工程师带你了解SepaBean® machine专题讲座

DAD检测器

一台快速液相制备色谱仪，通常由系统泵、进样器、分离柱、检测器以及控制系统这几个模块组成。其中，检测器模块相当于人的眼睛，对于整个系统的分离纯化性能至关重要。今天这篇短文就主要为大家介绍来自三泰科技的快速液相制备色谱仪SepaBean® machine系统里所采用的检测器模块。

在液相色谱仪中，常用的检测器类型包括：紫外/可见光检测器（UV-Vis）、光电二极管阵列检测器（Diode Array Detector，DAD）、荧光检测器（Fluorescence Detector，FD）、示差折光检测器（Refractive Index Detector，RID）、蒸发光散射检测器（Evaporative Light Scattering Detector，ELSD）以及质谱检测器（Mass Spectrometry，MS）等。在三泰科技的SepaBean®machine系统中采用了DAD检测器（如图1所示），与传统的紫外检测器相比，其最大的特点就是可以同时检测所有波长的吸收情况，从而得到较全的光谱信息，对纯度判别、检测波长选择都有重要的影响。

图1. 二极管阵列检测器检测原理示意图。

如图1所示，光源发出的连续光经过狭缝后，通过流通池，再经过全息光栅色散成单色光照射到光电检测元件上进行检测，由于经色谱柱流出样品组分变化（通常不同结构化合物对入射光吸收存在差别），照射到光电检测器上的各个波长的光强会有区别，因此我们可以看到各个大小不一的谱峰。

那么，DAD检测器在应用于实际样品的分离纯化中有哪些优势呢？我们总结了下列几点：

? 提供化合物丰富的光谱信息——如同拥有一台紫外分光光度计。

倘若用户对自己所分离的样品足够了解，便可根据目标分子的结构信息大致判定当前流出组分是否为目标结构。

? 提供最佳检测波长，增强检测灵敏度——减少样品的损失。

当采用自动收集器进行样品收集时，系统根据预设吸光度值进行收集，当遇到某些吸收弱的化合物或者进样量低而吸光度较低时，通过选择更佳的吸收波长能够有效减少样品的损失。

注意：进行样品分离纯化实验时，并不总是选择样品的最大吸收波长，我们要根据样品量选择合适的吸收波长。当进样量很小时，我们选择吸收较大的波长；当样品量较大的时候，为了防止吸收饱和，我们可以选择吸收较低的波长，这样更有助于收集样品。

? 提供样品纯度的判断依据——使实验结果更精准可靠。

分离样品时，当出现两种样品洗脱时间相似，样品洗脱峰发生重叠或交叉的情况时，依据洗脱组分前后所有波长光谱吸收变化，可大致判定该组分是否为单一组分或混合组分。

此外，我们还可以通过同一化合物特定波长吸收比相同的原则对洗脱组分的纯度进行判别。

    下面就以某样品的分离纯化实例对DAD检测器的全波段扫描功能进行进一步的介绍。

图2. 第一次实验中某样品的分离图谱及洗脱峰1的全波长吸收图谱。

图3. 第二次实验中某样品的分离图谱及洗脱峰的全波长吸收图谱。

以某混合物样品分别进行两次分离纯化实验，两次实验中所用洗脱条件有所不同，样品的分离图谱如图2和图3所示。由于两次实验中所用样品完全相同，通过如下几点简单判断，我们就可以大致得出第二次实验时样品中的两个组分被一起洗脱下来了：

1. 目标组分的最大吸收波长：一般情况下同一组分最大吸收波长是比较固定的，如图2中样品组分的最大吸收波长为232nm（以红色椭圆标出），图3中样品组分的最大吸收波长为253nm（同样以红色椭圆标出），两次最大吸收的变化一般可以认为是由于不同样品混合在一起被共同洗脱下来。

2. 特征吸收光谱的差异：同一样品由于进样量的区别，在整体吸收强弱上会有区别，但是具体特征不会变化。如图2和图3中蓝色椭圆标记的位置，在图3中该样品在600nm处有明显吸收，这也表明第二次分离实验中洗脱组分的纯度不高。

3. 特征吸收波长的吸收数值之比：对于某一特定物质，其在不同特征吸收波长处的吸收比值一般是比较固定的。如图2中组分1的两个特征吸收波长（232，352nm）下的吸收数值之比约为2.0，而图3中组分1的同样两个特征细化波长的吸收数值之比约为6.1，说明这两次实验中的洗脱组分1不是同一物质，结合图2和图3的分离图谱，可以判断第二次分离实验中组分1的纯度较低。

以上简单介绍了如何利用DAD检测器自带的全波段扫描功能帮助我们判断洗脱组分的纯度，三泰科技的研发人员正在开发更多实用的功能，敬请期待。同时，对于没有紫外或可见光吸收的样品的分离纯化，如糖类、药物、脂类、聚合物、营业滋补品、未衍生脂肪酸类和氨基酸以及组合分子库等，三泰科技正在开发蒸发光散射检测模块（ELSD），近期即将推向市场，为广大客户提供更加完善的分离纯化解决方案。

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