液相色谱基线监测

p style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　从1903年，俄国植物学家Tsweet提出色谱法开始，色谱技术这一重要的分离分析技术已走过百年历史。上世纪60年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱，20世纪60年代末，世界上第一台高效液相色谱仪问世，开启了高效液相色谱的时代。如今，液相色谱仪因其样品适用范围广、分离效率高、检测灵敏度高、分析速度快、样品回收方便等特点，在制药、食品、环保、石化、农林、医疗卫生等领域有广泛的应用，已成为最重要的分析仪器之一。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　为了解液相色谱技术及应用的最新进展内容，仪器信息网特别策划了span style="color: rgb(255, 0, 0) "strong“包罗万象——液相色谱技术及应用大赏”专题/strong/span，并邀请液相色谱主流生产商来分享对液相色谱技术发展及最新应用进展的看法。此次，我们特别邀请到赛默飞世尔公司液相色谱产品市场经理李卉芳，请她谈一谈赛默飞液相色谱技术的特点，及对目前液相色谱技术发展趋势及热点应用的理解。/pp style="line-height: 1.5em "　span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong　UltiMate+Vanquish/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　作为中国液相色谱市场主要的竞争者，赛默飞加入这场角逐的时间，比其他厂商要晚一些。1975年，戴安公司(后被赛默飞收购)在美国成立，随后在1978年，其液相色谱工厂在德国成立，开启了戴安液相色谱的发展历史。发展初期，戴安公司开发了包括支持预压缩的等度色谱泵、第一台能够被32位色谱管理系统变色龙完全控制的二极管阵列检测器以及整合了对液质联用进行数据处理的变色龙软件等诸多产品。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 338px height: 450px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/c75ade28-0dc1-4a84-8461-7e73d644d00a.jpg" title="1.jpg" alt="1.jpg" width="338" height="450" border="0" vspace="0"//pp style="line-height: 1.5em text-align: center "　　span style="color: rgb(192, 80, 77) "UltiMate3000型液相色谱/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　在2006年匹兹堡展会上，戴安推出了UltiMate3000型液相色谱全线产品，从纳升级到半制备到特色双三元液相色谱系统，涵盖全部液相流速范围，多种组合方式。2009年，戴安推出特色的CAD电雾式检测器，这款通用型检测器具有检测范围广、灵敏度高、响应一致性等优势，可检测任何非挥发性和部分半挥发性物质，尤其适用于检测那些无紫外吸收的化合物。同时不论是何种化学结构，CAD检测器可以对不同组分提供一致的响应，在没有标准物质的情况下，也可以通过其峰面积用其它物质的标准曲线回归对样品进行半定量分析。2011年，戴安公司加入赛默飞大家庭，经过多年发展，液相色谱已成为赛默飞色谱质谱部门核心产线之一。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 366px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/f125ee54-adc5-4ef2-983b-59cb1e3f17ac.jpg" title="2.jpg" alt="2.jpg" width="600" height="366" border="0" vspace="0"//pp style="line-height: 1.5em text-align: center "　　span style="color: rgb(192, 80, 77) "CAD检测器原理图/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　目前，赛默飞液相色谱主要有UltiMate和Vanquish两大系列，其中UltiMate提供常规、稳定的液相色谱技术 而Vanquish平台凝结了赛默飞40多年液相色谱产品经验，提供更高效的液相色谱体验。其中2018年赛默飞推出的Vanquish Duo UHPLC 系统，是一款专门为提升实验室生产力而设计的一款超高效液相色谱产品。该产品可以整合三套工作流程，两套流路，使用一个集成式解决方案。