安捷伦双波长模式检测

2009年3月20日，北京—安捷伦科技公司(NYSE:A)今天推出多模式气相色谱(GC)进样口，具有分流、不分流和程序升温气化(PTV)功能，价格比过去更低，维护需求更少。 　　除分流/不分流操作外，该进样口的程序升温功能还具有进样体积广泛、能分析热不稳定样品，以及通过减少样品制备步骤提高效率等优势。该进样口结合安捷伦的扳转顶盖功能，可在几秒钟之内更换衬管，不需要使用特殊工具或经过培训。通过大体积进样可以提高灵敏度，并可降低高分子量组分的进样口歧视效应。 　　新的安捷伦多模式进样口的价格低于原来的程序升温进样口，可与Agilent 7890A GC、 5975C GC/MS、7683和7693自动进样器，以及CTC Combi PAL自动进样器匹配。 　　“新一代进样器给7890A气相色谱仪增添了非常有用的功能，而价格则比以前的产品更低”安捷伦气相色谱和工作流程自动化营销经理Michael Feeney 说。“用户一直在努力提高仪器能力，减少仪器维护，这款新的多模式进样口正好满足了这些需求。这是安捷伦致力于提高实验室效率的又一个实例。” 　　PTV和反吹： 强强结合 　　采用PTV的一个主要优势就是不需要或者很少需要净化，即可注射高基质样品。在Agilent 7890A GC和5975C GC/MS上与反吹功能结合在一起，将提高效率，并减少维护。 　　“脏”的样品可以进样到GC或GC/MS中。当待测化合物到达检测器时，将气流反向，预柱中的高沸点化合物可从进样口反吹走，使其不能进入分析柱。从而延长色谱柱的使用寿命，减少维护需求。 　　在模拟蒸馏这类应用中，因为不需要将高沸点化合物烘烤出来，样品通量可以提高5倍。 　　微板流路控制是安捷伦的开创性技术，能实现气体流路在气相色谱柱箱内可靠的联结并实现精确的气流方向改变。它使许多有用的功能得到了实现，如，反吹、GC x GC、分流使用多个检测器，以及连接质谱检测器时不用释放真空即可更换色谱柱等。 　　新进样口和标准进样口一样，使用标准的衬管、隔垫、垫圈、螺母和O形圈，因此不需要为其储备特殊备件。 　　如需进一步了解新的安捷伦多模式PTV进样口，请访问www.agilent.com/chem/multimode 　　安捷伦长期致力于GC和GC/MS的创新开发，在制造耐用的仪器方面享有盛誉。安捷伦的前身，惠普公司，于1958年进入气相色谱市场，从那时起就一直是GC和GC/MS产品的领导者。1973年第一次引入微处理器控制，1975年推出世界第一台台式GC/MS系统。1996年，HP 5973推出石英镀金双曲面四极杆质量分析器，实现了仪器稳定性和性能上的突破。1999年安捷伦从惠普分离出来，直至今日，仍在GC和GC/MS的硬件和软件方面不断开拓创新。 　　关于安捷伦科技 　　安捷伦科技(NYSE: A)是全球领先的测量公司，是通信、电子、生命科学和化学分析领域的技术领导者，公司的19,000名员工在110多个国家为客户服务。在2008财政年度，安捷伦的业务净收入为58亿美元。要了解安捷伦科技的信息，请访问：www.agilent.com.cn http://agilent.instrument.com.cn/ 。

