人们使用。一种携带pH不敏感性膜的ISFET可用来监控这种电极的pH反应。之前的技术已展示了在ISFET上使用pH不敏感性层，如硅烷、缓冲水凝胶、聚对二甲苯和polyACE。然而，PVC提供一种有吸引力的替代性选择，这是因为它之前已被证实的简单制造过程、良好的pH不敏感性和已知的与加有BSA的PCR的兼容性。总之，将一种pH敏感性电极与一种pH不敏感性REFET结合在一起的系统为在芯片上对生物反应（如靶向检测多种病原体的LAMP）进行电学检测提供一种机会。总之，在这项新的研究中，研究人员开发出一种对核酸扩增反应进行电学检测的新技术。将一种场效应晶体管与一种固态电极进行结合会简化对大规模LAMP等生物反应进行ISFET pH检测。通过将易于制造的固态微电极整合在一种芯片的表面上，就能够单个地对液滴进行测量，并且绘制出它们发生变化的性质。可能从这种方法获得巨大益处的技术包括数字PCR或数字LAMP，以及基于介质上电润湿的液滴操纵而能够开展的检测方法。人们可能利用这种方法开展酶活性高通量分析，检测靶核酸序列是否存在，或者通过酶反应速率检测靶生物分子是否存在等。这种方法能够通过使用常见的金属镀膜技术和一种pH不敏感性的REFET进行液滴测量和简化大规模液体测量。

重磅：科学家首次发现肠道微生物分泌蛋白可以提高胰岛素水平 记得老编辑有天对我讲，「有些投资人告诉我，现在微生物领域是投资热点，大家都在看项目，但是好的项目实在是太少了。」近十年来，二代测序技术不仅催生了一大批专注于人体基因组的公司，也孕育了一大批关注人体肠道微生物的公司。几乎每周都有肠道微生物的重磅研究进展刊登在各个顶级期刊上，然后迅速刷爆朋友圈。科技的确是第一生产力。然而，如果你仔细看一下大多数肠道微生物的研究论文，你可能会产生跟投资人类似的迷茫：肠道微生物与疾病相关性的研究非常多，但是鲜有研究能说出背后的原因。这就意味着，科学家知道肠道微生物与健康有关，但是存在什么样的因果关系，目前还不清楚。这严重制约了肠道微生物研究成果的转化。这也是投资人口中「好项目少」的原因。▲如上图所示，我们知道肠道微生物与多种疾病之间存在相关性，但是背后的因果关系并不明确。于是每一个能够阐明肠道微生物与疾病之间关系的研究，都显得弥足珍贵。例如，克利夫兰诊所Stanley L. Hazen研究团队阐明了肠道微生物与动脉硬化之间的关系；美国东北大学的微生物学家Philip Strandwitz团队阐明了肠道微生物与抑郁症之间的关系；瑞士洛桑联邦理工学院Patrick Aebische团队阐明了肠道微生物与衰老之间的关系；耶鲁大学医学院Gerald I Shulman教授团队阐明了肠道微生物与肥胖之间的关系。由于这些研究基本说明了肠道微生物与相应健康问题之间的因果关系，因此存在极大的转化价值。近日，俄勒冈大学的著名生物学家Karen Guillemin教授团队的研究人员，又给我们带来了一个珍贵的研究成果。她们发现β细胞的生长分裂可能是由肠道微生物控制的(Hill， Franzosa et al. 2016)。众所周知，β细胞是唯一能够分泌胰岛素的细胞，这一发现的重要性不言而喻。据悉，这是科学家首次揭示肠道微生物与β细胞之间的关系，这一发现可能给糖尿病的诊断和治疗增加一利器。Guillemin教授团队的这一重要研究刊登在著名开源期刊eLife上。▲Karen Guillemin教授早在十多年前，科学家就已经发现糖尿病与肠道微生物失衡之间存在一定的联系(Brown， Davis-Richardson et al. 2011， Giongo， Gano et al. 2011， Kostic， Gevers et al. 2015)，后续的研究不断证实这种相关性，但是没有一个研究能说明这种相关性背后的原因。就在学界一再证实糖尿病与肠道微生物之间存在关系，又找不到直接的证据的时候，Guillemin教授决定做一个大胆而艰难的尝试。自上个世纪六十年代以来，俄勒冈大学就是研究模式动物斑马鱼的顶级研究机构。