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液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区,其理想状态是把细胞传送到激光束的中心。而且在特定时间内,应该只有一个细胞或粒子通过激光束。 因此,必须在样品室内把细胞注入鞘液流。样品室是液流系统的核心部件,在样品室内细胞液柱聚焦于鞘液中心,细胞在此与激光相交。样品室内充满鞘液,根据层流原理,在鞘液的约束下,细胞排成单列出样品室喷嘴口,并被鞘液包绕形成细胞液柱。这种同轴流动的设计,使得样品流和鞘液流形成的流束始终保持着一种分层鞘流的状态,这个过程称为流体聚焦。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412251405_528922_2648817_3.jpg图1 液流系统 单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出,粒子或细胞在流动室内与激光相交,此交点为测量区。 流动室是仪器核心部件,被测样品在此与激光相交。流动室由石英玻璃钢制成,并在石英玻璃中央开一个孔径为430μm×180μm的长方形孔,供细胞单个流过,检测区在该孔的中心,这种流动室的光学特性良好,流速较慢,因而细胞受照时间长,可收集的细胞信号光通量大,配上广角收集透镜,可获得很高的检测灵敏度和测量精度。 流动室内充满了鞘液,鞘液的作用是将样品流环包,鞘液流是一种稳定的液体流动,鞘液以匀速运动流过流动室,在整个系统运行中流速是不变的,样品流在鞘液的环包下形成流体力学聚焦,使样品流不会脱离液流的轴线方向,并且保证每个细胞通过激光照射区的时间相等,从而得到准确的细胞荧光信息。
流式细胞胞仪的分析及分选原理流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和数字信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成。在对细胞悬液中的单个细胞或其超微结构进行多参数快速自动分析过程中,每秒钟能测量数千个至数万个细胞,能在分析过程中按实验设计要求对特定细胞进行分析,带细胞分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞,用于培养或进一步研究。一、工作原理流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术,将荧光显微镜的激发光源改为激光,使其具有了更好的单色性与激发[/
?流式细胞仪的检测原理?包括以下几个方面: ?液流系统?:流式细胞仪吸取细胞悬液后,细胞在气体的压力下进入流动室;而鞘液在高压下从鞘液管喷出,包裹着细胞高速流动形成鞘流,使细胞排成单列依次经过仪器的测量区?。 ?激光光源及光束形成系统?:流式细胞仪大多采用氩离子气体激光器产生激光(波长488nm),在细胞经过测量区的时候,激光垂直照射被荧光染色的细胞,荧光染料被激发从而产生荧光信号和散射光信号。散射光信号分为前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC),FSC反映细胞的大小,而SSC反映细胞内部的结构和颗粒性质?。 ?光学系统?:当不同的荧光染料受到激光激发后会发射不同波长的荧光,这些荧光与SSC一起沿激光90°方向经过各种滤光片以到达对应的通道。滤光片有长通、短通、带通滤光片,借助滤光片可以把不同波长的荧光信号送入到不同的电子检测器?。