LaVision双光子显微镜-多线扫描双光子成像

2012-08-20 14:59

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资料摘要：

高空间分辨率和低的光损伤风险使得双光子激光扫描显微镜TPLSM成为生物功能成像的选择。但是，如神经钙离子调控等功能性动态研究通常也需要一个高的时间分辨率。目前，通过线扫描可以获取速度的提升，但是将结构的空间分辨率限制在一条轴上。为克服高空间分辨率和高时间分辨率间的空白，我们改进了TPLSM，使用一个多倍分光器来在样品中产生多个激光焦点。通过使用一个电子倍增相机检测这些焦点释放的荧光，它可以支持同时进行多条线扫描。除了多线扫描，高达64束的阵列也允许使用X-Y扫描模式去以高的帧速获取整幅图像。为估测多线扫描TPLSM在功能性原位成像中的应用，监测了苍蝇大脑中的视觉运动神经元中的钙离子信号。以分枝状轴突和棘突状结构的测量为例展示了我们的方法对于从不同细胞位置同时获取信号的能力。钙离子动态依赖于分支大小，但是“棘突”与他们的“母轴突”并没有系统性的区别。我们设备的空间分辨率与激光共聚焦显微镜进行了严格比较并通过运行成像和点扫描模式直接评估图像检测过程中释放光散射的负面效应。

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