黄曲霉毒素测定标准

北京绿百草科技专业提供黄曲霉毒素试剂盒和黄曲霉毒素混合标准品以及测定方法 Cosmosil 5C18-MS-11 关键词：黄曲霉毒素试剂盒，黄曲霉毒素混合标准品，cosmosil 5C18-MS-11，北京绿百草科技，荧光检测器 据2010年中国药典规定：以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水为流动相，流速为每分0.8mL；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为0.05%的碘溶液，衍生化泵流速每分钟0.3mL，衍生化温度70℃；以荧光检测器检测。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5.（2010年中国药典一部 附录61） 需要详细的信息请和绿百草科技联系：010-51659766 登录网站获得更多产品信息:www.greenherbs.com.cn

简介 AFT免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2检测的净化。可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA的定量分析，适用于谷物，食品，饲料等的样品净化过程。柱容量 约200ng 黄曲霉毒素储存条件 2-8℃冷藏保存，不可冷冻1 用途用于实验室净化样品提取物以进行进一步分析2 概要黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的霉变菌，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物。污染粮食、油料作物的种子，其中以花生、玉米易被污染，另外在小麦、高粱、巴西坚果、豆类和大米等重要粮食中也经常被检出。黄曲霉毒素热稳定性很高，一旦产生便难以除去。对动物、植物和微生物具有很强的毒性，致癌力强，还能引起突变和导致畸形。黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一，也是胃癌，肠癌等疾病的主要原因，对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品，饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。3 原理测定的基础是抗原抗体反应，免疫亲和柱中含有和黄曲霉毒素抗体结合在一起的凝胶，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内黄曲霉毒素与抗体结合，其他的无关物质不会结合而直接通过免疫亲和柱，之后洗涤免疫亲和柱完全除去没有被结合的其他无关物质。后加入甲醇将黄曲霉毒素释放，然后注入到分析仪器中进行进一步的检测。4 提供的试剂l 25支/盒免疫亲和柱，规格：1ml/3ml5 操作者应注意事项l 黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。l 使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液宜用5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡过夜。l 不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。l 亲和柱于2-8℃冷藏保存，不可冷冻l 使用前，免疫亲和层析柱需回至室温（22~25℃）6 操作流程（符合GB/T 18979-2003国标方法）l 粉碎好的样品过20目筛并在取样前彻底混合，不立即分析的样品应放在冰箱中储存。l 称取20g粉碎样品及4g氯化钠，加入100ml 70%甲醇/水。l 高速均质约2分钟，或震荡器震荡约30分钟，l 过滤样品至少10ml。l 取10ml滤液加入20ml水，彻底混合。l 用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取15ml准备加入到免疫亲和柱中过柱。l 将10ml注射器连接于免疫亲和柱上端。l 处理好的样品液15ml以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。l 加10ml水淋洗柱子两次，弃掉流出的液体，l 利用真空设备压入空气或用注射器吹干柱子中的水。l 加入1ml甲醇缓慢洗脱，流速约为2-3秒每滴。l 收集全部洗脱液于干净的比色皿或其他容器中用于检测。7 操作流程图8 液相色谱测定条件● 激发/发射波长：360nm/440nm● 流动相：甲醇-水（45+55）● 流速：0.8mL/min● 进样量：20ul ● 柱温：30°C ● 反应时间：10min用进样器吸取20µ L黄曲霉毒素标准工作液注入HPLC色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰高或峰面积），得到黄曲霉毒素B1、B2、 G1、G2标准溶液HPLC色谱图黄曲霉毒素多功能净化柱黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2/玉米赤霉烯酮25支/盒单端孢霉烯族毒素多功能净化柱T-2毒素、HT-2毒素25支/盒展青霉素多功能净化柱展青毒素25支/盒赭曲霉毒素多功能净化柱赭曲霉毒素25支/盒呕吐毒素多功能净化柱呕吐毒素25支/盒

