【飞诺美色谱】复方氨基酸注射液中氨基酸分析报告

摘要：本实验采用异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生剂，并在衍生过程中加入二巯基二丙酸(MPA)保护半胱氨酸。同时采用反向高效液相色谱法，以正亮氨酸为内标物，使用 Venusil ○R AA 氨基酸分析方法包，分析复方氨基酸注射液样品中氨基酸组成。本方法快速、灵敏、准确，特别适用于同时含有胱氨酸和半胱氨酸的多肽氨基酸组成的测定。

关键词：高效液相色谱法；异硫氰酸苯酯(PITC)；复方氨基酸注射液； Venusil ○R AA ；胱氨酸；半胱氨酸

前言

氨基酸是生物体中重要的生命物质，是组成酶和蛋白质的基本单元。作为小分子，氨基酸对生物大分子的活性及其生理功能起着极为重要的作用；作为配体，它可与多种金属离子配位，为研究抗肿瘤、抗癌药物提供信息。各种氨基酸在生物体中具有不同的生物功能，因此，准确灵敏地测定食物、药品和生物样品中氨基酸的含量具有十分重要的意义。

本实验采用Venusil ○R AA氨基酸分析方法包中的检测标准，使用Venusil ○ R AA氨基酸分析专用柱对复方氨基酸注射液中的氨基酸组成进行了测试。

实验部分

仪器、试剂与材料

试剂材料

流动相 A：称取 15.2 g 无水醋酸钠，加水 1850 mL 溶解，用冰醋酸调节 pH 至 6.5，

然后加入乙腈 140 mL，混匀；

流动相 B：乙腈 ︰ 水=80 ︰ 20；

稀盐酸：0.1 mol/L 盐酸；

二疏基二丙酸(MPA)溶液：取 MPA 约 8.0 mg，加入 200 mol/LNaOH 溶液 1mL 溶解；

内标溶液：称取正亮氨酸 10 mg，置于 10 mL 容量瓶中，加稀盐酸溶解并定容至刻度；

色氨酸：称取色氨酸 10 mg，置于 10 mL 容量瓶中，加稀盐酸溶解并定容至刻度；

三乙胺乙腈溶液：取 Venusil ○R AA 氨基酸分析方法包中三乙胺一瓶，加乙腈 8.6 mL，混匀；

异硫氰酸苯酯乙腈溶液：取 Venusil ○R AA 氨基酸分析方法包中异硫氰酸苯酯溶液 1瓶，加乙腈 2.0 mL，混匀；

氨基酸标准溶液：取 Venusil ○R AA 氨基酸分析方法包中 17 种氨基酸标准溶液(包括门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、赖氨酸)1.0 mL，加色氨酸溶液 0.5 mL，稀盐酸 3.5 mL 稀释，混匀；

复方氨基酸注射液样品：无色透明液体，由某医药科技公司提供。

样品制备

移取复方氨基酸注射液样品 1.0 mL，置于 50 mL 离心管中，加入稀盐酸 30 mL，混匀，作为样品溶液，待衍生使用。

氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生

取 18 种氨基酸标准溶液（含色氨酸 2.5 μmol/mL）、上述复方氨基酸样品溶液各 200μL，分别置于 1.5 mL 离心管中，向每个离心管中加入 MPA 溶液 40 μL，再向每个离心管中加入内标溶液 20 μL，混匀，然后依次向每个离心管中加入三乙胺乙腈溶液 100μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100 μL，混匀，室温放置 1 小时。再向每个离心管中加入400 μL 正己烷，振摇后放置 10 min，取下层溶液 200 μL，加 800 μL 水稀释，经 0.45 μm针筒过滤器过滤，取续滤液作为样品试液。

色谱条件

色谱柱：Venusil ○

R AA；5 μm；4.6 × 250 mm；

流 速：1.0 mL/min；

柱 温：40 ℃；

波 长：254 nm；

进样量：10 μL；

梯 度：

结果与讨论

本实验采用Venusil ○R AA氨基酸分析方法包对复方氨基酸注射液中氨基酸进行了测试，由表 2 及图 2 可知，使用 Venusil ○R AA 氨基酸分析方法包共检测出复方氨基酸注射液中 17 种氨基酸，各氨基酸峰间的分离效果较好。

结论

根据实验结果，使用 Venusil ○R AA 氨基酸分析方法包共检测出复方氨基酸注射液中17 种氨基酸，各氨基酸峰间的分离效果较好，能够满足检测要求。

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