Guillemin教授早在15年前就建立了培育无菌斑马鱼的技术和方法，这使得她们可以在斑马鱼里研究肠道微生物与任何疾病之间的关系。▲斑马鱼她们在开始研究之前做的第一件事就是，再次确认肠道微生物与糖尿病之间的确存在关系。课题的领导者Jennifer Hampton Hill首先比较了肠道无菌斑马鱼和有菌斑马鱼在受精6天之内胰岛里的β细胞情况。Hill发现，与正常的斑马鱼相比，肠道无菌斑马鱼的β细胞占据的面积明显小很多。再测测肠道无菌斑马鱼的「血糖」，发现显着高于肠道有菌斑马鱼。这就说明，之前的研究都是没啥问题的，Hill可以开始深入的研究了。▲CV：正常斑马鱼的β细胞生长状况（绿色）；GF：肠道无菌斑马鱼的β细胞生长状况（绿色）。暗示肠道微生物在斑马鱼的β细胞生长过程中起到重要作用。接下来要怎么办呢？其实很简单，就是把正常斑马鱼肠道的微生物一种一种的放回到无菌斑马鱼肠道里，再看看哪种肠道微生物加进去之后，斑马鱼的β细胞可以恢复到正常水平。记得上海交通大学的赵立平教授曾经讲过，研究微生物与疾病之间的关系，我们必须得一种一种来。肠道里的微生物种类可是成百上千的啊，要保证全程无污染的弄到小鱼的肠道里。所以说这是一个非常艰难的工作，但是为了解释现象背后的原因，Hill也只能拼了。最后，功夫不负有心人，Hill真的从斑马鱼的肠道微生物里找到了三种气单胞菌属(Aeromonas)细菌和一种希瓦氏菌属(Shewanella)细菌，这四种细菌可以让无菌斑马鱼的β细胞恢复到正常斑马鱼的水平。如此看来，肠道里的确有操纵β细胞生长的特殊微生物。▲Jennifer Hampton Hill在做实验那它们是如何在肠道里遥控远在胰腺的β细胞的呢？Hill又在体外培养那三种气单胞菌属细菌，用它们的培养液处理肠道无菌的斑马鱼，发现这些幼崽的β细胞一样可以恢复到正常水平。如此看来，就是这些气单胞菌在肠道里产生了特殊的物质，这些物质通过体液循环跑到胰腺了。那这种物质是蛋白质还是无生物活性的化学物质？于是Hill又干掉了细菌培养液中的所有蛋白质，这回发现肠道无菌斑马鱼的β细胞终于不能恢复到正常水平了。如此看来，是肠道微生物分泌的一种蛋白质在起作用。但是细菌往环境中释放的蛋白质又是成百上千种，到底是哪种？好在微生物从体内往外分泌蛋白质的通道只有那么几个。于是，Hill又将一种气单胞菌属细菌A. veronii最主要的那个分泌蛋白质的大门给堵上了。这样一来，就有很多蛋白质不能分泌到外界环境中了。Hill再用这种气单胞菌属的细菌培养液处理肠道无菌的斑马鱼，发现斑马鱼的β细胞还是可以恢复到正常水平。这就表明，促进β细胞分裂的蛋白可以通过其他的通道出来，这一下又大大缩小了搜寻范围。剩下的真是没有更好的办法细分了。于是Hill采用了化学和物理方法，最终将范围缩小到了163种蛋白质，并确定了它们的蛋白序列。最终通过层层筛选，她最终找到了一个含261个氨基酸的蛋白质，这个蛋白质可以使肠道无菌斑马鱼的β细胞恢复到正常水平，她把这个蛋白质叫做BefA。当Hill把气单胞菌细菌的BefA基因去掉之后，这种细菌就丧失了促进β细胞分裂的能力。这再次证明，BefA蛋白是A. veronii唯一可以促进β细胞扩大地盘的物质。后来，Hill证明，这种扩大地盘的现象实际上是β细胞变多了。这就意味着，BefA蛋白在达到胰岛之后，是促进了β细胞的分裂。这对于糖尿病患者无疑是个好消息。▲CV：正常斑马鱼的β细胞生长状况（绿色）；GF：肠道无菌斑马鱼的β细胞生长状况（绿色）10165（BefA蛋白代号）：加入BefA蛋白之后，肠道无菌斑马鱼β细胞生长状况似乎优于正常斑马鱼但是这个实验毕竟是在斑马鱼体内完成的，在人体会有类似的效果吗？Guillemin教授团队目前还没有在人体内开展相关的研究，但是她们做了一个有指导意义的研究。她们在人肠道内找到了几种肠道微生物，它们可以分泌跟BefA蛋白很像的蛋白，只是相似度不一样。于是Hill用相似度最高和最低的两种蛋白处理肠道无菌的斑马鱼，惊喜地发现，斑马鱼的β细胞同样可以恢复到正常水平。