【飞诺美色谱】1-氨基-4-甲基哌嗪的分析方法

概述

本实验以0.1%甲酸水和甲醇为流动相，使用Kinetex HILIC（2.1×100mm 2.6μm）色谱柱对1-氨基-4-甲基哌嗪进行测试，回收率106.8%，可达到要求。

关键词

Kinetex HILIC；1-氨基-4-甲基哌嗪

化合物信息

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX API 5500+)，配 有电喷雾离子源(ESI)；

3.1.2试剂材料

实验用水为屈臣氏水；甲醇、甲酸均为色谱纯 试剂。

3.1.3样品

1. 1-氨基-4-甲基哌嗪：液态，由客户提供。精 确吸取1mg至棕色样品瓶中，加入1mL甲醇配制 成母液（1mg/mL）；

2. 利福平：固态，有客户提供。精确称取2mg 至棕色样品瓶中，加入1mL甲醇配制成母液 （2mg/mL）；

3. 1-氨基-4-甲基哌嗪中间液：精密吸取母液1 微升用甲醇配制成1mL中间液（1 µg/mL）；

4. 混合上机溶液：精密吸取1-氨基-4-甲基哌嗪 中间液60µL及利福平母液500µL，用甲醇配制成 1mL上机液（其中1-氨基-4-甲基哌嗪 60ng/mL，利福平1mg/mL）。

3.2仪器检测条件

3.2.1色谱条件

色谱柱：Kinetex HILIC 2.1×100mm 2.6µm；

P/N：00D-4461-AN

流动相：

A：0.1%甲酸水；

B：甲醇

流 速：0.40 mL/min；

柱 温：30 ℃；

进样量：2 μL；

切换阀：0.1→B；5→A；12→B

梯度程序见表2：

3.2.2质谱条件

离子源类型：电喷雾离子源（ESI）

扫描方式：多反应监测正离子模式（MRM+）

喷雾针电压：5500 V

离子源温度：550 ℃

加热器（GS1）：55 psi

辅助加热气（GS2）：55 psi

气帘气（CUR）：20 psi

碰撞气（CAD）：8 psi

为获得较好的稳定和灵敏度，各化合物监测离 子对的去簇电压（DP）和碰撞电压（CE），目 标化合物定量离子对参数经过系统优化，优化 信息参见表3。

3.3结果

3.4实验谱图

讨论

本实验筛选了 Gemini NX C18、Kinetex C18、 Kinetex F5、Kinetex EVO C18、Luna C18(2)、Venusil C18 等反向色谱柱，1-氨基-4-甲基哌嗪均在死时间 出峰；后尝试 Hilic 模式，筛选了 Luna HILIC、Luna NH2 和 Kinetex HILIC，只有 Kinetex HILIC 柱对 1-氨 基-4-甲基哌嗪有保留，并且甲酸水的条件下，峰型 更尖锐，更好看。所以以 0.1%甲酸水、甲醇为流动 相，Hilic 模式下，利用 Kinetex HILIC 柱对 1-氨基- 4-甲基哌嗪进行有效保留与分离，回收率达到 106.8%。

结论

本实验以0.1%甲酸水和甲醇为流动相，使用Kinetex HILIC（2.1×100mm 2.6μm）色谱柱对1-氨基-4-甲基哌 嗪进行测试，回收率106.8%，可达到要求。