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蛋白（肽段）定量的原理及安捷伦的解决方案
2018/08/30 15:33
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 6495B 三重四极杆液质联用系统
型号： 6495B
产地： 新加坡
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
蛋白质作为所有生命周期的直接参与者，是生命现象和生物规律变化的标志物，在生命科学的大环节中占据着举足轻重的地位。从蛋白质的角度去描述生物的变化，业已成为研究生命科学的主要手段。处于不同时期、不同条件下的功能性蛋白质，其表现形式及丰度水平千变万化、生理功能模块和介导信号通路纷繁复杂，因此，深入研究蛋白质乃至对生物标志物监测充满着艰辛与挑战。与早期关注蛋白质的发现过程不一样，目前生物化学家越来越重视功能性蛋白质在表达量上的变化，蛋白丰度的变化更能体现出生命变化的多样性。
生化实验室最根本的分析任务之一就是蛋白的定量分析，但以往的抗体免疫化学法 (Western Blot) 表现出较差的特异性和较高的测量误差 (CV > 20 - 40%)。串联质谱多反应监测 (MRM/SRM)定量方法，一直以来就是定量的黄金标准，在小分子定量上早已成熟使用，随着液相色谱和串联质谱技术的提高，越来越多的生蛋白（肽段）定量的意义及出现 MRM 质谱技术平台的缘由化实验室开始大量采用串联质谱技术为基础的蛋白（肽段）定量流程。MRM 肽段定量方法的优点很多，它利用蛋白专属的肽段序列完成定量分析，一次运行可同时分析几十到几百种的蛋白，具备高通量的定量分析能力。特别是 2012 年，方法论领域的权威期刊《Nature Methods》将基于三重四极杆质谱 (QQQ) 平台的 MRM/SRM 定量思路的靶向蛋白质组学 (Targeted proteomics) 技术列为当年的年度方法，确立了目标蛋白定量分析的权威策略。近年来该杂志陆续发表了多篇论文，对 QQQ-MRM/SRM 思路成功应用于目标蛋白定量分析进行了持续报道。随着质谱灵敏度的大幅提高，以大流速常规液相色谱 (LC) 取代纳流液相色谱 (Nano-LC) 所组成的 MRM 肽段定量方法，代表着蛋白定量分析的最高技术标准，极大地促进生物化学及各种新应用快速向前发展，广泛应用在蛋白质组学、生物制药等研究领域，并迅速朝着诸如食品、环境、临床等更宽的应用范围发展。
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