酶标仪问世之初，是酶联免疫吸附试验(ELISA)的专用检测仪器。随着科学技术发展和市场需求演变，酶标仪被赋予的功能日益丰富。由最初的吸收光(ABS)检测，到荧光强度(FI)、发光检测(LUMI)，再到荧光偏振(FP)、时间分辨荧光(TRF)等检测技术，酶标仪早已突破了ELISA的范畴，在追“光”道路驰而不息。为帮助广大用户及时了解酶标仪前沿技术、主流品牌与创新产品、市场动态以及相关活动，仪器信息网特别策划了《从光吸收到多功能，酶标仪的“逐光”之路》专题(点击查看)。本期，我们特别邀请到安捷伦大中华区实验室解决方案BioTek 市场经理赵黎明谈一谈BioTek酶标仪创新检测技术及她对酶标仪应用及未来市场的看法。仪器信息网：请点评吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)和化学发光(Lum)等不同酶标仪检测方法的优劣势？赵黎明：对于功能全面的多功能酶标仪而言，可以使用一种检测方法来做多种应用，同时，一种应用也可以通过多种检测方法实现，便于用户根据实验目的、原理、通量、成本以及便利性等因素综合选择合适的检测方法。吸收光是酶标仪最经典和传统的检测方法，优势在于技术路线成熟，商品化试剂盒选择广泛，兼顾定性和定量检测，典型应用包括ELISA，核酸蛋白定量和细胞活性分析（MTT，XTT）。而劣势在于检测目标单一，灵敏度相对低，大多为非均相实验，操作步骤较多，建议搭配洗板机来提高实验效率和数据重复性。荧光强度也是使用相当广泛的检测方法，灵敏度和动态范围远高于吸光度检测，定量准确且可以在蛋白水平或细胞水平中实现多重检测，但大多数荧光强度检测方法存在自发荧光干扰、荧光信号淬灭等问题。正因如此，时间分辨荧光和荧光偏振是在荧光强度检测的基础上衍生出来的更高级的荧光检测方法，对检测设备的要求也更高。通常时间分辨荧光与荧光共振能量转移（FRET）联合使用，即TR-FRET，其一大优势可以设计成一步法的均相体系用来检测分子间的相互作用，因其具有优异灵敏度和特异性常常被用于药筛。同上述提到的方法相比，劣势则是使用成本较高。荧光偏振与TR-FRET 的区别在于荧光偏振是采用荧光探针进行单分子标记，通常是标记小分子。主要应用于小分子和大分子之间的相互作用检测，其特异性不如TR-FRET，并且建立实验体系需要一定的经验，但优点在于成本相对较低，适合大规模化合物初筛，比如皖南医学院陈云雨副教授团队利用荧光偏振技术建立的新冠病毒主蛋白酶抑制剂三明治样高通量筛选模型。另外，值得注意荧光偏振技术需要检测仪器能产生并检测偏振光，通常需要使用滤光片系统。化学发光检测涵盖化学发光及生物发光检测，是一种更灵敏的检测方式。该方法检测动态范围更宽，应用领域也在不断扩大，代表应用包括报告基因检测、ATP 检测等。仪器信息网：请谈谈酶标仪未来技术发展趋势？赵黎明：酶标仪研发历史上出现过多次技术革新，就近几年看，单纯的酶标仪检测技术可以说趋近成熟，但很多技术的应用空间亟待开发，比如筛选成本相对较低的荧光偏振技术。用户需求一定是技术发展的第一生产力，如何帮助用户严谨可靠地解决现有问题并进行更深层次的探索是厂商需要思考的问题，这也是安捷伦BioTek 前进的动力。BioTek Cytation 系列细胞成像多功能微孔板检测仪是一个非常成功的例子，以应用为导向，率先在多功能酶标仪中加入了细胞成像功能，并将Hybrid 设计理念进一步延申。Cytation 系列创新性的将传统的微孔板检测与高通量全自动数字显微成像相结合，支持各种生物化学和成像应用的自动化工作流程，并为用户提供了将标准微孔板检测输出数据与通过成像收集的表型细胞信息进行相互验证的能力，使研究者得以将细胞功能、基因表达、信号通路、离子通道和其他研究提升到一个全新水平。目前酶标仪在检测精度和灵敏度上已经达到了与工业发展相匹配的先进水平，那么下一步我们相信，未来微孔板检测一定是会朝着更加灵活的模块化设计、丰富的应用场景、高效便捷的工作流程上有更长远的进步。仪器信息网：未来中国酶标仪市场的发展前景如何？