【飞诺美色谱】使用 Biozen dSEC-7 体积排阻色谱柱筛选 腺病毒 (AAV) 血清型

概述

由于 AAV 温和的免疫反应以及可以将有效载荷递送至广泛的宿主细胞 的能力，AAV 正在成为基因治疗领域的越来越受关注的一类载体。由于 包裹 ssDNA 的衣壳由 60 个拷贝的衣壳蛋白组成，且病毒颗粒较大(约 250 Å)，因此在开发和制备过程中如何减少聚集体及其他工艺相关杂质 是腺病毒相关分析中独特的挑战。

聚集体杂质会影响药物剂量和免疫原性，并且由于生物分布的改变影 响药效。因此聚集体测试能够准确地评估药物的安全性和有效性，是 一个关键的质量属性(Critical Quality Attribute，CQA)。在用于测定 AAV 聚集体含量水平的首选技术中，首选的是体积排阻色谱法(SEC)，因为 该方法具有高度的可重复性和精确性。然而，使用孔径通常 ≤300Å 的 标准 SEC 色谱柱难以分离 AAV 聚集体，所以 AAV 的 SEC 方法一直 面临挑战。

评估不同的 AAV 血清型对于优化用于基因治疗的生物药的设计和药效 是至关重要的。不同血清型的 AAV 在组织和细胞的趋向性以及免疫原 性上表现不同。因此，彻底地分析并选择最适合的血清型对于实现期 望的治疗结果、尽量降低治疗风险是非常必要的。本文介绍了 Biozen dSEC-7 色谱柱能够在 8 分钟之内，可靠地将不同血清型的 AAV 样品 中单体和二聚体分离的能力。700 Å 大孔二氧化硅颗粒，以及专利的、可 减少非特异性相互作用的亲水性二醇基表面键合相，是这一强大分离 能力的基础。

SEC 放法条件

色谱柱: Biozen 3 μm dSEC-7

规格: 150 x 4.6 mm

货号: 00F-4789-E0

流动相: 20 mM磷酸钠，pH 6.6 + 350 mM 氯化钾

流速: 350 μL/min (等度)

进样量: 2 μL

温度: 25℃

检测器: FLR - Ex 280 nm, Em 350 nm

系统: Waters ACQUITY H-Class

进样频率: 40 Hz

样品:

1.AAV2-CAG-GFP, 2E13 vg/mL (AAV2)

2.AAV5-CMV-GFP, 2E13 vg/mL (AAV5)

3.AAV8-CMV-GFP, 2E13 vg/mL (AAV8)

4.AAV9-CMV-GFP, 2E13 vg/mL (AAV9)