分析半制备系统

项目编号：HFUT-DX-2022-002/ZB202201677项目名称：合肥工业大学扫描电镜、分析及半制备液相色谱系统、旋转流变仪设备采购项目预算金额：151.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：151.0000000 万元（人民币）采购需求：合肥工业大学扫描电镜、分析及半制备液相色谱系统、旋转流变仪设备采购项目，详见采购需求。合同履行期限：合同签订后，120个日历日内完成供货、安装和调试。本项目( 不接受 )联合体投标。

岛津分析制备双流路系统制备液相系统常用于混合样品中目标化合物的分离纯化，建立合适高效的分析条件是获取高纯度目标化合物的重要环节之一。分析条件的优化通常在分析规模上进行，这一过程包含流动相筛选、梯度优化等，各环节都需要消耗大量时间。此外，样品回收后纯度复测通常需要手动转移至进样器完成，增加了人力成本。因此，本文以氢化可的松的纯化过程为例，展示岛津分析制备双流路系统搭配LabSolutions MD方法开发软件，将条件优化、放大制备、纯度复测等过程集中于单一系统中，以完成整个工作流程。 图1 制备纯化的工作流程 岛津分析制备双流路系统 单一系统实现从分析到制备的方法放大及纯度和回收率的确认 利用方法开发软件（LabSolutions MD）自动创建分析方案并实现分离条件优化 LH-40液体处理器可直接将馏分再进样于分析流路，完成纯度检测SHIMADZU• ✦分析规模下分离条件的优化✦• 条件优化前，氢化可的松与主要杂质水杨酸之间非常接近（图2）。此时如果增加上样量可能影响两种化合物之间分离进一步恶化，从而导致回收率降低。因此，优化分离条件至关重要。常规的优化方式，往往需要人为设置多个方法来逐个验证，消耗大量时间且过程复杂繁琐。LabSolutions MD是一款支持方法开发的专用软件，通过对不同参数的设定，可自动生成分析时间表，提高优化效率。在本案例中，设置了三个初始浓度及三种不同水平梯度，可生成九种分析方案（图3），获得如图4所示的分析结果。其中方案③分离度最好。 图2 分离条件优化前色谱图 图3 LabSolutions MD自动生成分析方案 图4 LabSolutions MD优化分离条件结果方法③为最优选择SHIMADZU• ✦上样量的优化✦• 在前序优化条件下，分别注入10、20、30、40、50和100µL的氢化可的松溶液（10000mg/L）。在100μL进样时，氢化可的松和水杨酸的分离并不充分（图5中蓝色椭圆内），同时出现了一个未知的小峰（图5中红色圆圈），表明氢化可的松没有完全分离。而当进样量为50µL时，氢化可的松与相邻峰分离良好。因此，采用50µL为分析条件进样量。完成上述工作后，根据制备柱及分析柱之间横截面积比将已优化分析条件放大至制备规模，进行制备纯化过程。 图5 不同上样量的优化结果SHIMADZU• ✦目标化合物的收集✦• 当完成条件优化后，将方法放大至制备规模进行目标化合物的收集。使用紫外检测器信号触发收集。放大后，氢化可的松与水杨酸之间保持充分分离的状态（图6）。 图6 UV触发制备色谱图SHIMADZU• ✦纯度及回收率的确认✦• 利用LH-40可进样的特点，将已收集的氢化可的松重新注入分析流路进行检测，同时将氢化可的松标准混合溶液进样分析。根据标准品及回收目标化合物纯度色谱图，采用面积归一化法，获得的目标化合物纯度以及回收率均保持在较高的水平。 图7 纯度检测色谱图 SHIMADZU• ✦总结✦• 利用岛津分析制备双流路系统与LabSolutions MD软件的高效结合，可以将制备纯化分析的全过程统一于单一系统完成。该流程包括在分析规模上优化分离条件、扩大分馏规模以及确认纯度和回收率等。可以有效的提高制备效率，同时降低成本，减少实验过程中人为因素的干扰。下期预告通过紫外信号触发的制备色谱图中，在氢化可的松的底部有一个非常小的峰（如图6红色框内），表明在最终的分馏样品中可能仍然有杂质的存在，那面对这样的问题，我们又将如何解决？将在下一期介绍双信号同时触发收集进一步提高回收纯度及回收率的相关方案。 本文内容非商业广告，仅供专业人士参考。

