一、样品前处理方法
1.水性样品 (水、饮料、果汁等)
固相萃取柱:Cleanert ® DEHP 玻璃柱,500mg / 6mL,(P/N:DEHP5006)
1.1样品处理
此类样品包括瓶装纯净水、矿泉水,茶、果汁和功能饮料等;液体样品可直接上样;某些可水溶解的固体样品可以先制成水溶液,然后全部作为待处理液,如无脂糖果。
1.2固相萃取法净化
活化:5 mL 乙酸乙酯、5 mL 甲醇、5 mL 水
上样:10 mL 水性样品
淋洗:5 mL 5% 甲醇水,真空抽干 20 min。
洗脱:加入 2 mL 甲醇浸泡柱床约 1 min,再用 10 mL乙酸乙酯进行洗脱。
检测:将洗脱液用氮气吹干后,以 1 mL 甲醇定容,然后用液相色谱法检测。
备注:此法多适用于配套液相色谱检测,当样品中邻苯二甲酸酯类的含量较低时,需要采用固相萃取富集才能检测的情况。
一般来说,对于此类样品,可以采用正己烷液液萃取的办法,用 GC/MS (灵敏度较高)直接检测。
注:所使用乙酸乙酯必须是农残级。
2.白酒
固相萃取材料:Cleanert® DEHP 玻璃柱,500mg / 6mL (P/N:DEHP5006)
2.1样品制备
将白酒用去离子水稀释,使其中的乙醇的含量为 5%, 作为上样液;取 1 mL 甲醇加入 19 mL 去离子水,混匀,得到 5% 甲醇-水溶液,作为淋洗液。
2.2净化
用玻璃移液管分别取 5 mL 乙酸乙酯、5 mL 甲醇,5 mL 水,在重力状态下依次过柱;用玻璃移液管取100 mL 上样液加到小柱上;用玻璃移液管取 5 mL 5% 甲醇-水溶液淋洗固相萃取柱;淋洗结束之后,开启真空泵抽 20 min,抽干之后,加入 2 mL 甲醇浸泡柱床约 1 min;用 10 mL 乙酸乙酯洗脱固相萃取柱,收集洗脱液。将洗脱液于 35℃ 氮吹至干,用 1 mL 甲醇定容,将溶液转移至样品瓶中,进行GC/MS 或 HPLC 检测。
注:所使用乙酸乙酯必须是农残级。
3.乳品及乳制品饮料等含蛋白基质样品
固相萃取材料:Cleanert ® MAS-PAE,40 mL玻璃散装填料 (P/N:MS-PAE40)
纯牛奶样品:
样品净化:向玻璃离心管中加入 2 mL 样品,然后加入 4 mL 乙腈:甲基叔丁基谜 (9:1,V/V),将离心管涡旋2 min,最后加入 Cleanert® MAS-PAE 填料,再将离心管涡旋振荡 2 min 后,以 7000 rpm/min 的转速离心 5 min,取上清液,以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后,待检。
酸奶样品:
样品净化:向玻璃离心管中加入 1 mL 酸奶和 1 mL 去离子水,混匀,然后加入 4 mL 乙腈:甲基叔丁基谜 (9:1, V/V),将离心管涡旋 2 min,最后加入 Cleanert® MAS-PAE 填料,再将离心管涡旋振荡 2 min 后,以 7000 rpm/min 的转速离心 5 min,取上清液,以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后,待检。
4.低脂固态样品
如奶粉、饼干、果冻、糖果等, 使用固相萃取材料:Cleanert® MAS-PAE,40 mL玻璃散装填料 (P/N:MS- PAE40)
取1 g已制成粉末状的样品,2 mL水,加入到Cleanert® MAS-PAE离心管中,然后加入4 mL乙腈:甲基叔丁基谜(9:1,V/V),将离心管涡旋2min,最后加入Cleanert® MAS- PAE填料,再将离心管涡旋振荡2min后,以7000 r/m的转速离心5min,移取全部上清液至带刻度离心管中,用乙腈: 甲基叔丁基谜(9:1,V/V)将溶液定容为5 mL,以PAEs专用过滤头过滤后,待检测。
5.酱油
固相萃取材料:Cleanert® MAS-PAE-C,40 mL玻璃散装填料 (P/N:MS-PAE40-C)
样品净化:
向玻璃离心管中加入 2 mL 样品,然后加入 4 mL 乙腈:甲基叔丁基谜 (9:1,V/V),将离心管涡旋 2 min,最后加入 Cleanert® MAS-PAE-C 填料,再将离心管涡旋振荡2 min 后,以 4000 rpm 的转速离心 5 min,取上清液,以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后,待检。
6.油性样品
方法一:内部方法
