Princeton PSI Clone PCR ST (single tube)试剂盒

PSIΨClone PCR ST (single tube)试剂盒

快速、清洁、成本低、效率高
PSIΨClone PCR ST (single tube)试剂盒是一种用于纯化PCR反应扩增产物的试剂盒
PSIΨClone PCR ST（单管）试剂盒以便利的单管离心形式为研究者提供了一种快速处理PCR反应产物的方法。运用这种方法快速获得的高产量、高纯度的DNA可直接应用于其它分子生物学研究。
PCR反应得到的DNA片断（从100bp到10kb）可以与试剂盒中提供的离心管中的膜结合。随后经过清洗步骤除去残余的引物、核苷酸、酶和盐类。随后可以用低盐缓冲液把DNA洗脱下来，DNA的浓度较高（见表1）可不作任何处理直接应用于进一步的研究。
PCR扩增反应产物中残余的引物、核苷酸、酶和盐类会影响分子研究（如克隆、测序等）。PSIΨClone PCR ST可以以简便的单管形式有效地去除这些残余的反应物。这些纯化的扩增产物可以直接用于测序或者亚克隆。
方便：
?? 12分钟之内处理完样品
?? 样品体积可以达到150ul
?? 可以使用很多实验室中常见的微型离心机

灵活：
?? 对于标准的和更小的片断一样能处理好
?? 纯化出的扩增产物可以直接用于测序和亚克隆
高效：
?? 极好地回收大于100bp的片断
?? 有效地去除引物、盐类、核苷酸和蛋白
?? 高浓度回收DNA
其它必须的材料或仪器：
95％的乙醇或者纯乙醇、离心机。

试剂盒的组分及其制备（见后页的储存条件）
PCR离心管：所提供的离心管可直接使用。
结合缓冲液：这种溶液在低于22℃时会产生结晶。如果存在结晶，则将其加热至50℃融解。
清洗缓冲液：所提供的清洗缓冲液是高浓度的，使用前需用乙醇将其稀释至乙醇终浓度为75-80%。请参见上面的说明。
洗脱缓冲液：可直接使用。
清洗管：所提供的清洗管用于结合和清洗步骤。
样品收集管：所提供的管用于最后一步洗脱时。
PSI Clone PCR DNA纯化试剂盒所提供的试剂足以满足对标准的PCR反应进行75次DNA分离的需要。
操作流程：
1. 清洗缓冲液的浓溶液（＃2）使用之前加入48ml乙醇（95-100%）稀释。
2. 1体积的PCR反应物1,2中加入1体积的PCR结合缓冲液1,2，震荡充分混匀。
3. 将一个PCR柱置于一个2ml的清洗管中，将DNA混合
4. 物加到PCR柱中过滤，8000g下离心30-60秒。弃去流出的液体。
5. PCR柱中加入400ul PCR清洗缓冲液（已用乙醇稀释），8000g离心30-60秒。弃去流出的液体。
6. 重复步骤3一次。保证膜完全控干。 a.（可选）在第4步中将PCR柱重新离心倒干残余的清洗缓冲液。
7. 加入50-65ul PCR洗脱缓冲液，孵育2-5分钟，确保缓冲液浸入膜中。
8. 将PCR柱置于一个不含DNAase（高压灭菌）的收集管中，8000g离心30-60秒收集洗脱液。弃去PCR柱，保留洗脱液。
注释：
1. 使用这一流程的扩增产物的范围在150bp-10kb。

2. 如果片断处于 70bp-150bp之间，需要修改流程的第1步。用5体积的PCR结合缓冲液加到1体积的PCR反应产物中（表2）。另外结合缓冲液必须使用目录编号为PC-503的60ml装的结合缓冲液。

故障排除：
流程中的清洗步骤有问题时可能会导致片断的回收效率低。
1. 检查清洗缓冲液（＃2）中是否加入乙醇。
2. 在加入洗脱缓冲液之前完全控干离心管。

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