可串联液相或液质工作流程，双泵设计，可以通过双柱切换，节省了洗柱时间，尤其适合高通量分析。而双液相工作流程，赛默飞具有独有的双针、双检测器、双泵的方法，可同时运行两套分析方法，双倍提升效率。反梯度工作流程，搭配CAD检测器，可以使得进入检测器之前的流动相比例恒定，无需标准品即可定量。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 450px height: 450px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/dd130d71-21eb-4285-80ca-101bae3f498b.jpg" title="3.jpg" alt="3.jpg" width="450" height="450" border="0" vspace="0"//pp style="line-height: 1.5em text-align: center "　　span style="color: rgb(192, 80, 77) "Vanquish Duo UHPLC 系统/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong极限性能、可靠易用是两大方向/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　从诞生开始，液相色谱技术发展始终以分离为中心，而对液相色谱分离性能的革新目前主要集中于三个方向。第一是提升分析速度，如超高效液相色谱的诞生和发展，使得色谱分析时间缩短，速度多倍提升。第二是提高灵敏度，如现在光纤流通池的DAD检测器，灵敏度比传统检测器提升数倍 第三是增加选择性，如二维液相色谱，通过第二维度的再分离，可用于更复杂样品的分析。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　近年来，超高效液相色谱技术已经得到了广泛认可，但目前市场上常见的超高效液相色谱柱粒径多为1.6-1.8微米，而超高效液相色谱的最大耐压也大多集中在1200-1500bar，粒径大小、系统压力及上限成为了超高效液相色谱发展的瓶颈。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　除了进一步追求极限的分离性能之外，液相色谱技术的另外一种趋势是追求性能普通但是更可靠、易用的产品。液相色谱发展到今天，分离基本都能满足要求，主流厂商的仪器性能差异也不大。所以如何让液相色谱成为更方便易用，更适合大众常规实验室的需求的产品，也是目前各家厂商追求的大趋势。而在这方面，赛默飞液相色谱UltiMate 3000系列，性能稳定、皮实耐用，主打常规实验室，而Vanquish系列液相主要追求极限分离的性能，多层次、多角度满足客户需求。另一方面，赛默飞提供如维生素A、D、E的同时测定、室内空气的醛酮测定等液相色谱方法包等易用方案，旨在提升日常检测的便捷性。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　同时，未来液相色谱与多种技术的联用，提供更多的分析技术也会是液相色谱应用的一个趋势。如液相与ICP-MS联用，进行元素形态分析 与核磁共振波谱技术联用，从事组学或结构的分析等。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　strongspan style="color: rgb(79, 129, 189) "制药仍是液相色谱最大市场 生物药、中药空间巨大/span/strong/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　制药领域一直是液相色谱的主要目标市场，占比超过50%。近期，国家制药整体大环境是提升药品质量，淘汰落后产能企业，存留下来的优势企业必然面临着提升药品质量的强烈需求。所以，更精准、更全面、更高效率的超高效液相色谱需求仍然旺盛。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　除传统的化学药物之外，近年来，生物制药、中药快速发展，带来液相色谱需求增长迅速，增速远超制药整体增速。国家目前以立法形式明确中药是要重点传承与发展的领域，同时中药经典名方和中药配方颗粒的相关政策，也为液相色谱在中药领域带来了一些采购机会。而未来几年，注射剂一致性评价及2020版中国药典的更新，都会给液相色谱带来新机遇，包括超高效液相色谱、二维液相色谱以及CAD检测器等。针对热点领域，赛默飞先后推出了化学药物和中药复杂体系等全流程的整体解决方案。同时也在积极致力于与相关行业用户搭建合作平台，提供更多地技术交流培训。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　制药领域对合规要求超过了其他领域，在新的监管要求下，药品企业对分析工作流程的质量控制要求变得日益严格，以确保满足数据完整性法规和原始数据归档的需求。赛默飞的变色龙色谱数据系统，能够智能化管理实验室海量数据，可以在不牺牲效率的情况下，满足实验室合规要求。