这暗示着，在人体内极有可能存在类似的现象。目前Guillemin教授团队目正在开展深度研究。「我们这个研究表明，动物的生长发育可能是依赖于肠道微生物释放出的信号，」Hill说，「看到肠道微生物在葡糖糖稳定中起到如此重要的作用，实在是太兴奋了。」「肠道微生物是胰腺发育的信号来源，真真是一个很新鲜的观点，」Guillemin教授说，「我们花了很多年分离和研究斑马鱼的肠道菌群，我们的努力没有白费，我们发现了可以调节β细胞生长的BefA蛋白。」▲I型糖尿病新生儿的肠道微生物种类（红色）较少对于I型糖尿病患者而言，他们发病时间极早，那个时候的β细胞非常脆弱，容易受到攻击，如果相应的微生物再缺失，会使小患者的病情雪上加霜。I型糖尿病的发病因素包括基因和环境，其中环境因素就包括肠道微生物。研究表明，人类的β细胞一般在5岁左右进入休眠期，停止分裂生长。因此，在新生儿早期使用抗生素，有可能加大新生儿患I型糖尿病的风险。Guillemin教授表示，她们目前需要与研究I型糖尿病的研究人员合作，以研究开发BefA分子作为潜在的治疗方法。目前已经有很多公司在研发微生物移植治疗疾病的口服胶囊，希望治疗糖尿病有朝一日也可以用上类似产品。 

科学家解析酶分子引起癌细胞DNA突变的结构机制 有助开发靶向治疗最近，来自明尼苏达大学的研究人员报道了DNA与人类APOBEC3A和APOBEC3B这两种酶形成的分子复合体的高分辨率图像。该研究有助于了解这两种酶如何促进肿瘤进化，如何导致疾病进一步恶化。相关研究结果在线发表在国际学术期刊Nature Structural and Molecular Biology上。APOBEC家族蛋白是乳腺癌，肺癌，头颈癌等多种癌症类型中DNA突变的主要来源。因此了解APOBEC家族的酶分子如何引起DNA突变有助于开发更有效的治疗方法。“在正常情况下这些酶能够帮助我们清除病毒感染，但是这些酶会在癌细胞内发生失调引起我们自己基因组DNA发生突变。产生的DNA突变会促进肿瘤进化，导致不良临床结果的发生，比如药物抵抗和转移。”Reuben Harris博士这样说道。在这项研究中研究人员使用了X射线结晶学方法，这种方法利用高能X射线使分子的原子细节可视化，他们观察到一种独特的U型DNA构象，也确定了酶分子上靶向胞嘧啶的口袋结构，临近的胸腺嘧啶碱基也说明了酶分子与肿瘤DNA相互作用之后形成的特定突变特征。“我们的晶体结构和进一步的生化实验结果表明APOBEC3A和APOBEC3B能够与它们的DNA底物结合在一起。这些结构数据说明DNA通过形成一种急剧的弯曲构象使核苷酸暴露出来。我们的这些发现非常有意义，解释了许多之前在该家族蛋白上观察到的现象。”Hideki Aihara教授这样说道。这种DNA结合机制提示了应该如何阻断癌细胞内的酶活性进而延缓肿瘤进化速度。抑制APOBEC活性能够让目前所使用的抗癌治疗方法变得更有效。

Nur77是淋巴细胞抗原特异性激活的分子标志物抗原特异性T细胞与B细胞的识别对于人类的自身免疫疾病，癌症，器官移植等疾病的早期发病的理解以及开发对应的治疗方案都是十分重要的。炎症组织浸润的淋巴细胞类型是多样的，它们的激活不仅引来直接的抗原刺激，还需要I型干扰素，白细胞介素等细胞因子的参与。长期以来，大量研究表明细胞因子对于促进慢性的炎症反应具有重要的作用，而一些核受体参与了这些信号的胞内传递过程。其中，Nur77能够促进细胞的存活以及炎症反应的发生。Nur77的表达可以作为特异性的TCR信号的报告基因，而此前的研究利用转入外源的Nur77-GFP系统成功地在小鼠模型中证明了Nur77相应抗原刺激的时空表达特征。为了进一步理解人类T/B细胞中内源的Nur77能否同样响应抗原刺激而提高表达水平，来自UCSF的Arthur Weiss等人进行了相关研究，结果发表在最近一期的《Journal of Immunology》杂志上。首先，作者通过体外刺激人源的T细胞系Jurkat，并检测了下游Nur77的表达情况。