动物源食品中氯霉素检测的固相萃取方法
（polyclean x-hlb）

一、实验目的

本法为以polyclean x-hlb (60mg/3ml)柱开发的针对动物源食品(禽肉、畜肉和水产品)中氯霉素样本前处理净化方法，hplc法作为检测手段。polyclean x-hlb (60mg/3ml)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。

二、实验目标物
氯霉素(cas:56-75-7)

三、应用范围
本方法适用于动物源性食品(禽肉、畜肉和水产品)中残留药物的检测。

四、参考标准
《农业部1025号公告-21-2008动物源食品中氯霉素残留检测气相色谱法》

五、实验材料
nuanalyticalpolycleanx-hlb固相萃取柱60mg/3ml，w品牌hlb固相萃取柱60mg/3ml。

六、实验方法

1、样品待测溶液制备
取5±0.05g猪肉样品，于50ml离心管中，加入20    ml乙酸乙酯混合2min，4000   r/min离心15 min，取上清液于另一离心管中，再用20 ml乙酸乙酯重复提取残渣1次，合并两次提取液，并加入500   μl氨水，于45 ℃旋转蒸发近干，加入500  μl甲醇混合1min，加入10 ml4%nacl涡旋混匀10 s，加入10 ml正己烷摇匀20次，4000r/min离心5 min，弃去上层，再用10 ml正己烷脱脂一次，最后加入500 μl氨水混匀供上柱净化用。

2、活化
依次用2 ml甲醇和2 ml水活化。

3、上样和洗脱

取上述备用液重力作用下过柱依次用2 ml水、1 ml甲醇/乙腈/水/氨水(15:15:65:5, v/

v)淋洗上样柱并抽干，最后用2 ml 5%氨化甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。

4、重新溶解
收集洗脱液，于45℃氮气吹干，准确加入1.0 ml甲醇/水(4:6,v/v)溶液溶解残余物混匀，0.22 μm滤膜过滤，供hplc测定。

5、hplc条件
色谱柱：superlu c18 (250×4.6 mm，5 μm)
检测器：uv@278 nm
流动相：a:水           b:甲醇
洗脱方式：等度洗脱，a:b=60:40
柱温：30℃    
流速：1.0ml/min           
进样量：20μl

七、实验结果
1、添加水平为0.5 mg/kg猪肉基质中氯霉素(cap)的添加回收结果

表1   添加水平为 0.5 mg/kg 猪肉基质中氯霉素(cap)的添加回收结果

名称	回收率（%）			平均回收率（%）	rsd（%）
	1	2	3
氯霉素	92.6	89	87	89.5	3.2

    表 2    w 品牌同型号柱，添加水平为 0.5 mg/kg 猪肉基质中氯霉素(cap)的添加回收结果

名称	回收率（%）			平均回收率（%）
	1	2
氯霉素	90.8	91.4		91.1

2、添加水平为 0.5mg/kg 猪肉基质中氯霉素(cap)检测色谱图

1  添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(cap)检测色谱图