最看好哪些应用细分？赵黎明：近年来，中国生命科学市场发展十分快速，未来我相信会更加稳健和理性。随着医药研发和学科交叉研究的深入，多功能酶标仪将会占据更多的市场份额，在更多的研究领域发挥作用。除了市场火热的细胞与基因治疗、生物制药（抗体药、小分子药物）、RNA 疫苗研究之外，在交叉学科领域也会有更多的应用，包括合成生物学、材料学、环境安全、食品与健康等，这些领域的实验室也需要进行分子表征或者细胞实验，将给酶标仪带来更多的机遇。仪器信息网：贵司目前主推的酶标仪产品是什么？请您谈谈该产品的核心竞争力。赵黎明：作为微孔板仪器和软件研发、生产及销售的全球领先企业，BioTek拥有一系列微孔板检测、成像、液体处理和配套自动化设备。目前主推产品是Synergy系列多功能酶标仪，该经典系列经过数年的硬件与软件升级演化出Synergy LX，Synergy HTX，Synergy H1 和Synergy Neo2四个型号，能够满足用户不同的使用需求。Synergy H1: 模块化设计确保用于着眼于当前需求，并可随着实验室工作流程的演变，增加检测模式、气体控制和双试剂加样器。Synergy 系列多功能酶标仪核心价值体现在独特的Hybrid 设计，吸收光功能均采用灵活光栅系统，满足全光谱范围内的任意紫外-可见吸收光检测需求，用户使用时仅需输入检测波长范围内的任意波长即可，非常方便快捷。Synergy H1 和Synergy Neo2的荧光和发光检测则专门设计了光栅和滤光片两套独立系统，满足用户根据实验需求灵活选择检测方式，比如对灵敏度要求较高的荧光偏振、均相时间分辨荧光等实验，用户可以选择滤光片模块；而荧光波长扫描等实验，可以选择光栅模块。Synergy LX和Synergy HTX作为两款入门级的多功能酶标仪，非常适合荧光检测波长相对固定的用户；Syenrgy H1 则更适合应用更为丰富的实验室；而对药筛实验室或者对检测通量和速度有极高要求的实验来说，Synergy Neo2 是最好的选择。Hybrid 技术为微孔板检测仪提供灵活性和高性能此外，BioTek还有一系列重要的酶标仪产品，即Cytation系列，该系列产品在上述提到的Synergy系列产品优势的基础上，为用户提供了丰富的微孔板成像检测的选择。仪器信息网：贵公司酶标仪主要应用哪些领域的哪些实验环节？赵黎明：BioTek 微孔板检测设备对耗材和试剂拥有最大的兼容性，精细的辅助设计（温控、自动进样装置及气体控制装置等）和简洁的光路设计让每一款酶标仪都几乎成为了经典，在科研领域和工业领域都有着非常广泛的应用，比如疾病研究中的细胞学分析、功能基因组、蛋白质研究、代谢功能、信号通路、靶点筛选、耐药机制、药敏测试；疫苗研究中的中和抗体检测、递送载体全生命周期质控；生物制药领域中高通量药物筛选、生物学活性检测、产品质量控制、化合物评价、自动化整合；农牧业以及环境研究中的化合物残留、动物疫病和食品安全等都为用户提供了稳定可靠的解决方案。仪器信息网：请介绍贵公司酶标仪发展历程中里程碑事件。赵黎明：BioTek（现为Agilent BioTek）创立于 1968 年，创始人为佛蒙特大学医学院生理学家 Norman Alpert 博士。怀揣向新兴生命科学市场进军的美好愿望和抢抓非同位素免疫测定发展机遇的决心，BioTek于 1981 年成功推出了第一款微孔板酶标仪。随着时间的推移，BioTek 逐渐发展成为以微孔板为基础，旨在提高医疗、制药、农业和研究等领域客户生产效率的解决方案市场的全球领先者之一。1996年，经过多次技术迭代升级的ELx 808自动化酶标仪成为了日后内毒素检测的标准设备，直到近几年才逐渐被多功能酶标仪取代。