结果显示，CD3的激活的确能够上调Nur77的表达水平，而这一上调的水平存在抗原的剂量依赖性。之后，作者又利用人源的外周血单核细胞验证了上述结果。接下来，作者利用天然的抗原SEE进行了体外刺激，结果显示，SEE同样能够诱导T细胞产生Nur77的表达。然而，Nur77的表达并不会受到炎性信号的影响。作者通过实验表明，LPS，CpG等炎性刺激分子并不会上调Nur77的表达水平。另外，作者又通过体外实验证明了在B细胞中Nur77同样会受到抗原刺激信号的调节。最后，作者通过小分子抑制实验发现：T细胞激活之后下游的mTOR1/2介导了Nur77的激活，而MEK-NFAT信号通路以及PKC等小分子抑制剂却没有明显地影响Nur77的激活。对于B细胞来讲，Nur77的激活部分地受到PKC，MEK，Akt,1MTORC1/2等信号分子的调节。

人类是如何“两次”失去尾巴的？人类似乎并不适合拥有尾巴，因为一项新研究表明我们的祖先居然两度失去了尾巴，而不仅仅是失去了一次。这项研究发表在《Current Biology》杂志上，不仅解释了人类为什么不能像狗一样摇尾巴，还揭示了我们只有一个尾椎骨以及生命开始初期的尾巴逐渐消失的原因。“肉质尾巴可以追溯到脊椎动物最早的祖先，同时只能在最初期的胚胎中找到，因此要在不造成其他问题的情况下完全去掉它们非常困难。”作者Lauren Sallan告诉Seeker。“因此，鱼和人类只能阻止它的生长，用一个埋在体内的像鲸鱼腿一样的遗迹骨替代它。”这种遗迹骨的起源可以追溯到鱼身上，为了研究这个问题，宾夕法尼亚大学地球与环境科学系的副教授Sallan分析了3.5亿年前的Aetheretmon鱼苗的化石，这种鱼同时具有尾鳍和肉质尾巴，二者紧挨在一起。Sallan发现这两个结构居然是完全分开的，通过将Aetheretmon的鱼苗与今天的鱼苗对比，她发现虽然鱼尾和鱼鳍紧挨着生长出来，但是它们却是完全独立生长的。这个发现颠覆了至少两个多世纪以来的科学观念：现在的鱼鳍仅仅是简单的接在一种与陆生动物相似的尾骨末端的！两个尾巴的分离表明它们的进化路径不相同，鱼失去了肉质的尾巴，留下了灵活的鱼鳍以提高它们的游泳能力。Sallan解释道：“只留下背鳍让它们可以更灵活地运动，而肉质的尾巴则会扰乱它们的运动。”而逐渐进化成半水生最终进化成陆生动物的鱼则失去了灵活的背鳍，留下了肉质的尾巴，随着时间推移这条尾巴就变成了我们常见的狗、猫、牛及许多其他动物的样子。成年类人猿包括人类祖先则进一步失去了尾巴，Sallan解释道：“失去残余的肉质尾巴使人类祖先更容易直立行走，就像鱼一样，胚胎尾骨的残余部分被埋在了我们后背，即尾骨或尾椎骨，这主要是由于促进它像手脚一样生长的分子机制的丢失，因此人类和鱼的胚胎具有相似的控制尾巴形成的机制。”尽管早期类人猿的化石记录并不丰富，但是由于类人猿也没有尾巴，她认为我们的灵长类祖先在他们开始双腿直立行之时就失去了尾巴。而经常直立行走的猴子也会失去尾巴，这也进一步证明了尾巴会在直立行走的过程中消失。

人造血技术迈上新台阶，10年内可造福人类人造血中红细胞的大小只有人类红细胞的百分之二，可以在室温下干燥储存，呈粉末状。Allan Doctor博士表示，“基本上人造血液看起来就像辣椒粉一样”。人造血可以存放于IV塑料袋中，保质期长达一年或更久。医护人员可以将其放置于救护车上，也可以装入背包里。要用的时候，注入无菌的水，混合，就可以使用了。人造血ErythroMe仿造人体红细胞的结构功能，携带运输氧气，并在血液循环的过程中缓慢释放氧气。在老鼠身上做的实验中，研究者们用人造血替换了老鼠身上大量的血液。结果证明，人造细胞能够像动物自身的细胞一样搭载运输氧气、给全身的组织供氧。进一步的实验还证明，人造血能复活失血40%的休克动物。在平时的事故中可能会出现这样的情况，伤员刚开始还有生命迹象，却在被送往医院的路上因血液循环休克而失去生命。这是因为人体外部出血或内部出血都会导致大量失血，从而导致身体组织不能获得足够的氧气，开始衰亡。人造血虽然不能完全替代人类血液，却可以让他们得到及时的输血，为他们争取时间让他们能坚持到医院接受治疗。Allan Doctor博士表示，“目前，世界上还没有哪一种简单可行的方法能给医院外的大部分伤员送去及时的血液。延迟救援会明显带来不良结果。我们的目标就是能让伤员得到及时、有效的治疗。”此前的人造血会出现氧气释放不良、不能适应机体pH值的问题，但是ErythroMe已经克服了这些困难。除此之外，该人造血还能避免血管收缩导致的心脏病或是中风问题。

