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用于单克隆抗体肽谱分析的一体化工作流程
2018/06/15 11:22
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent AssayMAP Bravo 蛋白质样品前处理平台
型号： AssayMAP Bravo
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
前言
单克隆抗体 (mAb) 是制药行业中发展最快的一类药物。mAb 作为蛋白质药物，从初始表达到最终商业化经历了一个高度复杂的过程，需要在每个步骤中对其进行仔细表征。在用于 mAb 表征的众多分析方法中，肽谱分析是一项至关重要的技术，它能够实现 mAb 的一级结构确认，还可以对翻译后修饰 (PTM)（如脱酰氨基化、氧化和糖基化）进行鉴定和定量分析。使用 LC/MS/MS 方法进行的 mAb 肽谱分析包括将纯化的 mAb 酶裂解为肽段、串联质谱分析以及数据解析。样品前处理通常涉及多个步骤，包括变性、还原、烷基化和酶解。手动进行肽谱分析样品前处理的过程十分繁琐，且易于受到可扩展性和重现性不佳的影响。
此应用简报展示了一个高通量工作流程，能够同步进行样品消解和样品净化，具有很高的重现性。分析过程中使用 Agilent AssayMAP Bravo 液体处理自动化系统、Agilent 1290 Infinity II 液相色谱与 Agilent 6550 Q-TOF 质谱联用系统（用于灵敏而准确的谱图采集），以及 Agilent MassHunter BioConfirm 软件（用于数据自动分析）。
结论
安捷伦肽谱分析工作流程解决方案集先进的液体处理自动化系统、高效色谱技术、精确质量数 Q-TOF LC/MS 系统与强大的软件于一体，自动处理并精简对 mAb 生物制剂开发至关重要的复杂处理过程。此工作流程采用：
• Agilent AssayMAP Bravo 系统，能够自动进行酶解和样品纯化，具有优异的重现性；
• Agilent AdvanceBio 肽谱分析色谱柱，可实现出色的液相色谱分离，快速分离有助于提高分析实验室的效率；
• 高度准确且灵敏的 Agilent 6550 Q-TOF LC/MS/MS 系统，能够生成无偏差的肽谱分析数据，可实现单克隆抗体蛋白质的全面序列覆盖；
• Agilent MassHunter BioConfirm 数据分析软件，可执行自动数据提取、序列匹配、PTM 鉴定和序列覆盖率计算。
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