2002年，BioTek首款Synergy HT（HTX 的上一代机型）多功能酶标仪问世，随后十年相继推出了包括H1 和 Neo在内的6款Synergy系列多功能酶标仪，以满足不同实验室的使用需求。其中在2007年，Hybrid技术首次被提出，并于2010年得到重要升级，完善了四光栅和无光纤耦合式滤光片模块的双系统模式。为打破传统酶标仪在细胞实验中的局限性，BioTek于2013年推出了重磅产品——Cytation 3 细胞成像多功能微孔板检测仪。将酶标仪与自动化显微镜相结合，让用户在细胞实验中成功实现“Grow it”“Read it”“See it”，帮助研究人员完成从细胞培养到图像采集再到获得可发表数据的全过程。同年，Cytation 3因其卓越性能和出色表现获得了2013 Drug Discovery Product of the Year - Scientists’ Choice Award。随后八年，BioTek 持续深耕该产品领域，先后共推出了8款微孔板成像检测产品，在2D 细胞、3D 细胞以及类器官与模式生物研究中得到广泛的应用。初代产品——Cytation 3 细胞成像多功能微孔板检测仪2015年，BioTek发布了带有机械手的BioSpa 8自动化培养箱，可以与微孔板检测系统和液体处理系统对接，将活细胞自动化培养、图像及数据采集和数据分析的通量提升到新的水平。2021年，BioTek Cytation C10上市，率先在基于微孔板的多模式活细胞检测系统上实现了共聚焦成像，使细胞成像微孔板检测系统的应用得到了进一步拓展。今年，恰逢Cytation 3 发布十周年，安捷伦在上海隆重举办了首届细胞分析创新峰会，并为享誉全球科研学术界的安捷伦 BioTek Cytation 产品家族面世十周年举办了庆典。300 多位来自多领域的专家、学者及科研人员到会，与安捷伦高层以及技术工程师共同探讨了先进的细胞检测、成像与分析技术在多学科中的深度应用。未来，安捷伦BioTek 将继续深耕微孔板检测技术，并不断的完善周边配套设备，联合安捷伦其他产品线为用户提供更加灵活、全面的解决方案。首届细胞分析创新峰会暨Cytation 发布十周年庆典安捷伦大中华区实验室解决方案BioTek 市场经理 赵黎明赵黎明女士，分子生物学硕士，安捷伦大中华区实验室解决方案BioTek 市场经理，在分子生物学、细胞生物学、免疫学等领域有近十年的技术推广和支持服务经验。如有技术干货、科研成果、酶标仪使用心得等内容，欢迎投稿，投稿文章将在《从光吸收到多功能，酶标仪的“逐光”之路》专题（点击查看）展示并在仪器信息网相关渠道推广。投稿邮箱：zhaoyw@instrument.com.cn，关于征稿内容要求也可邮件咨询或电话联系：13331136682（同微信）。

安捷伦强阳离子交换柱/高效液相色谱快速测定 牛奶及奶粉中的三聚氰胺 仪器配置： 液相色谱仪 安捷伦1120液相色谱仪：单元泵梯度泵、标准自动进样器、柱温箱、紫外检测器 乙腈为迪马公司HPLC级乙腈 超纯水为经Milli-Q系统净化处理过的纯净水 1. 色谱柱： ZORBAX 300SCX 4.6× 150mm，5um； 检测三聚氰胺的方法主要包括LC、LC/MS和GC/MS方法。在液相色谱中，由于三聚氰胺极性强，在反相柱上难以保留，FDA方法采用反相离子对模式来加强保留，但离子对模式对色谱柱的损伤大、平衡缓慢，且不适宜液质联用。本文采用ZORBAX SCX强阳离子交换谱柱分离和检测三聚氰胺样品，流动相中不需加离子对试剂，获得了理想的保留和分离。 