elisa试剂盒实验准备分析保温常识Elisa试剂盒实验准备分析保温常识       在 ELISA 中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA 中似不恰当。ELISA 属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。elisa试剂盒以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA 反应总是需要一定时间的温育。       elisa试剂盒温育常采用的温度有 43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELI SA 方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2 小时，产物的生成可达顶峰。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在 43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中，以形成最多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA 中一般不予采用。       elisa试剂盒保温的方式除有的 ELISA 仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA 板置于水浴箱中，ELISA 板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA 板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最后将ELISA 板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指 20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA 板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。        一个良好的实验操作环境可以保证ELISA试剂盒测定结果更准确。实验操作的严谨性与实验操作规范密不可分，未使用的试剂应储存于2-8℃，使用时应回温到室温（20-25℃）。切忌不同批次的试剂混合使用，要经常检查酶标仪和微量移液器的精度盒准备度，这样才能保证实验的可操作性。

ELISA试剂盒实验中误差的解决办法但是您知道吗？大鼠ELISA试剂盒如果您在实验过程中犯了以下几个小错误的话也会出现实验误差的哦！  1.做实验时少说话，防止唾液掉进酶标条中。  2.加入一抗二抗需要放入37°。  3.如果同时做多个板子，多个板子别罗一起；尽量少用排枪。  4.加样时，由低浓度向高浓度加，这样减少跳孔的几率。  5.勤换枪头。  一 移液器的使用，加样（抗体）等需要准确定量的试剂时不使用排枪，经验证明排枪很不准确，极易跳孔，不要图便宜买低档的tips 因为ELISA不但会放大被检测的目的蛋白，也会放大非特异结合的杂质蛋白。  二 倍比稀释样品时，稀释倍数最好要小于10。  三 所有的装跟大鼠ELISA试剂盒相关试剂的容器，玻璃制品的要干烤过或者使用一次性的树脂容器。除了以上几点之外，以下的小细节也会帮您减少实验误差：