【飞诺美色谱】​猪肉中齐帕特罗残留量的分析方法

猪肉中齐帕特罗残留量的分析方法

AF10090

应用及技术服务部

摘要：本实验以 SN/T 2624-2010 为依据，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱(SPE-LC/MS/MS)

的方法，在多反应监测(MRM)模式下建立了猪肉中齐帕特罗的检测方法。样品中的齐帕特罗经

乙腈、异丙醇和柠檬酸缓冲液的混合溶液提取，Cleanert® PEP-2 串联 Cleanert® PCX 固相萃取柱

净化，Venusil® MP C18 色谱柱（2.1 × 50mm，3 μm，100 Å）分离，0.1%甲酸水︰0.1%甲酸乙

腈(95︰5, V/V)为流动相进行等度洗脱，外标法进行定量。结果表明，齐帕特罗添加量为 4.0 μg/kg

时，回收率在 90% ~ 110%之间，能够满足检测要求。

关键词：SPE-LC/MS/MS；齐帕特罗；Cleanert® PEP-2 SPE 柱；Cleanert® PCX ；Venusil® MP C18

色谱柱

前言

齐帕特罗(zilpaterol)属于 β2-肾上腺素受体激动剂，是一种与克伦特罗(俗称瘦肉

精)、莱克多巴胺、沙丁胺醇等具有同样生理效应的生长促进剂，属于违禁药物。但

其化学结构却与常见的 β-兴奋剂不同,其毒性也是莱克多巴胺的 15 倍。然而，随着

相关兽药监管部门对克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等常见 β-兴奋剂打击力度的

增大和相关检测技术的日趋成熟，齐帕特罗极有可能被不法分子利用，成为食品安

全的潜在杀 手。SN/T 2624-2010《 动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法

液相色谱-质谱/质谱法》规定受体激动剂最低检测限为 0.5 μg/kg。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

AB SCIEX API 4000+液相质谱联用仪

试剂材料

甲醇、氨水、乙腈、甲酸均为色谱纯；实验用水为超纯水；柠檬酸为分析纯； 博纳艾杰尔产品应用案例

齐帕特罗标准品（纯度大于 98%），甲醇溶解并稀释；

柠檬酸缓冲液：称取 10.5 g 溶解于 500 mL 水中，用氨水调节 pH 至 2.5；

甲醇-氨水（95/5,V/V）；

水-甲醇（95/5,v/v）；

0.1%甲酸水-甲醇溶液（95/5,v/v）；

一次性无菌注射器；尼龙针式过滤器(0.22 μm，直径 13 mm)；

Cleanert® PEP-2 固相萃取柱：60 mg/3mL；

Cleanert® PCX 固相萃取柱：60 mg/3mL

样品制备

样品提取

准确称取 5 g 均质猪肉试样于 50 mL 离心管中，加入 30 mL 乙腈，2 mL 异丙醇

和 10 mL 柠檬酸缓冲液，涡旋混合提取 3 min，8000 r/min 离心 3 min，上清液转移

至 250 mL 梨心瓶中。重复上述提取操作，合并提取液，加入 6 mL 异丙醇后，在 40℃

旋蒸浓缩至 5 mL 左右，转移浓缩液至 50 mL 离心管中，并用 5 mL 柠檬酸缓冲液润

洗梨心瓶，合并洗液，8000 r/min 离心 10 min，取清液待净化。

样品净化

取 PEP-2 (60 mg/3 mL) 和 PCX (60 mg/3 mL)，用转接头按从上到下的顺序串联

好，依次用 3 mL 甲醇、3 mL 水、3 mL 柠檬酸缓冲液活化小柱，待净化液以 0.5 mL/min

流速全部过柱，再依次用 3 mL 柠檬酸缓冲液、3 mL 水、3 mL 水-甲醇(95/5,V/V)淋

洗小柱，抽干 5 min，最后依次用 4 mL 甲醇、6 mL 甲醇-氨水(95/5,V/V)洗脱小柱，

合并收集洗脱液，40℃氮气浓缩至干，加入 1.0 mL 0.1%甲酸水-甲醇溶液(95/5,V/V)

振荡溶解残渣，过 0.22 μm 尼龙针筒过滤器，待测。

注：上述操作步骤可在 Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪上完成。

实验条件

液相条件

色谱柱：Venusil® MP C18，2.1 × 50mm，3 μm，100 Å；

流动相：A相-0.1%甲酸水溶液，B相-0.1%甲酸乙腈；

柱 温：30℃；

进样量：10 µL；

流速：300 µL/min；

等度洗脱：0~10 min，A︰B = 95︰5 (V/V)。

质谱条件

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：正离子扫描；

电喷雾电压：4500 V；

雾化气压力：40 psi；

气帘气压力：15 psi；

辅助气压力：40 psi；

离子源温度：400℃；

采集方式：多反应监测(MRM)；

Q1、Q3均为单位分辨率；

质谱参数(见表1)

添加图片注释，不超过 140 字（可选）

结果与讨论

实验结果

由表 2 可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测齐帕特罗加标回收率

在 90% ~ 110%之间，RSD 值小于 14%，能够满足检测要求。由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert® PEP-2 串联 Cleanert® PCX 固相萃取柱净化，采用 Venusil® MP C18 色谱柱检测得到的齐帕特罗峰形良好，且保留时间稳定。

添加图片注释，不超过 140 字（可选）

添加图片注释，不超过 140 字（可选）

结论

本实验建立了齐帕特罗残留量的 LC-MS/MS 检测方法，并结合固相萃取技术对

猪肉中齐帕特罗的含量进行了测定。对于加标量为 4.0 μg/kg 的样品进行了检测，回

收率在 90% ~ 110%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说

明本方法能够用于检测动物源性食品中齐帕特罗的残留量。

附：相关产品

产品名称 规格描述 包装数量 订货号

Venusil® MP C18 3 μm，100Å；2.1 × 50mm 1 支 VA930502-0

Cleanert® PEP-2 60 mg/3 mL 50 支/pk PE0603-2

Cleanert® PCX 60 mg/3 mL 50 支/pk CX0603

保护柱套 适用于 4.6 × 10 mm 和

2.1 × 10 mm

1 支 SH-100

直联式保护柱芯 3 μm，100Å；2.1 × 10mm 4 /pk VA950102-0S

1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处

32 × 11.6 mm

100/pk 1109-0519

1.5 mL 样品瓶盖

9 mm 中心孔蓝盖，红色

橡胶/米色 PTFE 隔垫

45°Shore A; 1.0 mm

100/pk 0915-1819

Qdaura®卓睿全自动固相

萃取仪

24 位，四通道 1 台 SPE-40

氮吹仪 15 位 1 台 NV15-M

针式过滤器（Nylon） 单膜，13 mm，0.22 μm 200 个/包 AS021320

一次性注射器 2 mL 无针头 100 支/包 LZSQ-2ML

乙腈 UV 级 4 L/瓶，色谱纯 4×4 L/箱 015-4

甲醇 4 L/瓶，色谱纯 4×4 L/箱 S232-04