【飞诺美色谱】ADC药物(DS-8201)的电荷异质性分析方法

概述

众所周知，单克降抗体异构体可能来自于抗体分子

复杂的生物合成途径，如细胞系及培养工艺，也可能来

自于纯化、制剂等制造过程以及贮存过程的任何阶段。

其中由于抗体分子所带电荷差异造成的异质性称为电荷

异构体，一般分为酸性异构体和碱性异构体，产生原因

主要与翻译后修饰有关。由于这些异构体可能会影响抗

体的稳定性、药效、免疫原性或药代动力学。因此在生

物类似物开发过程中应尽可能控制异构体含量与原研药

保持一致。

Trastuzumab deruxtecan（DS-8201；ENHERTU®)

是由第一三共和阿斯利康合作开发的新型HER2靶向

ADC。Deruxtecan是毒性药物DX-8951 的衍生物 (Dxd)

和连接子马来酰亚胺-GGFG 肽的通过偶联物。

本应用尝试使用Biozen 的WCX色谱柱对曲妥珠单

抗以及ADC药物 DS-8201 进行电荷异质体的分析。

关键词

曲妥珠；DS-8201；WCX；Biozen WCX；电荷异质体

化合物信息

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

Thermo U3000高效液相色谱仪

3.1.2试剂材料

磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠为分析纯，

乙腈为色谱纯，屈臣氏蒸馏水

3.1.3样品

Trastuzumab- deruxtecan，平均DAR值为4。用

纯水稀释为浓度为1.0 mg/mL;

曲妥珠单抗购自MCE。用纯水稀释为浓度为1.0

mg/mL。

3.2色谱条件

色谱柱：Biozen WCX（6um， 250*4.6mm）；

P/N: 00G-4777-E0；

流动相A相：20mM磷酸钠缓冲液pH 7.4；

流动相B相：20mM磷酸钠缓冲液+250mM氯化

钠 pH 7.4；

流动相C相：乙腈

流 速：0.6 mL/min；

柱 温：30 ℃；

波 长：214nm；

进样量：20 μL

梯度程序见表2：

3.3结果与讨论

对于曲妥珠单抗，电荷异质体来源于蛋白的翻

译后修饰，如末端的改变，糖基化，脱酰胺，异构

化，氧化，聚合等都可能会引起抗体表面的电荷该

改变。一般认为等电点差异大于1的蛋白在组织内分

布和代谢动力学方面会产生比较大的差异。而酸性

异质体会改变抗体在体内的代谢和清除速率，对药

效不利。图1为曲妥珠单抗的离子交换色谱图，其中

的酸性杂可以很好的和主峰分离。相比之下，ADC的

应用编号：AP10660Confidential - Company Proprietary

离子交换谱图就复杂的多。DS-8201作为一种半胱氨

酸偶联的ADC相较于赖氨酸偶联其电荷异质性已经

大大降低。尽管如此，其结果还是比较复杂，参见

图2。

结论

本应用使用了Biozen WCX色谱柱对DS-8201和

曲妥珠单抗的电荷异质体进行分析。这款色谱柱使

用6um的单分散微球填料，从而色谱峰形非常的尖锐，

曲妥珠单抗主峰的50%半峰宽仅为0.149min。微球表

面将线性聚合羧酸的键合相和颗粒本身进行交联，

在采用盐梯度洗脱的情况下，酸性变异体和可以主

峰良好的分离。对于DS-8201来说，由于本身存在的

异质性情况复杂，对于分离结果还有待结合多种手

段进一步进行分析确认。