固相萃取柱:Cleanert® PAE-G 玻璃柱,3g/6mL (P/N:PAE30006-G)
(1)样品制备
用万分之一天平称取 0.1 g 油,置于玻璃离心管中,然后加入 3 mL 乙腈,涡旋 2 min,超声 2 min,以 4000 rpm离心 2 min,将上清液转移至另一玻璃管中,在 40℃ 下以氮气吹干,加入 2 mL 正己烷,轻轻振荡摇匀,作为待净化液。
(2)固相萃取方法
活化: 5 mL 正己烷
上样:将待净化液全部加到固相萃取柱中淋洗:用 10 mL 1% 乙酸乙酯的正己烷
洗脱:用 5 mL 50% 乙酸乙酯的正己烷
收集洗脱液,在 40℃下以氮气吹干,加入 1 mL 乙腈,涡旋 1 min,超声 1 min,以 4000 rpm 离心 2 min,取上清液进 GC/MS 检测。
注:所使用乙酸乙酯必须是农残级。
方法二、SN/T 3147-2012
固相萃取柱:Cleanert® PSA 玻璃柱,1g / 6mL (P/N:PA00006-G)
(1)样品制备
称取 1.0 g 样品于玻璃离心管中,加入 2 mL 正己烷和10 mL 乙腈,涡旋 2 min,以 4000 r/m 离心 2 min,转移下层清液转移至另一样品瓶中,以 10 mL 乙腈重复提取样品一次,合并提取液,40℃ 氮气吹至近干,加入 2 mL 正己烷复溶作为待净化液。
(2)净化
活化:将 Cleanert® PSA 玻璃固相萃取柱用 5 mL 丙酮、5 mL 正己烷活化
上样:将待净化液全部加到固相萃取柱中;
洗脱:用 5 mL 正己烷,然后用 5 mL 4% 丙酮—正己烷溶剂洗脱,合并洗脱液
收集洗脱液,在 40℃下以氮气吹干,加入 1 mL 乙腈溶解,进 HPLC 检测。
7.复杂基质样品 (如方便面填料包)
固相萃取柱:Cleanert® PAE-C 玻璃柱,1g / 6mL (P/N:PAE30006-C)
7.1样品制备
用万分之一天平取 0.5 g 调料,置于玻璃样品瓶中,加入 3 mL 乙腈/甲基叔丁基醚 (9:1,v/v),涡旋 2 min,超声2 min,以 4000 r/m 离心 2 min,将上清液转移至另一干净样品瓶中,往装调料的样品瓶中再加入 3 mL 乙腈/甲基叔丁基醚 (9:1,v/v),涡旋 2 min,超声 2 min,以 4000 r/m 离心2 min,将上清液合并,于 40℃ 氮气吹干,加入 1 mL 正己烷,摇匀,作为待净化液。
7.2样品净化
活化:5 mL 正己烷上样:全部待净化液
淋洗: 10 mL 1%乙酸乙酯/正己烷 (v/v)
洗脱:5 mL 乙酸乙酯:正己烷 (50:50,v/v)
将洗脱液于40℃下氮气吹干,加入1mL乙腈,涡旋混合 1 min,超声 1 min,4000 r/m 离心 3 min,转移上清液至进样样品瓶中,待检测。
注:所使用乙酸乙酯必须是农残级。
8.保健品(粉末状样品)
固相萃取材料:Cleanert® MAS-PAE,40 mL玻璃散装填料 (P/N:MS-PAE40)
用万分之一天平取样品0.5g,置于12mL玻璃样品瓶中,加入4mL乙腈/甲基叔丁基醚(9:1,v/v),涡旋2min,加入Cleanert MAS-PAE填料,涡旋2min,超声2min,以7000r/m 离心5min,用PAEs专用滤头过滤上清液,待检测。
9.保健品(胶囊等样品)
固相萃取材料:Cleanert® MAS-PAE-C,40 mL玻璃散装填料 (P/N:MS-PAE40-C)
以内装液体的胶囊为例,用干净针将胶囊挑破,将胶囊中 的液体挤出,用万分之一天平称取样品0.1g,置于12mL玻璃样品瓶中,加入4mL乙腈/甲基叔丁基醚(9:1,v/v),涡旋2min,加入Cleanert MAS-PAE-C填料,涡旋2min,超声2min,以7000r/m离心5min,用PAEs专用滤头过滤上清液, 待检测。
二、检测方法
1.高效液相色谱法
色谱条件
色谱柱:Venusil® XBP C18-L ,4.6×250 mm,5 µm, 150Å (P/N:VX952505-L);
流动相:A 相-水,B相-甲醇:乙腈 = 50:50 (v/v)
流速:1.0 mL/min; 波长:242 nm
进样量:5 µL (样品浓度 100 ppm), 50 µL (样品浓度 10 ppm);
溶 剂:正己烷/流动相 A + 流动相 B (40+60); 柱 温:30℃
梯度洗脱:见表1
