【飞诺美色谱】木糖、果糖、阿拉伯糖、葡萄糖的分析方法

概述

本实验为自建方法。使用Cleanert PEP-2固相萃取柱净

化技术结合示差的检测方法对来样蛋白调味粉基质中木

糖、果糖、阿拉伯糖及葡萄糖等进行了测试。样品经水

提取，Cleanert PEP-2固相萃取柱净化，Venusil Honey

NH2（4.6×250mm 5μm）液相色谱柱进行检测，采用

外标法定量。结果表明，空白添加水平的相对回收率在

90%~120%，能够满足检测要求。

关键词

木糖；果糖；阿拉伯糖；葡萄糖；Venusil Honey NH2

化合物信息

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

超高效液相色谱仪(Thermo Ultimate 3000)，配

有示差检测器；

3.1.2试剂材料

Cleanert PEP-2：150mg 6ml/30pk

Cat：PE1506-2

微孔滤膜：0.22 μm MCE滤膜

实验用水为屈臣氏水；乙腈为色谱纯试剂；乙

酸锌、亚铁氰化钾为分析纯。

3.1.3标准溶液配制

1.标品：由客户提供。

2.标准工作液：称量0.50g各种糖标品于50mL离

心管中，加40mL水配置成浓度为12.5mg/mL标

准工作液。

3.1.4溶液配制

1. 22%乙酸锌：称取11g乙酸锌于50mL容量瓶

中，加1.5mL冰醋酸，用水配置到刻线。

2. 10.6%亚铁氰化钾：称取5.3g亚铁氰化钾于

50mL容量瓶中，用水配置到刻线。

3.2样品前处理方法

称量：称取样品1 g置于15mL刻度离心管中；

提取：加入5mL水，混匀溶解，再加入0.5mL乙

酸锌溶液和0.5mL亚铁氰化钾溶液，涡旋混匀

1min，超声30min，后8000 r/min离心5 min。

（空白用水代替，吸取1mL标准工作液加入5mL

水，混匀后按照提取步骤操作）

活化：Cleanert PEP-2小柱使用前依次用6mL乙

腈、6mL水活化；

收集：上清液全部上样，接收流出液，加0.5mL

水淋洗小柱，同样接收淋洗流出液，负压抽干

小柱，用水定容至6.5mL。

过滤：定容液过0.22μm MCE 水相滤膜，上机待

测。

3.3仪器检测条件

3.3.1色谱条件

色谱柱：Venusil Honey NH2 4.6×250mm

5μm；

CAT No：VN852505-H

流动相：乙腈：水=75:25；

流 速：1.0 mL/min；

柱 温：60 ℃；

进样量：10 μL；

等度洗脱

3.4结果与讨论

3.4.1标准曲线的制备

本 实 验 为 单 点 定 量 。 精 密 吸 取标 准 工 作 液

(12.5mg/mL) 800 μL 于棕色进样小瓶中，加水至1mL

既得浓度为10mg/mL，待上机。

3.4.2方法准确度

本实验选择1.923mg/mL加标，计算回收率结

果，由表2可得，4种糖空白添加浓度的回收率在

90%~120%；本实验色谱图见图1~图6。本案例数据

仅供参考不具备法律效力。

3.4.3讨论

本实验试验了不同固相萃取柱，结果发现C18填

料的小柱无论填料量大小回收均在70%以下，不适合

作为本实验的净化小柱，而PEP小柱回收率在60%~90%

之间，不符合要求。而PEP-2 150mg小柱空白加标回

收率在 90%~120% ， 符 合 要 求 。 所 以 选 择 PEP-2

150mg小柱来做为净化柱。

同时实验验证了不同水相滤膜PEFE/L、MCE、

PES、RC及有机相滤膜NY对4种糖的吸附作用，实验

发现除RC滤膜有假阳性反应，其余滤膜均不吸附4种

糖。

3.5实验谱图

图5.样品2-1 RI图

结论

本实验为自建方法。使用Cleanert PEP-2固相萃取

柱净化技术结合示差的检测方法对来样蛋白调味粉基质

中木糖、果糖、阿拉伯糖及葡萄糖等进行了测试。样品

经水提取，Cleanert PEP-2固相萃取柱净化，Venusil

Honey NH2（4.6×250mm 5μm）液相色谱柱进行检测，

采用外标法定量。结果表明，空白添加水平的相对回收

率在90%~120%，能够满足检测要求。