牛肝中兽药多残留的 LC/MS/MS 分析 Agilent Bond Elut QuEChERS EMR-Lipid 增强型脂质去除产品

    摘要

    Agilent Bond Elut QuEChERS 增强型脂质去除产品(Agilent Bond Elut QuEChERSEMR-Lipid) 是新一代样品前处理产品，适用于便捷的分散固相萃取(dSPE)。这种材料对于共萃取基质具有较高选择性，尤其适用于脂肪样品（脂肪含量> 5%），而不会对分析物回收率产生利影响。本研究介绍应用这款新型产品对牛肝中的30 种代表性兽药进行的分析。分析流程包括利用酸化乙腈实现快速高效的蛋白质沉淀萃取，然后使用EMR-Lipid 增强型脂质去除净化管和EMR-Lipid Polish 反萃管进行进一步净化。研究中通过共萃取物重量与柱后注射实验来测定由EMR-Lipid 方案去除的基质量。与其他基质净化产品相比，EMR-Lipid 增强型脂质去除净化管能够提供更有效的基质去除和更出色的分析物回收率。EMR-Lipid 优化方法能够为各种浓度下的全部30 种兽药提供卓越的洁净度以及优异的准确度和精密度，实现快速、稳定而有效的高脂肪含量样品分析。

   前言

    兽药广泛用于食品生产行业的动物中，以预防动物疾病或作为生长促进剂。这些药物将在动物组织中发生富集，使用不当更是会导致药物残留在食用组织中不断积累，对人类健康构成威胁。随着人们对食品安全的日益关注，几乎每个国家都出台了限制食品动物产品中所使用药物的法规[1-4]。

    肌肉、肝脏和鸡蛋等动物源食品通常具有复杂的化学成分，因此，采用包括常规萃取和高效净化的高效样品前处理方法至关重要。已有的样品前处理方法包括传统的溶剂萃取、固相萃取(SPE) 或多项技术的组合。这些方法通常费力费时，仅适用于有限的化合物类别，并且需要额外进行方法开发。

    多类别、多残留方法在监管性监测项目中越来越受青睐，因为它们可以扩大分析范围并提高实验室效率。过去几年来接受监测的兽药数量越来越多，如今已报道了100 多种兽药[5-8]。样品前处理通常包括采用乙腈:水混合物进行萃取，然后利用C18 和/或其他净化技术进行净化。C18 等吸附剂去除共萃脂质的能力有限，可能在稀释或复溶过程中产生沉淀。沉淀生成后需要在LC/MS/MS进样之前对样品进行过滤，这可能造成分析物损失。可以在分散固相萃取(dSPE) 过程中加入己烷来去除共萃取液中的脂质，但这种方法费时费力且无选择性，并且会去除疏水性分析物。与C18相比，使用氧化锆吸附剂进行净化能够改善基质净化效果，但也会导致更多的分析物损失，对于氟喹诺酮、四环素和大环内酯等含羧酸和羟基的化合物而言尤其如此[7,8]。

    Agilent Bond Elut QuEChERS EMR-Lipid 增强型脂质去除产品是一种新型吸附剂材料，能够选择性去除样品中的主要脂类而不会使分析物损失。去除复杂基质中的脂质干扰物对于QuEChERS 和蛋白质沉淀等技术而言尤其重要。由于这些简单的样品前处理方法无法充分去除脂质，因此脂质共萃取物将与目标分析物一起保留到最终样品萃取物中。这会导致色谱峰异常、数据精密度和准确度下降以及维护问题增加。在本研究中，我们考察了一种用于分析牛肝中30 种棘手的代表性兽药的新型样品前处理方法，该方法采用简单的蛋白质沉淀萃取后用EMR-Lipid 进行净化。所选的兽药代表了17 种不同的类别，包括亲水性、疏水性、酸性、中性和碱性药物。表1 显示这些兽药的化学和法规信息。

    结论

    本研究对一种采用蛋白质沉淀萃取与Bond Elut EMR-Lipid 和EMR-Lipid 盐析萃取净化的快速、可靠与稳定的方法进行了优化与验证，此方法适用于牛肝中兽药多残留的分析。研究中对该方法的基质效应进行了详细评估，并与传统C18 dSPE 和氧化锆吸附剂净化技术的基质效应进行了对比。结果表明EMR-Lipid 优化方法能够为这类应用提供卓越的基质净化与优异的回收率和精密度。

    值得注意的是，在进样之前用水稀释，可以使样品适合于LC/MS/MS 分析并能保持早洗脱分析物的峰形良好。本研究中使用的LC/MS/MS 系统灵敏度较高，使用直接稀释的样品仍可

满足检测限的要求。与常用的干燥与复溶方法相比，这一工作流程能够节省大量时间和精力，并可防止可能发生的偏差和分析物损失。如果仪器灵敏度无法满足直接稀释样品的要求，最后仍应考虑采用样品浓缩步骤。样品浓缩通常通过样品蒸发和复溶来实现。本应用表明，使用EMR-Lipid 的选择性基质去除对于牛肝等复杂样品分析具有显著优势，多残留兽药分析可获得更洁净的样品，同时能实现更高的回收率和精密度。

    未来将进一步研究其他复杂的高脂肪含量基质和目标分析物，以证明使用增强基质去除产品具有能够得到洁净样品这一优势。