Princeton PSI Clone PCR 96试剂盒

PSIΨClone PCR 96试剂盒
一种用于纯化PCR反应扩增产物的试剂盒
适用于真空或离心的流程
这种PSIΨClone PCR 96试剂盒以方便的96孔板的形式为研究者提供了一种快速地处理PCR反应产物的方法。其流程可分为真空法和离心法。两种流程都可以快速地获得高产量、高纯度适用于分子生物学研究的DNA。
PCR反应中的DNA片断（从100bp到10kb），可以与试剂盒中的板上的膜结合。然后洗去残余的引物、核苷酸、酶和盐类。随后可以用低盐缓冲液把DNA洗脱下来，DNA的浓度较高可不作任何处理直接应用于进一步的研究。

PCR扩增反应产物中残余的引物、核苷酸、酶和盐类会影响分子研究（如克隆、测序等）。PSIΨClone PCR 96试剂盒可以以方便的96孔板的形式有效地去除这些残余的反应物。这些纯化的扩增产物可以直接用于测序或者亚克隆。
试剂盒的组分及其制备（参见后面的储存条件）
PCR 96 板：可以直接使用。
结合缓冲液：这种溶液在低于22℃时会产生结晶。如果存在结晶，则将其加热至50℃融解。
清洗缓冲液：所提供的清洗缓冲液是高浓度的，使用前需用乙醇将其稀释至乙醇终浓度为75-80%。具体说明请参见介绍流程的章节。
洗脱缓冲液：可直接使用。
收集板：使用真空法时所提供的板特异地将孔之间的距离减到了最小（可以用其它的板来代替）。
PSI Clone PCR 96 DNA纯化试剂盒所提供的试剂足以满足对标准的PCR反应进行96次DNA分离的需要。
使用真空叉管处理PCR反应的扩增产物
清洗缓冲液的浓溶液（Buffer ＃2）使用之前用乙醇稀释。如果是使用PCR 96单板试剂盒（Cat# PC-500），在清洗缓冲液的浓溶液试剂瓶中加入48ml乙醇。如果是使用PCR 96 4板试剂盒（Cat# PC-501），则取出12ml清洗缓冲液浓溶液于一空的试剂瓶中，并且加入48ml乙醇。处理每个板之前重复这一步骤。
板上未使用的孔必须用带子封住，以免在处理过程中真空泄漏。
操作流程：
1. 向PCR反应物中加入1体积的结合缓冲液（＃1）并混合均匀。
2. 将废弃的托盘放在真空叉管内。
3. 将PCR反应物和结合缓冲液的混合物加至平板上，开始抽真空直至所有样品穿过膜层。
4. 吸取200ul稀释的清洗缓冲液于每孔清洗板。抽真空直至所有的液体穿过膜。
5. 重复两次清洗的步骤，总共洗三次。
6. 真空条件下使板空干10分钟。
7. 把板从真空管套中取出，用纸吸去

8. 将PCR 96板放在真空叉管内，插入收集板，并且调节其高度使得PCR 96板滴下的液体正好落在收集板的孔内。
9. 每孔中央加入80ul洗脱缓冲液（＃3）。静止2分钟。抽真空以收集干净的PCR产物。如果需要增加产物的浓度，可以将洗脱缓冲液体积减至50ul。
利用离心法处理PCR反应的扩增产物
清洗缓冲液的浓溶液（Buffer ＃2）使用之前用乙醇稀释。如果是使用PCR 96单板试剂盒（Cat# PC-500），在清洗缓冲液的浓溶液试剂瓶中加入48ml乙醇。如果是使用PCR 96 384板试剂盒（Cat# PC-501），则取出12ml清洗缓冲液浓溶液于一空的试剂瓶中，并且加入48ml乙醇。处理每个板之前重复这一步骤。
操作流程：
1. 向PCR反应物中加入1体积的结合缓冲液（＃1）并混合均匀。
2. 将PCR反应物和结合缓冲液的混合物加至平板上。
3. 将一空的微平板（未提供）放在PCR 96板的下面以收集废液。用吊桶式转子750g离心2分钟。如果处理单个板时需要平衡。将废液板上的废液倒掉。
4. 吸取200ul稀释的清洗缓冲液于每孔清洗板。将废液板放在PCR 96板的下方，750g离心2分钟，将废液倒掉。
5. 再重复两次清洗的步骤，总共清洗三次。
6. 750g离心使板空干10分钟。
7. 吸去黏附在板底部的任何过剩的液体。
8. 将收集板放在PCR 96板的下方，每孔中央加入80ul洗脱缓冲液（＃3）。静止2分钟。750g离心3分钟收集干净的PCR产物。如果需要增加产物的浓度，可以将洗脱缓冲液体积减至50ul。

未提供的必需材料：
95％的乙醇或者无水乙醇
真空设备或者离心机
离心法时所需的收集废液的板
故障排除：
流程中的清洗步骤操作有误可能会导致片断的回收效率低。
?? 检查清洗缓冲液（＃2）中是否加入乙醇。
?? 清洗过程中要注意去除板底部多余的清洗缓冲液的液滴。
?? 在加入洗脱缓冲液之前一定要使板完全空干。

技术参数：

订货信息：