【飞诺美色谱】(GB/T 22255-2014) 食品中三氯蔗糖的分析方法

摘要：本实验重现了《食品中三氯蔗糖的测定》（GB/T 22255-2014），样品经甲醇水（3:1，V/V）提取，

Cleanert® PEP-2固相萃取柱净化，Venusil® XBP C18 (L)色谱柱（4.6×150 mm，5 µm，150 Å）分离，

水和乙腈为流动相进行洗脱，外标法进行定量。结果表明，三氯蔗糖添加 量为1.0 mg/g时，

回收率在80% ~ 110%之间，能够满足检测要求。

关键词：三氯蔗糖；Cleanert® PEP-2固相萃取柱；Venusil® XBP C18 (L)色谱柱。

1. 前言

三氯蔗糖是以蔗糖为原料经氯代而制得的一种非营养型强力甜味剂，是一种白色粉末状产品，极易溶于水，水

溶液澄清透明，其甜度是蔗糖的400~800倍。其中，食品包 装成分表中常能看到的蔗糖素（学名三氯蔗糖），

虽然所含热量少，但吃多了也会胖，而且还可能阻碍身体对一些药物的吸收。

因此通过有效的实验技术手段，对食品中的有关三氯蔗糖残留进行监控，以确保消费者对食品消费的安全具有

重要意义。

本实验通过优化前处理方法建立了三氯蔗糖在食品中 的高效液相色谱的方法。

2. 仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪（蒸发光检测器）；

博纳艾杰尔12位负压SPE装置。

试剂材料

甲醇、乙腈、正己烷为色谱纯；实验用水为超纯水；

乙酸锌、亚铁氰化钾均为分析纯；中性氧化铝（100目~200目）

三氯蔗糖标准品（纯度99%）；

乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3 mL乙酸，加水溶解至100 mL；

亚铁氰化钾溶液：称取10.6 g亚铁氰化钾，加水溶解至100 mL；

甲醇水溶液：量取75 mL甲醇，加25 mL水，混匀；

乙腈水溶液：量取11 mL乙腈，加89 mL水，混匀。

一次性无菌注射器；尼龙针式过滤器(0.45 µm，直径13 mm)；

Cleanert® PEP-2固相萃取柱：200 mg/6 mL。

3. 样品制备

样品提取

酱油

称取2 g样品置于50 mL离心管中，加入1.0 g中性氧化铝，加入3 mL水，涡旋混匀振荡3 min后，加入15 mL甲

醇，继续震荡30 s，超声波提取20 min，3000 r/min离心10 min，上清液移入50 mL离心管中，

沉淀物加入5.0 mL甲醇水（3︰1，V/V），涡旋30 s，以3000 r/min,离心10 min，

重复提取2次，将上清液合并于150 mL分液漏斗中。在150 mL分液漏斗中，加入30 mL正己烷，振摇2

min，静置分层，20 min后，下层水相移至于50 mL蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当液体在1 mL左右时，用9

mL水分3次冲洗蒸发皿，合并于15 mL离心管中，超声处理5 min，3000 r/min离心10 min，待净化。

可口可乐

称取混匀后试样5 g，置于15 mL离心管中，加入5 mL水，涡旋混合器上振荡30 s，以3000 r/min离心10 min

酸奶

称取混匀后试样2 g置于50 mL离心管中，加入5 mL水，涡旋振荡3 min后加入15 mL甲醇，0.5 mL乙酸锌，0.5

mL亚铁氰化钾，继续震荡30 s，超声波提取20 min，3000 r/min离心10 min，

上清液移入50 mL离心管中，沉淀物加入5.0 mL甲醇水（3︰1，V/V），涡旋30 s，以3000 r/min,离

心10 min，重复提取2次，将上清液合并于150 mL分液漏斗中在150 mL分液漏斗中，加入30 mL正己烷，振摇2

min，静置分层，20 min后，下层水相移至于50 mL蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当液体在1 mL左右时，用9

mL水分3次冲洗蒸发皿，合并于15 mL离心管中，超声处理5 min，3000 r/min离心10 min，待净化。

样品净化

先将Cleanert® PEP-2 (200 mg/6 mL)小柱分别用4 mL甲醇，4 mL水溶液活化平衡；

然后将待净化液过柱；用1 mL水洗柱，弃去全部流出液；最后用3 mL甲醇洗脱。

收集洗脱液于40℃氮气吹干，用1 mL乙腈水（11︰89，V/V）溶解残留物，

过0.45 µm尼龙针式过滤器滤膜后待测。

4. 色谱条件

色谱柱：Venusil® XBP C18 (L)，5 µm，150 Å，4.6×150 mm

流动相：乙腈︰水=11︰89； 柱 温：35℃

进样量：20 µL； 蒸发温度：50℃

5. 结果与讨论

实验结果

由表2可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测三氯蔗糖，加标回收率在80% ~ 110%之间，能够满足标准要求。

结论

本实验依据《食品中三氯蔗糖的测定》（GB/T 22255-2014）建立了食品中三氯蔗糖残留量的检测方法，

并结合高效液相色谱对食品中三氯蔗糖残留物的含量进行了测定。

对于加标量为50 mg/kg的可乐和20 mg/kg的酸奶、酱油样品进行了检测，

回收率在80% ~ 110%之间，符合要求。

6. 订货信息