在数据完整性等合规方面，变色龙色谱数据系统通过用户管理、全局性策略、归档策略以及具有时间戳的审计追踪等功能，确保实验室的数据安全性。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　span style="color: rgb(79, 129, 189) "strong关注大健康 临床检测是液相色谱新蓝海/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　健康是人类永恒关注的话题，生命科学及医学与人类健康息息相关，一直是科研的热点。目前，液相色谱已经被广泛应用于生命科学与医学相关的应用，如寡糖、氨基酸、多肽、核酸等分析测定发挥了重要的作用。近年来，代谢组学和脂质组学成为生物医学研究的主要推动力。赛默飞Vanquish Duo UHPLC凭借双针、双泵、双流路的独特设计，可以在一次分析中实现极性代谢物和非极性脂质高覆盖和高通量分析，提供了全新的同时测定代谢组学、脂质组学研究新手段和新思路。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　在临床医学检测中，液相色谱技术，由于分离和定量同时进行，可以同时检测不同种类药物，一次进样可以同时分析原药和代谢产物，具有高准确性和精确度，在治疗药物监测研究中占了非常重要的地位。目前，赛默飞在双三元液相色谱上已经建立了二十余种临床常用药物方法，已广泛应用于治疗药物监测中如抗癫痫药、抗真菌药、抗精神类病药、呼吸系统平喘药、抗生素等测定上。双三元梯度液相凭借独特的双泵设计，拥有诸多可能性，不仅可以轻松实现常规的应用，也可满足各种特殊功能需求。如在线净化SPE-LC全自动样品制备和分析的方案，无需复杂前处理，自动化程度高，重复性好，操作简便，受到医院工作者的青睐。/pp style="line-height: 1.5em text-align: justify "　　与其它领域相比，对样品高通量的追求是生命科学及医学领域的特殊要求。因此，赛默飞提供适用于临床的自动化在线样品制备和Transcend多通道液相系统，系统无需耗时的协议创建、数据分析和昂贵试剂，就可以实现对多种复杂样品的高选择性和灵敏度分析。针对目前热门的临床医学检测领域，赛默飞将与合作伙伴推出临床体外诊断(IVD)液相色谱仪，通过OEM战略，将高效液相色谱平台快速提供给市场，拓展临床领域的布局。/pp style="line-height: 1.5em text-align: center " strong 扫码加小编微信，拉您进液相色谱用户群，交流学习液相色谱技术~br//strong/pp style="line-height: 1.5em "strong/strong/pp style="text-align: center"img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/201907/uepic/c04d7282-f803-4e8e-bacf-66c535f01dc2.jpg" title="254335965074655087.jpg" alt="254335965074655087.jpg"//pp style="line-height: 1.5em "strong/strongbr//ppbr//p

中药的成分非常复杂,以往常用的薄层色谱等方法因其精密度、准确度、灵敏度、重现性差而不能满足现代中药的需要。高效液相色谱正是以其稳定、可靠、高效的特点成为中药研究的最重要的分析方法。目前高效液相色谱已经广泛应用于生物碱、皂苷、黄酮、蒽醌、香豆素等各种中药有效成分的测定。近年来对高效液相色谱监测中药的研究非常多,由于高效液相色谱集经典液相色谱和气相色谱的优势于一身,无论柱效、选择性还是分析程度都达到或超过了它们,近年来对高效液相色谱的不足之处进行了改进,使这项技术日臻完善。1、高效液相色谱发展近况　　高效液相色谱在药物分析中的应用,主要考虑试样的预处理和分析柱、检测器的选择。在试样的预处理上,日前兴起的固相(微)萃取使得许多含量低的成分得到精制提纯,从而适于高效液相色谱的测定,而孙新国采用逆流萃取测定川芎嗪含量取得了很好的效果。中药中有些紫外吸收弱,或无特征紫外吸收的成分,直接用高效液相色谱测定,其灵敏度和分离度都不尽人意,利用柱前或柱后衍生化法可使这些成分较精确地测定出来。对于极性大、脂溶性差物质,在YWGCl8柱上不易保留,用十二烷基磺酸钠作为离子对试剂,降低其极性,延长柱上的保留时间,取得较好的分离较果。将液相色谱和质谱这两个强有力的分析技术在线连接在一起,经过三十年的发展已成为一项较为成熟的分析手段,但是它从形成伊始就存在着问题:从液相色谱流进质谱时,流动相的变化、溶剂的组成、高温高压离子化的问题制约着这种联用技术发展,大气压离子化接口具有去除溶剂和离子化的双重功效,它的引入,使得该技术在各个领域得到了广泛的应用。电喷雾离子源是一种软电离技术,一般只生成(M H) 和(M-H)-两种分子离子峰,选择性监测(mz)190的负分子离子峰,具有较高的灵敏度、准确度、专一性,满足了低浓度药物研究的需求。