图1. 三聚氰胺结构式 1.实验及方法 1.1仪器 本实验使用安捷伦1120高效液相色谱系统 1.2 试剂与标样 乙腈为HPLC级乙腈 超纯水为经Milli-Q系统净化处理过的纯净水 三聚氰胺标准贮备液：浓度1mg/mL，溶剂为乙腈/水（1：1） 标准工作液：逐级稀释三聚氰胺标准贮备液，以乙腈/水（1：1）定容，制成浓度分别 为0.5ug/mL, 1.0ug/mL, 5.0ug/mL, 10ug/mL, 50ug/mL, 100ug/mL的标准工作液 1.3 样品制备 准确称取约5g样品，加入50mL乙腈/水（1：1），涡旋混合，用0.45&mu m的滤膜过滤。 1.4色谱条件 色谱柱为ZORBAX 300SCX 4.6× 150mm，5um；检测波长为240nm；流速：1mL/min；柱温 30℃；进样量为10&mu L。 流动相配制：首先配制50mmol/L 甲酸铵溶液，用甲酸调节pH值至pH=3.0；而后按15：85的比例分别量取一定体积的甲酸铵缓冲液和乙腈，混合均匀后使用。 2．结果与讨论 2.1 保留与峰形 ZORBAX 300SCX为硅胶基质苯磺酸键合硅胶填料，除了具备阳离子交换能力，键合相中的苯环结构也提供一定反相作用机理，本方法开发过程中主要从水相的缓冲盐浓度、pH、水相/有机相比例等方面进行了精心优化，获得了良好的保留和柱效。图2为10ug/mL三聚氰胺标样色谱图，计算得到USP拖尾因子Tf=0.97,理论塔板数为14,11。 2.2 线性范围与检出限 以0.5ug/mL, 1.0ug/mL, 5.0ug/mL, 10ug/mL, 50ug/mL, 100ug/mL标准工作液绘制标准曲线，得到线性回归方程y = 15.054x，相关系数R2 = 0.9998。计算检出限约为0.05ug/mL，实际分析0.05ug/mL标样，信噪比3.9（图2）。 2.3 实际样品分析 离子交换模式对可离子化目标化合物具有很好的选择性，本方法考察了未经SPE净化处理的奶粉样品（图5）。如图可见，样品中的基质干扰物在SCX色谱柱上很少保留，多在前面流出，且三聚氰胺与其附近的一主要干扰峰的分离度很好，非常有利于三聚氰胺准确定量。 图2. 奶粉样品谱图 3 结论 本方法采用ZORBAX 300SCX强阳离子交换色谱柱分析三聚氰胺，在不含离子对试剂的简单流动相下能够很好地控制三聚氰胺的保留；且该方法对三聚氰胺的选择性好，实际样品即使不经过SPE净化，也可获得三聚氰胺与基质干扰物的良好分离，为奶制品中的三聚氰胺检测提供了一个的快速、简便而可靠的液相新方法。 备注： 本检测方法是与我公司推荐的检测奶粉中三聚氰胺豪华版完美结合，做到检测的稳定和准确。订购豪华版的用户可参考此方法对三聚氰胺进行检测。 详细配置清单 1套 液相色谱仪 Agilent 1120/4287AA(单泵+柱温箱+自动进样器+中文软件) 1支 液相色谱柱 Zorbax 300SCX 150*4.6/5um 1瓶 三聚氰胺标准品 100mg 99.5% 1台 超声波清洗器 KQ-2200(3L) 1台 溶剂过滤器 M-50/DL-01(1000ml) 1盒 有机系针式样品过滤器 &Phi 13mm*0.45um(100只/包） 1盒 有机系微孔滤膜（偏氮膜） &Phi 50mm*0.45um(100片/盒） 附赠 三聚氰胺分析方法手册 1 份 另购 甲酸胺(AR级) 瓶 1 甲酸(AR级) 瓶 1 高纯乙腈 瓶 1 如有疑问请拨打热线电话0571-56803999 我们将竭诚为您服务 公司网址：www.kexiao.com