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【飞诺美色谱】BiozenT™ Oligo色谱柱用于mRNA帽纯度分析
概述
为了改善mRNA的效率和稳定性，阻止5'核酸酶降解mRNA，现在已经创建了各种帽分子来维持珍贵mRNA序列的生物学稳定性。通过多种制剂形式将mRNA序列用于人体，包括脂质纳米颗粒（LNP）和腺相关病毒（AAV）。在Covid 19疫苗开发期间，很多mRNA的疫苗强调了这种新兴治疗方式。5'帽的多样性和完整性的分析表征对于分子稳定性和给药安全至关重要。在以下应用中，将1250个核苷酸的mRNA寡核苷酸链用RNase H酶消化，并进样到Biozen 2.6μm Oligo色谱柱中。我们以HPLC方法匹配高分辨率质谱法（HRMS），以区分多种帽子及其相对完整性。
图表1. mRNA帽纯度分析
LC条件
色谱柱：Biozen 2.6μm Oligo
规格：50x2.1mm
货号：00B-4790-AN
流动相：
A: 35mM HFIP+15mM DIEA水溶液
B: 35mM HFIP+15mM DIEA于甲醇/水溶液 (90:10, v/v)
梯度：
| Time (min) | %B |
| 0 | 3 |
| 20 | 35 |
| 20.5 | 80 |
| 25 | 80 |
| 25.5 | 3 |
| 30 | 3 |
流速：0.3mL/min
进样量：5μL
温度：70℃
检测：HRMS
HRMS条件
离子源：HESI-II
极性：负极
源内CID：3eV
扫描方式：MS
分辨率：140,000
AGC目标：3e6 ms
Max IT：100ms
扫描范围：600 to 6000m/z
| Type | Delta (ppm) | % Area |
| No Cap | 3.27 | 9.02 |
| Cap 0 | -0.75 | 79.86 |
| Cap 1 | -3.45 | 9.65 |
| Cap 1, n+1 | -1.04 | 1.47 |
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