由张莉等人研究的三维高效液相色谱法可以同步测定葛根素和阿魏酸两种指标。通过实验证明:如果选择合适的柱温等色谱条件,乙醇作为反相高效液相色谱流动相,分析中药及中成药中有效成分,既安全又准确。结构相似的物质,普通的检测器难以检测出来,高效液相色谱-电化学法可以有效地测定黄连粉中仅差一个基团的黄芩苷和黄芩素的含量。样品经色谱柱分离后收集,再经荧光分光光度计测荧光强度,影响因素多,测定复杂,改进后的高效液相色谱-荧光法则可以不经衍生化和收集分离物,只经化学处理除杂,浓缩后直接进样即可。用该法测定贯叶连翘中金丝桃素的含量也取得了较好的结果。高效液相色谱-示差折光测黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量也都取得了较为满意的结果。对于只有紫外末端吸收,用紫外检测时灵敏度低,基线易漂移,示差折光检测其易受外界条件干扰,蒸发散射检测器能克服以上不足,响应值只与样品质量有关,其信号相应与质量成正比,不同化合物,质量相同则信号相应基本一致。蒸发光散射检测法是基于不挥发样品分子对光的散射程度与其质量成正比,与其所含基团性质无关。只要选择适当的检测器参数,便可使流动相和溶剂完全气化,不产生信号,而样品中的各个组分以不挥发粒子存在,对光有散射,以被检测出来。因此,蒸发光散射检测器可用于含不同基团的多组分同时分离、分析。和紫外、荧光等方法相比,蒸发光散射检测法对不同物质有近似相同的响应因子,　　因而不出现低浓度、高响应或高浓度、低响应的现象,有利于不同比例混合物的准确测定.高效液相色谱-蒸发光散射检验法测定银杏叶中萜类内酯含量、红参及育精胶囊中人参　　皂苷Rg1和Re的含量和藤黄中藤黄酸含量都得到了很好的结果。2、高效液相色谱的研究动向　　2.1缩短分析时间,提高分离效率。应用先进的检测仪器和方法,对流动相、固定相进行调节或改变,采用梯度洗脱、柱切换技术有望解决这个问题。梯度洗脱的高效液相色谱法,能分析较宽极性范围的样品,较等度洗脱具有很大的优势,但对于成分更复杂、极性范围更宽的中药样品则有些力不从心。多柱高效液相色谱法又称多维高效液相色谱法。除具有梯度洗脱一样的改变流动相浓度的优点外,还可以改变固定相种类、键合度、粒径、柱长、柱径等及流动相种类、浓度等。　　2.2进一步向自动化、智能化及联用技术上发展。液相色谱与质谱联用在国外已成为测定低浓度生物药品中药物及代谢物的首选方法,LC-MS-MS法测定血浆中HIV-1蛋白酶,准确高效,血浆中残留的内源性组份和其他药物不干扰测定,既节省材料又节约时间。已经应用于体液、血浆、血清中的药物分析。中药复方注射液“清开灵”中的胆酸类物的分析采用液相色谱质谱质谱联用,效果理想。高效液相色谱-核磁共振联用在药物分析方面的作用很不错。新近提出的智能多柱高效液相色谱系统利用切换技术的模块式分离性能,把样品分块的切换进不同性质的色谱柱,再用合适的流动相洗脱。全过程采用智能化控制。3、高效液相色谱在中药分析中的应用前景　　中药研究的大趋势是全成分分析,通过对从单味药到复方的不同配伍、煎煮时间等的研究,才能发现中药中化学成分的变化规律,找到中药机理之间的有机联系。中药成分繁多,且各种成分的性质遍布所有极性段、酸碱范围。实现多成分分析的最简单途径即在一根足够长的色谱柱上,采用温和的流动相,在足够久的时间内洗脱。但这与现代分析要求的简便快速相违。通过大量的应用研究表明,高效毛细管电泳在分析中药成分,尤其在分析高极性化学成分方面有较大优势,在分析大量的复方制剂方面显示了较高的能力。由于毛细管几乎不会出现高效液相色谱分析中常出现的柱床污染现象,而且用过的毛细管柱只需很短的时间进行冲洗后,即可以进行第二个样品的分析,快速高效且分辨率很高。新兴的毛细管电色谱是集高效液相色谱和毛细管电泳优势于一身的一种新型电分离微柱液相色谱技术,它是将高效液相色谱的多种填料微粒移到毛细管中,以样品与固定相间的相互作用作为分离机制,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。最近,一些先进的检测仪器成功的用在了高效液相色谱分析法上,使得高效液相色谱的应用更广泛,并充分利用高效快速、选择性好、灵敏度高等优点,建立更加系统的成分分析方法。通过与质谱联用、梯度洗脱、柱切换技术、配合先进的检测技术,以及与分子生物学、现代分子药理学相结合,必将在中药分析中发挥很大作用。

PerkinElmer日前宣布推出了新型Flexar PDA Plus检测器，适用于环境，食品，制药和化学样品分析。　　据介绍，该检测器是目前市场上最先进的光电二极管阵列(PDA)检测器，采用模块化设计，在快速采样、灵敏度和准确度方面都表现出优异的性能。　　它可以提供检测范围超过了目前市场上任何PDA，甚至优于许多传统的紫外检测器，并拥有高数据采集速率、液芯波导、优越的波长准确度和低基线噪声。　　新型检测器结合PerkinElmer的Flexar液相色谱，可以满足实验室的行业标准要求及更高通量需求。PerkinElmer在一份声明中说：&ldquo Flexar PDA PLUS，可以和其他检测器串联使用，并与PerkinElmer的Chromera，TotalChrom以及第三方色谱数据系统兼容。&rdquo （编译：秦丽娟）