高效液相色谱仪具有高分辨率、高灵敏度、速度快，色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、天然产物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。 东西分析从用户角度出发，研究、生产的高效液相色谱仪（HPLC）通过更换流通池，实现对样品的分析及少量样品的制备的功能，一机两用，为用户节省更大的成本和时间，广泛应用到物质的定性、定量分析及少量样品的制备，如药物和少量天然产物的半制备分析、有机物转化产物（中间体）分离纯化，新兴有机污染物及其代谢转化产物的分离富集和纯化，复杂基质（沉积物、生物样品等）的前处理净化等。LC-5520分析兼半制备高效液相色谱仪微机反控，轻松实现分析条件设置；积木式结构设计，立体式柱温箱；可快速实现分析型与半制备液相的互换；可连接柱后衍生，可兼容UV\ELSD等检测器。高性能可变波长紫外-可见光检测器抑制示差拆光技术，保证低噪声和漂移；多波长10段时间程序编程，全波段停泵扫描，可精确选择波长。高精度立式柱温箱可容纳任意两根分析色谱柱，可安装半制备色谱柱；色谱柱安装更换更人性化，兼顾了半制备色谱柱的安装需求。高压输液泵双柱塞往复式大冲程高压泵，精度高，流量范围宽；程序控制实现双泵的梯度洗脱 具有柱塞杆在线自动清洗功能。色谱工作站中英文界面，更好地满足国内外用户需求；强大的数据处理功能，可实现各种定量算法；记录谱图原始采集数据及相关信息，遵循GLP规范。应用案例紫外检测器测定多环芳烃图1 16种多环芳烃标样谱图（3ug/mL）色谱柱：Inertsil C18 4.6 mm×250mm 流动相：ACN和H2O（梯度洗脱） 紫外检测器：多波段时间编程紫外检测器测定铁皮石斛中甘露糖图2 铁皮石斛中甘露糖的测定谱图 色谱柱：Inertsil C18 4.6 mm×250mm 流动相：ACN-0.02mol/L:NH4OAc：20：80 检测波长：250nm 紫外检测器测定工业用精对苯二甲酸中对羧基苯甲醛、对甲基苯甲酸图 3 工业用精对苯二甲酸中对羧基苯甲醛、对甲基苯甲酸测定谱图色谱柱：Inertsil C18 4.6 mm×250mm 流动相：MeOH-0.02mol/L HOAc 1：9 检测波长：254nm紫外检测器测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷图4 双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的测定谱图流动相：ACN-0.4%H3PO4 梯度洗脱 色谱柱：Inertsil C18 4.6mm×250mm 检测波长：324nm 紫外检测器测定盐酸头孢噻呋注射液中盐酸头孢噻呋图5 盐酸头孢噻呋注射液中盐酸头孢噻呋的测定谱图色谱柱：Inertsil C18 4.6mm×250mm 流动相：H2O-ACN-TFA(950:50:1200:800:1)； 检测波长：254nm 蒸发光散射检测器测定黄芪甲苷图6 250ppm黄芪甲苷标准品测试谱图色谱柱：Inertsil C18 4.6x250mm 流动相：35%ACN流速：1mL/min 进样量：20uL漂移管温度：70℃ 气体流速：900mL/min蒸发光散射检测器测定齐墩果酸、熊果酸图7 50ppm齐墩果酸和100ppm熊果酸标样测试谱图色谱柱：Inertsil C18 4.6×250mm 流动相：MeOH-0.2%HOAc(88:12) 流速：1mL/min 进样量：20μL漂移管温度：60℃ 气体流速：900mL/min蒸发光散射检测器测定银杏叶提取物图8 银杏叶提取物标样测试谱图色谱柱：Inertsil C18 4.6×250mm流动相：MeOH-THF-H2O(25:10:65)漂移管温度：65℃ 气体流速：900ml/min 进样量：20uL 样 品：银杏内酯A 236ppm 银杏内酯B 92ppm银杏内酯C 176ppm 白果内酯 252ppm