表 1. 液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | A/% | B/% |
---|---|---|
0 | 60 | 40 |
2 | 50 | 50 |
10 | 40 | 60 |
12 | 30 | 70 |
20 | 30 | 70 |
31 | 0 | 100 |
40 | 0 | 100 |
40.01 | 60 | 40 |
图 1. 16 种邻苯二甲酸酯类标准品HPLC 色谱图( 样品浓度为 25 ppm)
( 邻苯二甲酸二甲酯DMP,邻苯二甲酸二(2- 甲氧基) 乙酯DMEP,邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP,邻苯二甲酸二乙酯DEP,邻苯二甲酸二苯酯,邻苯二甲酸丁苄酯BBP,邻苯二甲酸二异丁酯DIBP,邻苯二甲酸二正丁酯DBP,邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP,邻苯二甲酸二戊酯DPP,邻苯二甲酸二环己酯DCHP,邻苯二甲酸二(4- 甲基-2- 戊基) 酯BMPP,邻苯二甲酸二己酯DHXP,邻苯二甲酸二(2- 乙基己基) 酯DEHP,邻苯二甲酸二辛酯DNOP,邻苯二甲酸二壬酯DNP)
2.气相色谱质谱法
2.1气相色谱条件
色谱柱:DA-5MS,30 m×0.25 mm×0.25 µm; 进样口:250℃,不分流进样;
进样量:1 µL;
程序升温:50℃ (1 min) 20℃/min 220℃ (1 min) 5℃/ min 280℃ (4 min);流速:1 mL/min
2.2质谱条件
接口温度: 280 ℃; 电离方式: EI; 电离能量: 70 eV;溶剂延迟:7 min;监测方式:SIM 模式,监测离子见表2。
表 2. 16 种邻苯二甲酸酯类化合物定量离子及定性离子
编号 | 保留时间/min | 中文名称 | 英文缩写 | SIM离子 | 辅助定性离子 |
---|---|---|---|---|---|
1 | 8.258 | 邻苯二甲酸二甲酯 | DMP | 163、77 | 77 |
2 | 9.128 | 邻苯二甲酸二乙酯 | DEP | 149、177 | 177 |
3 | 10.889 | 邻苯二甲酸二异丁酯 | DIBP | 149、223 | 223 |
4 | 11.637 | 邻苯二甲酸二丁酯 | DBP | 149、223 | 223 |
5 | 11.97 | 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 | DMEP | 59、149、193 | 149、193 |
6 | 12.728 | 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 | BMPP | 149、251 | 251 |
7 | 13.051 | 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 | DEEP | 45、72 | 72 |
8 | 13.418 | 邻苯二甲酸二戊酯 | DPP | 149、237 | 237 |
9 | 15.568 | 邻苯二甲酸二己酯 | DHXP | 104、149、76 | 104、76 |
10 | 15.726 | 邻苯二甲酸丁基苄基酯 | BBP | 149、91 | 91 |
11 | 17.169 | 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 | DBEP | 149、223 | 223 |
12 | 17.843 | 邻苯二甲酸二环己酯 | DCHP | 149、167 | 167 |
13 | 18.073 | 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 | DEHP | 149、167 | 167 |
14 | 18.207 | 邻苯二甲酸二苯酯 | — | 225、77 | 77 |
15 | 20.481 | 邻苯二甲酸二正辛酯 | DNOP | 149、279 | 279 |
16 | 23.023 | 邻苯二甲酸二壬酯 | DNP | 57、149、71 | 57、71 |
三、订货信息
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