一、产品用途：本产品可选择性吸附样品提取液中的黄曲霉毒素，从而对样品液中的黄曲霉毒素（B1,B2,G1,G2）起到非常针对性的纯化作用，过柱纯化后的样品液纯度被提高，可用于不同分析方法的测定。二、产品概述：黄曲霉毒素（Aflatoxin）是黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物，被世界卫生组织癌症研究机构划分为1类致癌物，同时又是一种毒性极强的剧毒物质。广泛存在于各种食物中，如玉米、花生、大米和小麦等谷物及其副产品。饲料中的黄曲霉毒素B1经过动物代谢后产生的黄曲霉毒素M1仍然具有很强的毒性和致癌性，广泛存在于牛奶、血液、组织等食品中。黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一，也是胃癌，肠癌等疾病的主要原因，对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品和饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。三、反应原理：本产品测定的基础是抗原抗体反应。黄曲霉毒素抗体固定于柱内凝胶上，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢通过黄曲霉毒素免疫亲和柱，在柱内黄曲霉毒素与抗体特异性结合，之后洗涤免疫亲和柱，除去未结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素，注入到分析仪器中进行检测。四、产品包装组成：每盒中包含25支黄曲霉毒素总量免疫亲和柱及1套相应说明书。五、IAC性能：1、性能参数柱容量≥200ng 黄曲霉毒素（回收率）90%±5%2、交叉反应率黄曲霉毒素B1100%黄曲霉毒素G1101%黄曲霉毒素B286%黄曲霉毒素G283%六、注意事项：1、黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。2、使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡过夜。3、不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。4、免疫亲和柱不使用时要2-8℃保存，不可冻存。5、使用前，免疫亲和柱需回至室温（22-25℃）。6、取样量：根据实际情况可以适当增减，但不可太少，同时提取液体积要按比例随之改变。7、pH：上柱液pH要在6~8之间，若偏离此范围需用盐酸或氢氧化钠调节pH。七、需要的材料但盒中不提供：设备器皿耗材试剂HPLC泵流操作架高速均质器高速粉碎机量筒（50/200mL）漏斗收集瓶容量瓶(100mL/1L)微量移液器：单道定量滤纸玻璃微纤维滤纸离心管(50mL)色谱级甲醇蒸馏水AFT标准品八、试剂配制：1、提取液：甲醇-水（7:3）移取700mL甲醇，加蒸馏水300mL混合。九、样品处理：真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以要保证样品收集和取样的代表性。（一）花生、大米、玉米、小麦及其制品，植物油脂和饲料1、称取25g粉碎的样品（植物油脂直接取样）移至均质器中，再称取5g氯化钠加入均质器中；2、加125mL甲醇-水（7:3）溶液高速均质2min；3、4000r/min离心5min或用滤纸过滤；4、取10mL滤液并加入30mL蒸馏水稀释；5、用玻璃微纤维滤纸过滤，取过滤后液体待用；（二）酱油1、称取50g样品与2.5g氯化钠加入均质器中；2、加100mL甲醇-水（7:3）溶液高速均质2min；3、4000r/min离心5min或用滤纸过滤；4、取10mL滤液并加入40mL蒸馏水稀释；5、用玻璃微纤维滤纸过滤,取过滤后液体待用；（三）食醋1、称取5g样品于25mL容量瓶中，加1.0g氯化钠，用pH7.0磷酸盐缓冲溶液稀释定容至25.0mL；2、4000r/min离心5min或用滤纸过滤；3、取10mL滤液并加入10mL蒸馏水稀释；4、用玻璃微纤维滤纸过滤,取过滤后液体待用；注意：pH7.0磷酸盐缓冲溶液：称取8g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL蒸馏水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用蒸馏水稀释定容至1000mL。十、操作程序：符合GB/T 18979-2003国标方法1、连接:将免疫亲和柱后盖取下，用剪刀剪开，重新盖上，连接于泵流操作架的30mL注射器下；2、上样:准确移取10mL样品提取液转移至注射器内，打开下端堵头；3、富集:将空气压力泵与注射器连接，调节压力使样品提取液缓慢通过免疫亲和柱，建议重力过柱；4、洗涤:用20mL蒸馏水分两次加压清洗，弃去全部流出液，并使2-3mL空气通过柱体；5、洗脱:为保证洗脱充分，建议以2.0mL色谱级甲醇分两步进行洗脱，重力洗脱即可。首先，将免疫亲和柱内液体排干，下端盖上堵头，加1.0mL甲醇于柱管内孵育60秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡)，重力过柱，当溶剂通过柱子后；再加入1.0mL甲醇重复上述洗脱步骤，最后轻微加压排净洗脱液，合并洗脱液供检测用。十一、操作流程图示产品信息：产品名称：PriboFast® 黄曲霉素总量免疫亲和柱产品货号：PriboFast® IAC-011-3产品描述：黄曲霉毒素单克隆抗体包装单位：25支/盒储存条件：2～8℃，切勿冷冻保质期：18个月本公司可提供的真菌毒素检测产品类型产品名称ELISA酶联免疫试剂盒黄曲霉毒素总量（AFT）黄曲霉毒素B1（AFB1）黄曲霉毒素M1（AFM1）呕吐毒素（DON）玉米赤霉烯酮（ZON）伏马毒素（FUM）T-2毒素（T-2）免疫亲和柱黄曲霉毒素总量（AFT）黄曲霉毒素B1（AFB1）黄曲霉毒素M1（AFM1）呕吐毒素（DON）玉米赤霉烯酮（ZON）伏马毒素（FUM）T-2毒素（T-2）赭曲霉毒素（OTA）真菌毒素六合一免疫亲和柱可定制多毒素复合免疫亲和柱多功能净化柱MFC220（Don+Niv）MFC221（FUMB1+B2+B3）MFC226（Aft+Zon）MFC227（Aft+T-2）MFC228（Aft+Pat）MFC229（Och A+B）胶体金快速检测卡黄曲霉毒素B1（AFB1）黄曲霉毒素M1（AFM1）呕吐毒素（DON）玉米赤霉烯酮（ZON）三聚氰胺注：本公司提供毒素固体液体标准品及质控样品